多特异性抗体及其制备和使用方法技术

本申请提供了具有N‑末端和C‑末端的三特异性抗体单体，其从N‑末端到C‑末端依次包含在N‑末端的第一scFv结构域、Fab结构域、Fc结构域和在C‑末端的第二scFv结构域。在一个实施方案中，第一scFv结构域、Fab结构域和第二scFv结构域各自具有针对不同抗原的结合特异性。

Multispecific antibody and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多特异性抗体及其制备和使用方法相关申请的交叉引用本申请主张2017年6月25日提交的美国临时专利申请No.62524554的权益，该申请通过引用以其整体明确地并入本文。
本公开一般涉及生物治疗
，且更具体地涉及制备和使用多特异性抗体。
技术介绍
癌细胞发展了各种策略以避免宿主免疫系统的破坏和消除。一种主要机制是免疫编辑，其中针对原始癌症的免疫应答提供免疫压力以选择原始癌细胞的变体，所述变体通过下调肿瘤特异性抗原的主要组织相容性复合物(MHC)呈递而不被免疫系统识别。另一种机制存在于肿瘤微环境中，其中细胞，如T调节细胞(Treg)或髓源性衍生抑制细胞(MDSC)，通过产生诸如转化生长因子β(TGFβ)或白介素-10(IL-10)的免疫抑制细胞因子来主动抑制细胞毒性T细胞或天然杀伤细胞的细胞溶解活性。此外，在肿瘤微环境中，癌细胞通常表达一种或多种“免疫检查点”受体或分子，例如程序性死亡配体1(PD-L1)，其结合T细胞上的抑制性受体，例如程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)，其在下调免疫应答和促进自身耐受性中起重要作用。[Vinay等人，2015，Semin.癌症生物学(CancerBiol.)(35)：S185-S198，Dunnet等，2004，免疫(Immunity)，21(2)：137-48；Adachi&Tamada，2015，癌症科学(CancerSci.)，106(8)：945-50]。随着肿瘤逃避免疫系统识别的机制继续被更好地了解，最近出现了靶向这些机制的新治疗方式。2011年3月25日，美国食品和药品管理局(FDA)批准了用于治疗不可切除或转移性黑素瘤的易普利姆玛单抗(ipilimumab)注射剂(Yervoy，Bristol-MyersSquibb)。Yrevoy与活化T细胞上表达的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)结合并阻断抗原呈递细胞上CTLA-4与CD80/86的相互作用，从而阻断通过CTLA-4递送到T细胞中的阴性或抑制性信号，导致抗原特异性T细胞的再活化，这在许多患者中导致肿瘤的根除。2014年几年后，FDA批准Keytruda(派姆单抗(Pembrolizumab)，默克公司)和Opdivo(纳武单抗(Nivolumab)，百时美施贵宝)用于治疗晚期黑素瘤。这些单克隆抗体结合在活化和/或耗尽的T细胞上表达的PD-1，并阻断PD-1与在肿瘤上表达的PD-L1的相互作用，从而消除通过PD-1进入T细胞的抑制信号，导致抗原特异性T细胞的再活化，这在许多患者中再次导致肿瘤的根除。从那时起，已经进行了另外的临床试验，比较单一单克隆抗体Yervoy与单克隆抗体Yervoy和Opdivo的组合对晚期黑素瘤的治疗，显示在用抗体组合治疗的患者中总存活和无进展存活的改善。(Hodi等人，2016，柳叶刀·肿瘤学(LancetOncol).17(11):1558-1568，Hellman等人，2018，肿瘤细胞(CancerCell)33(5)：853-861)。然而，由于许多临床试验已经显示出使用对一种或多种免疫检查点分子具有特异性的单克隆抗体治疗癌症患者的极大益处，数据已经显示出只有那些具有产生被抗原特异性T细胞识别的新T细胞表位的高突变负荷的患者显示出临床应答(Snyder等人，2014，NEJM371：2189-2199)。具有低肿瘤突变负荷的那些患者大部分不显示客观的临床反应(Snyder等人，2014，NEJM371：2189-2199，Hellman等人，2018，肿瘤细胞(CancerCell)33(5)：853-861)。近年来，其它团队已经开发了不需要存在通过抗原呈递细胞的新表位呈递来活化T细胞的替代方法。一个实例是双特异性抗体的开发，其中对肿瘤相关抗原如CD19有特异性的抗体的结合结构域与T细胞上CD3特异的抗体结合结构域连接，从而产生双特异性T细胞结合剂或咬合分子。在2014年，FDA批准了称为Blinotumumab的双特异性抗体用于治疗前体B细胞急性成淋巴细胞白血病。Blinotumumab将对白血病细胞上表达的CD19有特异性的scFv与对T细胞上表达的CD3有特异性的scFv连接起来(Bejnijamin和Stein2016，TherAdvHematol7(3)：142-146)。然而，尽管复发或顽固性急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的初始应答率>50％，但许多患者在用Blinotumumab成功治疗后耐受Blinotumumab治疗或复发。有证据表明，对Blinotumumab的抗性或Blinotumumab治疗后的复发归因于在肿瘤细胞上表达的免疫检查点抑制分子的表达，如PD-L1，其通过在活化的T细胞上表达的PD-1驱动抑制信号(Feucht等人，2016，肿瘤标靶(Oncotarget7)(47)：76902-76919)。在对耐受Blinotumumab治疗的患者的病例研究中，进行第二轮Blinotumumab治疗，但加入对PD-1有特异性并阻断T细胞表达的PD-1与肿瘤细胞表达的PD-L1的相互作用的单克隆抗体Pembrolizumab(Keytruda，默克公司)，导致在这位患者中骨髓中肿瘤细胞的显著应答和从45％减少到小于5％(Feucht等人，2016，Oncotarget7(47)：76902-76919)。这些结果表明，与任一单独的试剂相比，将双特异性咬合分子与一种或多种单克隆抗体组合可显著增加临床活性。
技术实现思路
一方面，本申请提供了三特异性抗体单体，其抗原结合片段和多特异性抗体。在一个实施方案中，具有N-末端和C-末端的三特异性抗体单体从N-末端到C-末端依次包含N-末端的第一scFv结构域、Fab结构域、Fc结构域和C-末端的第二scFv结构域。第一scFv结构域、Fab结构域和第二scFv结构域各自具有针对不同抗原的结合特异性。抗原可以是肿瘤抗原、免疫信号抗原或其组合。在一个实施方案中，第一scFv结构域、Fab结构域和第二scFv结构域各自具有针对肿瘤抗原的结合特异性。在一个实施方案中，第一scFv结构域、Fab结构域和第二scFv结构域各自具有针对免疫信号抗原的结合特异性。在一个实施方案中，第一scFv结构域具有针对肿瘤抗原的结合特异性。在一个实施方案中，第一scFv结构域具有针对免疫信号抗原的结合特异性。在一个实施方案中，Fab结构域具有针对肿瘤抗原的结合特异性。在一个实施方案中，Fab结构域具有针对免疫信号抗原的结合特异性。在一个实施方案中，第二scFv结构域具有针对肿瘤抗原的结合特异性。在一个实施方案中，第二scFv结构域具有针对免疫信号抗原的结合特异性。在一个实施方案中，第一scFv结构域、Fab结构域和第二scFv结构域各自独立地具有针对选自ROR1、PD-L1、CD3、CD28、41BB、CEA、HER2、EGFRvIII、EGFR、LMP1、LMP2A、间皮素、PSMA、EpCAM、磷脂酰肌醇蛋白聚糖(glypican)-3、gpA33、GD2、TROP2、NK本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有N-末端和C-末端的三特异性抗体单体，其从所述N-末端到所述C-末端依次包含：/n在所述N-末端的第一scFv结构域，/nFab结构域，/nFc结构域，和/n在所述C-末端的第二scFv结构域，/n其中所述第一scFv结构域、所述Fab结构域和所述第二scFv结构域各自具有针对不同抗原的结合特异性，并且其中所述第一scFv结构域、所述Fab结构域和所述第二scFv结构域各自具有针对肿瘤抗原或免疫信号抗原的特异性。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170625 US 62/524,5541.一种具有N-末端和C-末端的三特异性抗体单体，其从所述N-末端到所述C-末端依次包含：
在所述N-末端的第一scFv结构域，
Fab结构域，
Fc结构域，和
在所述C-末端的第二scFv结构域，
其中所述第一scFv结构域、所述Fab结构域和所述第二scFv结构域各自具有针对不同抗原的结合特异性，并且其中所述第一scFv结构域、所述Fab结构域和所述第二scFv结构域各自具有针对肿瘤抗原或免疫信号抗原的特异性。


2.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其中所述第一scFv结构域、所述Fab结构域和所述第二scFv结构域各自独立地具有针对抗原的结合特异性，所述抗原选自ROR1、PD-L1、CD3、CD28、41BB、CEA、HER2、EGFRvIII、EGFR、LMP1、LMP2A、间皮素、PSMA、EpCAM、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、gpA33、GD2、TROP2、NKG2D、BCMA、CD19、CD20、CD33、CD123、CD22、CD30、PDL1、PD1、OX40、4-1BB、GITR、TIGIT、TIM-3、LAG-3、CTLA4、CD40、VISTA、ICOS、BTLA、LIGHT、HVEM、CSF1R、CD73和CD39。


3.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其中所述第一scFv结构域、所述Fab结构域和所述第二scFv结构域各自独立地具有针对选自ROR1、PD-L1和CD3的抗原的结合特异性。


4.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其中所述第一scFv结构域具有针对ROR1的结合特异性。


5.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其中所述Fab结构域具有针对PD-L1的结合特异性。


6.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其中所述第二scFv结构域具有针对CD3的结合特异性。


7.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其中所述第一scFv结构域具有针对ROR1的结合特异性，其中所述Fab结构域具有针对PD-L1的结合特异性，并且其中所述第二scFv具有针对CD3的结合特异性。


8.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其中所述Fc结构域包含人IgG1Fc。


9.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其对人PD-L1，人CD3，和人ROR1、人CD19或EGFRVIII之一具有结合特异性。


10.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其中所述第一scFv结构域包含(G4S)n接头，其中n是2-4的整数，并且其中所述第一scFv结构域通过所述接头与所述Fab结构域连接。


11.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其具有对人ROR1具有结合特异性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列与SEQID5、6、7或8具有百分比同源性，并且其中所述百分比同源性不小于90％。


12.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其具有对人CD19具有结合特异性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列与SEQID43、44、45或46具有百分比同源性，并且其中所述百分比同源性不小于90％。


13.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其具有对EGFRvIII具有结合特异性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列与SEQID39、40、41或42具有百分比同源性，并且其中所述百分比同源性不小于90％。


14.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其具有对人PD-L1具有结合特异性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列与SEQID13、14、15或16具有百分比同源性，并且其中所述百分比同源性不小于90％。


15.根据权利要求1所述的三特异性抗体单体，其具有对人CD3具有结合特异性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列与SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱义，欧勒·奥尔森，夏冬，大卫·耶利曼，卡特里娜·贝科娃，安妮玛丽·卢梭，比尔·布雷迪，布莱尔·伦肖，布莱恩·科瓦切维奇，梁玉，高泽人，
申请(专利权)人：西雅图免疫公司，四川百利药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US