【技术实现步骤摘要】
本公开总体涉及生物治疗，更具体地涉及制备和使用双特异性抗体。所有参考文献均全文引入本文。
技术介绍
1、癌细胞发展出各种策略来逃避免疫监视。特异性肿瘤抗原的缺乏和主要组织相容性复合物(mhc)分子表达的丧失阻碍了t淋巴细胞对癌细胞的识别。免疫抑制性肿瘤微环境还有助于降低免疫系统对肿瘤细胞的识别。肿瘤微环境是由调节性t细胞、髓系来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、抑制性b细胞、肿瘤或基质细胞产生的免疫抑制细胞因子(如tgf-β或il-10)以及调节t细胞功能的免疫检查点分子组成的免疫抑制细胞群来呈现的[marshall ht等人，front oncol 2018，8：315]。
2、已经证明使用患者自身的免疫系统在保持正常组织完整的同时，在控制肿瘤生长和特异性消除肿瘤细胞方面是有效的。免疫疗法为治疗癌症提供了另一个角度[khalil dn等人，adv cancer res 2015，128：1-68]。
3、联合免疫系统的多种调节剂是免疫肿瘤学领域迅速发展的一个新领域。新的治疗药物可以通过多途径调节对肿瘤细胞的免疫应答，可以提高患者的应答率，在某些情况下降低毒性，从而极大地有益于癌症患者。
4、在癌症治疗中使用一种以上靶向免疫系统的单克隆抗体的联合治疗已显示比使用单一药物治疗更有效[hellman md等人，advimmunol 2016，130：251-77]。除了提高疗效和应答率外，联合治疗往往比单一药物治疗具有更大的毒性。调节免疫系统的双特异性药物对患者的毒性较小和/或更有效，与包括具有相同
技术实现思路
1、本公开涉及双特异性抗体，具体地，含有igg组份的双特异性抗体因此克服了bite分子的快速清除，作为不需要患者免疫细胞离体扩增的现成疗法，具有优于car-t细胞疗法的优点。双特异性抗体的另一个优点是通过同时接合两个检查点受体来增强克服抑制性肿瘤微环境的能力。
2、本公开中的双特异性抗体可以与其它试剂例如t细胞接合器组合，并且进一步增强它们的活性。
3、本公开涉及双特异性抗体，其结合在免疫和肿瘤细胞上表达的两个不同靶标。两个靶标可以都是检查点抗原。在一个实施方案中，两个靶标可以都是免疫细胞上的检查点抗原。在一个实施方案中，两个靶标可以都是肿瘤细胞上的检查点抗原。在一个实施方案中，一个靶标是免疫细胞上的检查点抗原，另一个靶标是肿瘤细胞上的检查点抗原。在一个实施方案中，检查点抗原可以选自pd-1、pd-l1和ctla4。在一个实施方案中，靶标可以包括pd-1、pd-l1和ctla4的任何组合。
4、本公开还提供双特异性药物的组合物及其用于治疗癌症和自身免疫缺陷的治疗用途。
5、在一个实施方案中，本申请公开了双特异性抗体，其包括igg重链和轻链，以及连接到重链的c端或轻链的n端的两个scfv部分(components)，其中igg对第一抗原具有结合特异性，其中scfv部分对第二抗原具有结合特异性，并且其中第一抗原和第二抗原不同且独立地选自α-ctla4、α-pd-1和α-pd-l1。
6、在一个实施方案中，双特异性抗体具有连接到重链c端的两个scfv部分。在一个实施方案中，第一抗原包括α-ctla4，第二抗原包括α-pd-1或α-pd-l1。在另一个实施方案中，第一抗原包括α-pd-1或α-pd-l1，第二抗原包括α-ctla4。
7、在一个实施方案中，双特异性抗体具有连接到轻链n端的两个scfv部分。在一个实施方案中，第一抗原包括α-pd-1或α-pd-l1，第二抗原包括α-ctla4。在另一个实施方案中，第一抗原包含α-ctla4，第二抗原包含α-pd-1或α-pd-l1。
8、在一个实施方案中，双特异性抗体是分离的单克隆抗体。
9、在一个实施方案中，双特异性抗体包括具有本文公开的序列的抗原肽序列。在一个实施方案中，双特异性抗体可以具有与公开的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％、98％或99％相似性的抗原肽序列。
10、在一个实施方案中，双特异性抗体包括具有本文公开的序列的抗原结合片段。在一个实施方案中，双特异性抗体可以具有与所公开的抗体序列具有至少70％、80％、90％、98％或99％相似性的序列的抗原结合片段。
11、在一个实施方案中，双特异性抗体可以具有对α-ctla4、α-pd-1或α-pd-l1的结合亲和力，kd不大于70nm、50nm、40nm、30nm、20nm、10nm或5nm。
12、在一个实施方案中，双特异性抗体可以具有对α-ctla4和α-pd-1的结合亲和力，kd不大于70nm、50nm、40nm、30nm、20nm、10nm或5nm。
13、在一个实施方案中，双特异性抗体可以具有对α-ctla4和α-pd-l1的结合亲和力，kd不大于70nm、50nm、40nm、30nm、20nm、10nm或5nm。
14、在一个实施方案中，双特异性抗体可以具有对α-ctla4、α-pd-1或α-pd-l1中的两种的结合亲和力，kd不大于70nm、50nm、40nm、30nm、20nm、10nm或5nm。
15、在一个实施方案中，双特异性抗体可以表现出一种或多种选自以下的功能特性：与α-ctla4、α-pd-1或α-pd-l1的高亲和力结合，抑制pd-l1与pd-1的结合，增强t细胞活化，刺激抗体应答的能力和/或逆转免疫抑制细胞的抑制功能的能力，例如调节性t细胞。
16、在一个实施方案中，增强t细胞活化包括t细胞增殖、ifn-γ和/或il-2分泌或其组合。
17、在一个实施方案中，双特异性抗体包括人源框架区域。
18、在一个实施方案中，双特异性抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体或重组抗体。
19、在一个实施方案中，双特异性抗体包括igg1恒定区以延长双特异性分子的循环半衰期。在一个实施方案中，双特异性抗体的igg1恒定区包括与seq id no.136具有至少98％相似性的氨基酸序列。
20、在一个实施方案中，本申请公开了分离的双特异性抗体，其选自描述的或具有本文公开的所述特征的那些克隆。
21、在一个实施方案中，本申请公开了双特异性抗体的igg1重链，其包括选自本文公开的序列的氨基酸序列。在一个实施方案中，igg1重链可具有与seq id no.02、06、08、10、12、14、16、18、20、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、72、92、96、100、104、108、112、116、120、124、128或132具有至少70％、80％、90％、98％或99％相似性的氨基酸序列。
22、在一个实施方案中，本申请公开了双特异性抗体的κ轻链。在一个实施方案中，κ轻链可具有与seq id no.04、28、32、36、4本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种双特异性抗体，其包括具有重链和轻链的IgG结构域，以及连接到所述重链的C端或所述轻链的N端的两个scFv部分，其中所述IgG结构域对第一抗原具有第一结合特异性，其中所述scFv部分对第二抗原具有第二结合特异性，并且其中所述第一抗原和所述第二抗原不同并且独立地选自CTLA4、PD-1和PD-L1。
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述第一抗原为CTLA4，所述第二抗原为PD-L1，或所述第一抗原为PD-L1，所述第二抗原为CTLA4。
3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其中所述IgG结构域包含如SSYTMH所示的重链可变区CDR1氨基酸序列、如FISYDGNNKYYADSVKG所示的重链可变区CDR2氨基酸序列、如TGWLGPFDY所示的重链可变区CDR3氨基酸序列、如RASQSVGSSYLA所示的轻链可变区CDR1氨基酸序列、如GAFSRAT所示的轻链可变区CDR2氨基酸序列、如QQYGSSPWT所示的轻链可变区CDR3氨基酸序列；且所述scFv部分包含如SGYDMC所示的重链可变区CDR1氨基酸序列、CIAAGSAGITYDA
4.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其包括分别与SEQ ID No.92、94、120和122所示的重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列具有至少98％相似性的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其包括人框架区域。
6.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述抗体是人源化抗体、嵌合抗体或重组抗体。
7.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述IgG结构域包括IgG1恒定区，其中所述IgG1恒定区包括与SEQ ID No.136或SEQ ID No.138具有至少98％相似性的氨基酸序列。
8.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1-7任一项所述的双特异性抗体。
9.一种表达载体，其包括根据权利要求8所述的分离的核酸。
10.根据权利要求9所述的表达载体，其中，所述载体可在细胞中表达。
11.一种宿主细胞，其包括根据权利要求8所述的核酸。
12.一种宿主细胞，其包括根据权利要求9所述的表达载体。
13.根据权利要求11或12所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞是原核细胞或真核细胞。
14.一种产生双特异性抗体的方法，其包括培养根据权利要求11至12中的一个所述的宿主细胞，从而产生所述双特异性抗体。
15.一种免疫偶联物，其包括根据权利要求1-7任一项所述的双特异性抗体以及细胞毒类药物。
16.根据权利要求15所述的免疫偶联物，其中，所述细胞毒类药物包括化疗药物、生长抑制剂、毒素或放射性同位素。
17.一种药物组合物，其包括根据权利要求1-7任一项所述的双特异性抗体和药学上可接受的载体。
18.根据权利要求17所述的药物组合物，进一步包括放射性同位素、放射性核素、毒素、治疗剂、化疗药物或其组合。
19.一种药物组合物，其包括根据权利要求15或16所述的免疫偶联物和药学上可接受的载体。
20.权利要求1-7任一项所述的双特异性抗体在制备对患有癌症的受试者进行治疗的药物中的用途。
21.根据权利要求20所述的用途，其中，所述癌症包括表达PD-L1的细胞。
22.根据权利要求20所述的用途，其中，所述癌症包括乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、头颈癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、神经胶质瘤、食管癌、鼻咽癌、肾癌、胃癌、肝癌、膀胱癌、宫颈癌、脑肿瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤。
23.根据权利要求20所述的用途，所述治疗进一步包括共同施用有效量的治疗剂。
24.根据权利要求23所述的用途，其中，所述治疗剂包括抗体、化疗药物、酶或其组合。
25.根据权利要求24所述的用途，其中，所述治疗剂包括卡培他滨、顺铂、曲妥珠单抗、氟维司群、他莫昔芬、来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、氨鲁米特、睾内酯、伏氯唑、福美坦、法曲唑、来曲唑、埃罗替尼、阿法替尼(lafatinib)、达沙替尼、吉非替尼、伊马替尼、帕唑替尼(pazopinib)、拉帕替尼、舒尼替尼、尼洛替尼、索拉非尼、nab-紫杉醇(nab-pal...
【技术特征摘要】
1.一种双特异性抗体，其包括具有重链和轻链的igg结构域，以及连接到所述重链的c端或所述轻链的n端的两个scfv部分，其中所述igg结构域对第一抗原具有第一结合特异性，其中所述scfv部分对第二抗原具有第二结合特异性，并且其中所述第一抗原和所述第二抗原不同并且独立地选自ctla4、pd-1和pd-l1。
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述第一抗原为ctla4，所述第二抗原为pd-l1，或所述第一抗原为pd-l1，所述第二抗原为ctla4。
3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其中所述igg结构域包含如ssytmh所示的重链可变区cdr1氨基酸序列、如fisydgnnkyyadsvkg所示的重链可变区cdr2氨基酸序列、如tgwlgpfdy所示的重链可变区cdr3氨基酸序列、如rasqsvgssyla所示的轻链可变区cdr1氨基酸序列、如gafsrat所示的轻链可变区cdr2氨基酸序列、如qqygsspwt所示的轻链可变区cdr3氨基酸序列；且所述scfv部分包含如sgydmc所示的重链可变区cdr1氨基酸序列、ciaagsagitydanwakg所示的重链可变区cdr2氨基酸序列、如safsfdyamdl所示的重链可变区cdr3氨基酸序列、如qasqsisshln所示的轻链可变区cdr1氨基酸序列、如kastlas所示的轻链可变区cdr2氨基酸序列、如qqgyswgnvdnv所示的轻链可变区cdr3氨基酸序列。
4.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其包括分别与seq id no.92、94、120和122所示的重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列具有至少98％相似性的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其包括人框架区域。
6.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述抗体是人源化抗体、嵌合抗体或重组抗体。
7.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述igg结构域包括igg1恒定区，其中所述igg1恒定区包括与seq id no.136或seq id no.138具有至少98％相似性的氨基酸序列。
8.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1-7任一项所述的双特异性抗体。
9.一种表达载体，其包括根据权利要求8所述的分离的核酸。
10.根据权利要求9所述的表达载体，其中，所述载体可在细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱义，卡特里娜·贝科娃，比尔·布雷迪，布莱尔·伦肖，夏冬，高泽人，布莱恩·科瓦切维奇，乔纳森·K·法莱，菲尔·谭，
申请(专利权)人：西雅图免疫公司，
类型：发明
国别省市：
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