【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种蛹虫草肽及其制备方法、纤维素载体复合物及其制备方法和应用，特别是用于运载蛹虫草肽和虾青素的肝靶向微粒(载体)及其复合物的制备方法及其在酒精性肝损伤改善方面作用。
技术介绍
1、肝实质细胞作为乙醇代谢的主要场所，乙醇代谢途径的紊乱将引发体内氧化物质，尤其是脂质过氧化物的堆积，由此导致肝损伤。而体内乙醛含量升高，发生氧化应激，进一步诱发脂肪变性，激活炎症，tnf-α、il-1等炎性因子能进一步增强肝脏损伤，加重脂肪变性，诱导细胞异常增生及坏死，进而促进肝纤维化等进一步的病变。
2、蛹虫草含有虫草素、虫草酸、虫草多糖以及虫草肽等活性物质，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、提高机体免疫力等功效。已有研究报道，虫草及虫草菌丝体对免疫性、病毒性肝损伤具有一定的保护作用。蛹虫草肽通过抗氧化应激和抗炎作用抑制细胞中ros的生成、tnf-α等因子的释放，起到对ald损伤肝细胞的保护作用。但由于稳定性、胃肠道生理障碍以及理化性质的限制,导致蛹虫草肽难以被完好地靶向递送至肝部并发挥功效。另一方面，虾青素(3,3’-二羟基-4,4’-二酮基-β,β’-胡萝卜素)，分布在海洋藻类、菌类和甲壳类动物中，其中雨生红球藻是最理想的天然虾青素来源。多项研究证实虾青素作为一种天然强抗氧化剂，能够降低lx-2细胞中tgf-β1诱导的纤维化基因α-sma和col1a1的表达，并抑制肝星状细胞的活化，从而抑制肝纤维化发展。此外强大的抗氧化能力能够调节肝细胞氧化应激反应，在缓解肝脏胰岛素抵抗及非酒精性脂肪肝等方面具有重要作用。但同样虾青
3、因此，为了提高蛹虫草肽及虾青素的生物利用度，能够在口服后达到良好的保肝护肝，缓解酒精性肝损伤的作用，构建合适的能够抵抗消化道环境影响、增强黏液与上皮屏障透过效果并稳定靶向肝细胞的载运体系是非常有效的技术手段，也是近年的研究热点之一。
技术实现思路
1、本专利技术针对上述目的，在第一方面上，为了解决肽段具有抗氧化及免疫调节作用的问题，本申请的一些实施例提供蛹虫草肽，其氨基酸序列包括gly-leu-gln-gly-met-pro-arg。
2、在第二方面上，在本申请的一些实施例提供上述第一方面的蛹虫草肽的制备方法，包括
3、s11.将蛹虫草加入其15～20倍质量体积的水制成匀浆液置于酶解罐中，向酶解罐中加入蛹虫草质量的0.5～1.0％的复合酶，其中，复合酶包括纤维素酶以及β葡聚糖酶，纤维素酶:β葡聚糖酶＝(1～3):(1～3)；
4、s12.向酶解罐中加入蛹虫草质量的2～5％的复合蛋白酶，酶解后升温灭酶，得到蛹虫草酶解液，其中，复合蛋白酶包括中性蛋白酶、碱性蛋白酶以及风味蛋白酶，中性蛋白酶:碱性蛋白酶:风味蛋白酶＝(1～3):(3～5):(1～3)。
5、s13.将蛹虫草蛋白酶解液离心，得清液。
6、s14.将清液进行膜分离，截留分子量为3000da。
7、s15.过膜液通过凝胶色谱柱进行分离纯化，洗脱溶剂为去离子水，洗脱流速为0.5～0.8ml/min，在220nm下检测其吸光度，收集保留时间8～9min的洗脱峰。
8、s16.采用色谱柱进一步纯化，流动相a为含体积百分数0.05～0.1％三氟乙酸水，流动相b为乙腈，梯度洗脱条件为：0～10min，5％b，10～20min，5％b～15％b，20～30min，15％b～30％b，30～40min，30％b～40％b，流速为0.8～1.0ml/min，收集保留时间6～7min的洗脱峰，得蛹虫草肽。
9、根据本申请一些实施例的蛹虫草肽的制备方法，步骤s11中，酶解温度为45～50℃，酶反应ph为5.0～6.0，酶解时间为1～2h；
10、根据本申请一些实施例的蛹虫草肽的制备方法，步骤s12中，酶解温度为45～55℃，酶反应ph为8.0～9.0，酶解时间为4h。
11、根据本申请一些实施例的蛹虫草肽的制备方法，步骤s12中，酶解后升温至80～90℃灭酶10min，得到蛹虫草蛋白酶解液。
12、根据本申请一些实施例的蛹虫草肽的制备方法，步骤s13中，蛹虫草蛋白酶解液在8000转/min离心10min。
13、根据本申请一些实施例的蛹虫草肽的制备方法，步骤s15中，采用20mm×100mm的sephadexg10凝胶色谱柱进行分离纯化。
14、根据本申请一些实施例的蛹虫草肽的制备方法，步骤s16中，采用c18色谱柱进一步纯化。
15、根据本申请一些实施例的蛹虫草肽的制备方法，步骤s16中，蛹虫草肽浓缩、冷冻干燥，得蛹虫草肽粉。
16、在第三方面上，为了解决对蛹虫草肽肝靶向运载的问题，在本申请的一些实施例提供半乳糖基化细菌纤维素载体运载蛹虫草肽的复合物及其制备方法，是一种制备蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，复合物由制备方法制得，制备方法包括
17、s31.将蛹虫草肽粉与半乳糖基化细菌纤维素载体溶于水，搅拌，冷冻干燥，得蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物。
18、其中，所述半乳糖基化细菌纤维素载体，基于如下方式制备：
19、s21.将细菌纤维素溶于含四丁基醋酸铵的二甲基亚砜(dmso)溶液中，搅拌，得细菌纤维素溶液。
20、s22.将乳糖酸溶于含有1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(edc)及1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(nhs)的二甲基亚砜(dmso)溶液中，搅拌，得乳糖酸溶液。
21、s23.将细菌纤维素溶液加入乳糖酸溶液中，加热搅拌，去除杂质，得半乳糖基化细菌纤维素载体。
22、根据本申请一些实施例的制备蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，步骤s21中，将细菌纤维素溶于含四丁基醋酸铵的二甲基亚砜溶液中，搅拌至无胶状物凝聚，得质量体积比为1～5％的均一的细菌纤维素溶液。
23、步骤s22中，将乳糖酸溶于含有1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(edc)及1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(nhs)的二甲基亚砜(dmso)溶液中，搅拌进行羧基活化，活化时间为1～3h，更优选地为2h，得质量体积比为1～10％的乳糖酸溶液。
24、其中，乳糖酸：1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(edc)：1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(nhs)＝1～5：1：1，优选地为1:1:1。
25、步骤s23中，将细菌纤维素溶液加入乳糖酸溶液中，加热搅拌，去除杂质，冷冻干燥，得半乳糖基化细菌纤维素载体粉，其中，加热搅拌温度为40～50℃，加热搅拌时间为10～24h。
26、根据本申请一些实施例的制备蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，步骤s23中，去除杂质包括在透析管中蒸馏水本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种蛹虫草肽，其特征在于，其氨基酸序列包括Gly-Leu-Gln-Gly-Met-Pro-Arg。
2.一种权利要求1所述的蛹虫草肽的制备方法，其特征在于，包括
3.根据权利要求2所述的蛹虫草肽的制备方法，其特征在于，
4.一种制备蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，包括
5.根据权利要求4所述的制备蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，
6.根据权利要求4所述的制备蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，
7.一种蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物，其特征在于，由权利要求4-6中任一项所述制备方法制得。
8.一种制备蛹虫草肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，包括
9.根据权利要求11所述的制备蛹虫草肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，
10.一种蛹虫草肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物，其特征在于，由权利要求8-9中任一项所述制备方法制得
11.一种权利要求1所述蛹虫草肽或者权利要求7所述蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物或者权利要求10所述蛹虫草肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物在制备治疗肝损伤药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种蛹虫草肽，其特征在于，其氨基酸序列包括gly-leu-gln-gly-met-pro-arg。
2.一种权利要求1所述的蛹虫草肽的制备方法，其特征在于，包括
3.根据权利要求2所述的蛹虫草肽的制备方法，其特征在于，
4.一种制备蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，包括
5.根据权利要求4所述的制备蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，
6.根据权利要求4所述的制备蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，
7.一种蛹虫草肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合...
【专利技术属性】
技术研发人员：王祖哲，高威，张延胜，苑艳纳，王飞，
申请(专利权)人：大连深蓝肽科技研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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