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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物,具体涉及一种蛎低聚肽及其制备方法、纤维素载体复合物及其制备方法和应用,特别是用于运载牡蛎低聚肽和虾青素的肝靶向微粒(载体)及其复合物的制备方法及其在肝纤维化改善方面作用。
技术介绍
1、肝纤维化(liverfibrosis,lf)是指肝脏受到损伤后,肝脏内弥漫性细胞外基质(extracellular matrix,ecm),尤其是胶原的过度增生与异常沉积,最终导致肝脏结构破坏、假小叶生成,是产生肝硬化甚至肝癌的主要原因之一。肝纤维化的病理机制为肝组织胶原蛋白等细胞外基质的合成与降解失衡,导致胶原纤维沉积。肝纤维化的进一步发展可导致肝硬化、肝癌等重症肝病。虽然许多科学研究都表明,肝纤维化早期具有可逆性,但这个逆转过程非常缓慢,甚至在并发症影响下,其逆转显得极为渺茫。因此,深入研究其发病机制并积极寻找有效药物对肝纤维化的治疗具有深刻意义。
2、牡蛎低聚肽具有多种生物活性,例如提高男性血清和睾酮水平、调节血脂、抑制血小板聚集、改善高血糖症状、提高免疫力和促进新陈代谢等。有研究表明,牡蛎低聚肽可以改善酒精性肝病患者的肝脏酶系统,稳定肝细胞膜结构,长期服用可以软化肝脏。现代医学研究也显示,其可以诱导成纤维细胞增殖、活化、凋亡,对不同组织器官均有一定的抗纤维化作用。此外,牡蛎低聚肽-κb(nf-κb)/inos信号途径可以促进肝星状细胞凋亡,减少ecm成分的表达。但由于稳定性、胃肠道生理障碍以及理化性质的限制,导致牡蛎肽难以被完好地靶向递送至肝部并发挥功效。另一方面,虾青素(3,3’-二羟基-4,4’-二酮基
3、因此,为了提高牡蛎低聚肽及虾青素的生物利用度,能够在口服后达到良好的保肝护肝,缓解肝纤维化的作用,构建合适的能够抵抗消化道环境影响、增强黏液与上皮屏障透过效果并稳定靶向肝细胞的载运体系是非常有效的技术手段,也是近年的研究热点之一。
技术实现思路
1、本专利技术针对上述目的,在第一方面上,为了解决肽段调节肝星形细胞活性,减少肝细胞外基质大量堆积从而缓解肝纤维化的问题,本申请的一些实施例提供牡蛎低聚肽,其氨基酸序列包括asp-pro-tyr-pro-phe-lys。
2、在第二方面上,在本申请的一些实施例提供上述第一方面的牡蛎低聚肽的制备方法,包括
3、s11.将牡蛎加入其15~20倍质量体积的水制成匀浆液置于酶解罐中。
4、s12.向酶解罐中加入牡蛎质量的2~5%的复合蛋白酶,酶解后升温灭酶,得到牡蛎蛋白酶解液,其中,复合蛋白酶包括中胃蛋白酶、木瓜蛋白酶以及风味蛋白酶,胃蛋白酶:木瓜蛋白酶:风味蛋白酶=(3~5):(2~3):(2~4)。
5、s13.将牡蛎蛋白酶解液离心,得清液。
6、s14.将清液进行膜分离,截留分子量为3000da。
7、s15.过膜液喷雾干燥得牡蛎低聚肽粉。
8、s16.将牡蛎低聚肽粉加水溶解,浓度为20~30mg/ml。
9、s17.采用凝胶色谱柱对溶解物分离纯化,洗脱溶剂为去离子水,洗脱流速为0.3~0.5ml/min,在220nm下检测其吸光度,收集保留时间5~6min的洗脱峰。
10、s18.采用反相柱进一步纯化,色谱条件如下:流动相a为含体积百分数0.05~0.1%三氟乙酸水,流动相b为乙腈,梯度洗脱条件为:0~10min,5%b,10~20min,5%~15%b,20~30min,15%b~30%b,30~40min,30%b~40%b,流速为0.8~1.0ml/min,收集保留时间11~12分钟的色谱峰,得牡蛎低聚肽。
11、根据本申请一些实施例的牡蛎低聚肽的制备方法,步骤s12中,酶解温度为40~50℃,酶反应ph为8.0~9.0,酶解时间为4h。
12、根据本申请一些实施例的牡蛎低聚肽的制备方法,步骤s12中,酶解后升温至80~90℃灭酶10分钟,得牡蛎蛋白酶解液。
13、根据本申请一些实施例的牡蛎低聚肽的制备方法,步骤s13中,牡蛎蛋白酶解液在8000转/分钟离心10分钟。
14、根据本申请一些实施例的牡蛎低聚肽的制备方法,步骤s16中,将牡蛎低聚肽粉加水溶解,浓度为25mg/ml。
15、根据本申请一些实施例的牡蛎低聚肽的制备方法,步骤s17中,采用20mm×100mm的sephadexg10凝胶色谱柱进行分离纯化。
16、根据本申请一些实施例的牡蛎低聚肽的制备方法,步骤s18中,采用c18 rp-hplc反相柱进一步纯化。
17、根据本申请一些实施例的牡蛎低聚肽的制备方法,步骤s18中,将牡蛎低聚肽浓缩、冷冻干燥,得牡蛎低聚肽粉。
18、在第三方面上,为了解决对牡蛎低聚肽肝靶向运载的问题,在本申请的一些实施例提供牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物及其制备方法,复合物由制备方法制得,制备方法包括
19、s31.将牡蛎低聚肽粉与半乳糖基化细菌纤维素载体溶于水,搅拌,冷冻干燥,得牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物。
20、其中,所述半乳糖基化细菌纤维素载体,基于如下方式制备:
21、s21.将细菌纤维素溶于含四丁基醋酸铵的二甲基亚砜(dmso)溶液中,搅拌,得细菌纤维素溶液。
22、s22.将乳糖酸溶于含有1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(edc)及1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(nhs)的二甲基亚砜(dmso)溶液中,搅拌,得乳糖酸溶液。
23、s23.将细菌纤维素溶液加入乳糖酸溶液中,加热搅拌,去除杂质,得半乳糖基化细菌纤维素载体。
24、根据本申请的一些实施例的制备牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物及其制备方法,步骤s21中,将细菌纤维素溶于含四丁基醋酸铵的二甲基亚砜溶液中,搅拌至无胶状物凝聚,得质量体积比为1~5%的均一的细菌纤维素溶液。
25、步骤s22中,将乳糖酸溶于含有1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(edc)及1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(nhs)的二甲基亚砜(dmso)溶液中,搅拌进行羧基活化,活化时间为1~3h,更优选地为2h,得质量体积比为1~10%的乳糖酸溶液。
26、其中,乳糖酸:1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(edc):1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种牡蛎低聚肽,其特征在于,其氨基酸序列包括Asp-Pro-Tyr-Pro-Phe-Lys。
2.一种权利要求1所述的牡蛎低聚肽的制备方法,其特征在于,包括
3.根据权利要求2所述的牡蛎低聚肽的制备方法,其特征在于,
4.一种制备牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法,其特征在于,包括
5.根据权利要求4所述的制备牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法,其特征在于,
6.根据权利要求4所述的制备牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法,其特征在于,
7.一种牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物,其特征在于,由权利要求4-6中任一项所述制备方法制得。
8.一种制备牡蛎低聚肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法,其特征在于,包括
9.根据权利要求8所述的制备牡蛎低聚肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法,其特征在于,
10.一种牡蛎低聚肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物,其特征在于,由权利要求8-9中任一项所述制
11.一种权利要求1所述牡蛎低聚肽或者权利要求7所述牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物或者权利要求10所述牡蛎低聚肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物在制备治疗肝损伤药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种牡蛎低聚肽,其特征在于,其氨基酸序列包括asp-pro-tyr-pro-phe-lys。
2.一种权利要求1所述的牡蛎低聚肽的制备方法,其特征在于,包括
3.根据权利要求2所述的牡蛎低聚肽的制备方法,其特征在于,
4.一种制备牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法,其特征在于,包括
5.根据权利要求4所述的制备牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法,其特征在于,
6.根据权利要求4所述的制备牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法,其特征在于,
7.一种牡蛎低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物...
【专利技术属性】
技术研发人员:高威,苑艳纳,王祖哲,刘婉,张延胜,
申请(专利权)人:大连深蓝肽科技研发有限公司,
类型:发明
国别省市:
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