【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种人参低聚肽及其制备方法、纤维素载体复合物及其制备方法和应用，特别是用于运载人参低聚肽和虾青素的肝靶向微粒(载体)及其复合物的制备方法及其在酒精性肝损伤改善方面作用。
技术介绍
1、酒精性肝损伤发生的机制并不十分明确，但越来越多的证据表明，氧化应激和炎症在酒精性肝损伤的发生中起着关键的病因学作用，包括肝细胞功能障碍、凋亡和纤维化等。过量的乙醇消耗诱导肝脏中多种自由基、活性氧(ros)和活性氮(rns)的积累，包括超氧化物、过氧化氢、脂质过氧化物、一氧化氮和过氧亚硝酸盐。反过来，大量产生的自由基超过肝脏氧化代谢能力，破坏肝脏氧化还原平衡，增加抗氧化物质消耗，抑制超氧化物歧化酶(sod)活性，降低抗氧化酶水平，尤其是谷胱甘肽(gsh)水平。从而引起肝脏一系列病理损伤，引起细胞膜脂质过氧化、蛋白质和dna氧化，导致肝细胞损伤、炎症、缺血、纤维化、坏死和凋亡。
2、人参被誉为为“百草之王”，其功效有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津安神等，其富含的生物活性物质主要包括人参总多糖、人参皂苷、人参蛋白。通过水解人参获得的小分子人参寡肽具有很强的抗氧化及免疫调节活性，能够显著改善受损肝细胞的氧化应激，调节因酒精摄入引起的肠道脂多糖水平升高，从而进入肝组织通过nf-κb通路引起的炎症细胞因子水平异常，进而抑制大量摄入酒精引起的肝脏氧化还原失衡，炎症反应等。但由于稳定性、胃肠道生理障碍以及理化性质的限制,导致人参低聚肽难以被完好地靶向递送至肝部并发挥功效。另一方面，虾青素(3,3’-二羟基-4,4’-二酮
3、因此，为了提高人参低聚肽及虾青素的生物利用度，能够在口服后达到良好的保肝护肝，缓解肝损伤的作用，构建合适的能够抵抗消化道环境影响、增强黏液与上皮屏障透过效果并稳定靶向肝细胞的载运体系是非常有效的技术手段，也是近年的研究热点之一。
技术实现思路
1、本专利技术针对上述目的，在第一方面上，为了解决肽段具有抗氧化及免疫调节作用的问题，本申请的一些实施例提供人参低聚肽，其氨基酸序列包括leu-gly-his-glu-ser。
2、在第二方面上，在本申请的一些实施例提供上述第一方面的人参低聚肽的制备方法，包括
3、s11.将人参加入其15～20倍质量体积的水制成匀浆液置于酶解罐中，向酶解罐中加入人参质量的0.5～1.0％的纤维素酶。
4、s12.酶解罐中加入人参质量的3～5％的复合蛋白酶，酶解后升温灭酶，得到人参酶解液，其中，复合蛋白酶包括碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶以及风味蛋白酶，碱性蛋白酶:菠萝蛋白酶:风味蛋白酶＝(3～5):(2～4):(2～4)。
5、s13.将人参酶解液离心，得清液。
6、s14.将清液进行膜分离，截留分子量为3000da。
7、s15.过膜液通过离子交换色谱柱进行分离纯化，洗脱溶剂为去离子水，洗脱流速为0.8～1.0ml/min，在220nm下检测吸光度，收集保留时间13～14min的洗脱峰。
8、s16.采用色谱柱进一步纯化，流动相a为含体积百分数0.05～0.08％三氟乙酸水，流动相b为甲醇，梯度洗脱条件为：0～10min，5％b，10～20min，5～10％b，20～25min，10～20％b，25～35min，20～30％b，流速为0.8～1.0ml/min，收集27～28min的洗脱峰，得人参低聚肽。
9、根据本申请一些实施例的人参低聚肽的制备方法，步骤s11中，纤维素酶的酶解温度为45～50℃，酶解时间为1～2小时，酶反应ph为5.0～6.0。
10、根据本申请一些实施例的人参低聚肽的制备方法，步骤s12中，酶解温度为50～55℃，酶反应ph为9.0～10.0，酶解时间为3～4h。
11、根据本申请一些实施例的人参低聚肽的制备方法，步骤s12中，酶解后升温至80～90℃灭酶10～15分钟，得到人参酶解液。
12、根据本申请一些实施例的人参低聚肽的制备方法，步骤s13中，人参酶解液在6000～8000转/分钟离心8～10分钟。
13、根据本申请一些实施例的人参低聚肽的制备方法，步骤s15中，采用deae52离子交换色谱柱进行分离纯化。
14、根据本申请一些实施例的人参低聚肽的制备方法，步骤s16中，采用c18色谱柱进一步纯化。
15、根据本申请一些实施例的人参低聚肽的制备方法，步骤s16中，人参低聚肽浓缩、冷冻干燥，得人参低聚肽粉。
16、在第三方面上，为了解决对人参低聚肽肝靶向运载的问题，在本申请的一些实施例提供半乳糖基化细菌纤维素载体运载人参低聚肽的复合物及其制备方法，是一种制备人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，复合物由制备方法制得，制备方法包括
17、s31.将人参低聚肽粉与半乳糖基化细菌纤维素载体溶于水，搅拌，冷冻干燥，得人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物。
18、其中，所述半乳糖基化细菌纤维素载体，基于如下方式制备：
19、s21.将细菌纤维素溶于含四丁基醋酸铵的二甲基亚砜(dmso)溶液中，搅拌，得细菌纤维素溶液。
20、s22.将乳糖酸溶于含有1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(edc)及1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(nhs)的二甲基亚砜(dmso)溶液中，搅拌，得乳糖酸溶液。
21、s23.将细菌纤维素溶液加入乳糖酸溶液中，加热搅拌，去除杂质，得半乳糖基化细菌纤维素载体。
22、根据本申请一些实施例的制备人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，步骤s21中，将细菌纤维素溶于含四丁基醋酸铵的二甲基亚砜溶液中，搅拌至无胶状物凝聚，得质量体积比为1～5％的均一的细菌纤维素溶液。
23、步骤s22中，将乳糖酸溶于含有1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(edc)及1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(nhs)的二甲基亚砜(dmso)溶液中，搅拌进行羧基活化，活化时间为1～3h，更优选地为2h，得质量体积比为1～10％的乳糖酸溶液。
24、其中，乳糖酸：1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(edc)：1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)碳二亚胺(nhs)＝1～5：1：1，优选地为1:1:1。
25、步骤s23中，将细菌纤维素溶液加入乳糖酸溶液中，加热搅拌，去除杂质，冷冻干燥，得半乳糖基化细菌纤维素载体粉，其中，加热搅拌温度为40～50℃，加热搅拌时间为10～24h本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人参低聚肽，其特征在于，其氨基酸序列包括Leu-Gly-His-Glu-Ser。
2.一种权利要求1所述的人参低聚肽的制备方法，其特征在于，包括
3.根据权利要求2所述的人参低聚肽的制备方法，其特征在于，
4.一种制备人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，包括
5.根据权利要求4所述的制备人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，
6.根据权利要求4所述的制备人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，
7.一种人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物，其特征在于，由权利要求4-6中任一项所述制备方法制得。
8.一种制备人参低聚肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，包括
9.根据权利要求8所述的制备人参低聚肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，
10.一种人参低聚肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物，其特征在于，由权利要求8-9中任一项所述制备方法制
11.一种权利要求1所述人参低聚肽或者权利要求7所述人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物或者权利要求10所述人参低聚肽-虾青素-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物在制备治疗肝损伤药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种人参低聚肽，其特征在于，其氨基酸序列包括leu-gly-his-glu-ser。
2.一种权利要求1所述的人参低聚肽的制备方法，其特征在于，包括
3.根据权利要求2所述的人参低聚肽的制备方法，其特征在于，
4.一种制备人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，包括
5.根据权利要求4所述的制备人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，
6.根据权利要求4所述的制备人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物的方法，其特征在于，
7.一种人参低聚肽-半乳糖基化细菌纤维素载体复合物，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：高威，刘婉，张延胜，王祖哲，苑艳纳，
申请(专利权)人：大连深蓝肽科技研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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