一种GII型诺如病毒核酸检测标准物质及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开一种GII型诺如病毒核酸检测标准物质及其制备方法和应用，本发明专利技术GII型诺如病毒核酸检测标准物质RNA序列如SEQ ID No.1所示。本发明专利技术还具体公开了所述标准物质的制备方法以及在GII型诺如病毒核酸检测中作为标准物质的应用。本发明专利技术GII型诺如病毒核酸检测标准物质无生物传染性，容易制备，具有良好的均匀性和足够的稳定性，且该标准物质具有准确、可溯源的特性值；既可作为GII型诺如病毒核酸定性检测的阳性对照，又可以作为GII型诺如病毒核酸定量检测的外部标准品，还可用于评价新的GII型诺如病毒核酸检测方法，为GII型诺如病毒核酸检测能力认证认可提供物质基础，可被广泛应用于各实验室。

GII norovirus nucleic acid detection standard substance and preparation method and application thereof

The invention discloses a standard substance for detection of GII type norovirus nucleic acid and its preparation method and application. The present invention is shown by the RNA sequence of the standard substance of GII nucleic acid detection of norovirus nucleic acid, such as SEQ ID No.1. The invention also specifically discloses the preparation method of the reference substance and the application as a standard substance in the detection of GII norovirus nucleic acid. The GII type norovirus nucleic acid detection standard substance has no biological contagion, easy preparation, good uniformity and sufficient stability, and the standard substance has accurate and traceable characteristics; it can be used as the positive control of the GII type nnovirus nucleic acid qualitative detection, and can be used as the GII type norovirus nucleic acid. The external standard of quantitative detection can also be used to evaluate the new GII - type norovirus nucleic acid detection method, which provides the material basis for the authentication and Accreditation of GII type Nuo norovirus nucleic acid detection ability, and can be widely used in various laboratories.

【技术实现步骤摘要】
一种GII型诺如病毒核酸检测标准物质及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物检测
更具体地，涉及一种GII型诺如病毒核酸检测标准物质及其制备方法和应用。
技术介绍
二十世纪70年代之后，各国学者相继发现NoV、RV、HAstV、腺病毒(Adenoviruses，AdV)、札如病毒(Sapovirus，SaV)等是引起儿童、老年人以及免疫力低下人群急性水样腹泻和重症腹泻的主要病原体。以诺如病毒为例，过去的10余年里，已有研究证实NoV是引起急性暴发非细菌性胃肠炎的首要致病原，具有重要的公共卫生意义，美国CDC监测研究估计30％～50％的食物源性胃肠炎暴发与诺如病毒有关。目前，食源性病毒的检测方法主要基于电镜观察、细胞培养、核酸杂交、酶联免疫及聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，PCR)等技术，但是电镜观察、核酸杂交及酶联免疫方法的灵敏度相对较低，不能单独应用与检测，传统的细胞培养方法，检测周期至少需要7d左右，且许多肠道食源性病毒不能进行细胞培养，或培养后不出现细胞病理效应，给检测工作带来了很大的困扰和挑战。因此，近年来分子生物学方法逐步在食源性病毒的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种GII型诺如病毒核酸检测标准物质，其特征在于，所述标准物质的RNA序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种GII型诺如病毒核酸检测标准物质，其特征在于，所述标准物质的RNA序列如SEQIDNo.1所示。2.根据权利要求1所述的GII型诺如病毒核酸检测标准物质，其特征在于，所述标准物质的特性值为(5.9±1.2)×104拷贝/μL。3.一种如权利要求1或2所述的GII型诺如病毒核酸检测标准物质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)筛选GII型诺如病毒阳性样品，提取病毒RNA，逆转录后，扩增出如SEQIDNo.5所示的DNA片段；2)将步骤1)中所述DNA片段与质粒载体连接构建重组质粒；3)将步骤2)获得的重组质粒转化到感受态细胞内，增殖，提取重组质粒；4)采用限制性内切酶对步骤3)提取得到的重组质粒进行单酶切，得到线性化重组质粒；5)以线性化重组质粒为模板，体外转录合成获得GII型诺如病毒核酸检测标准物质候选物，稀释，经均匀性、稳定性检测后，进行定值和不确定度评估，即可。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐蕾蕊，魏海燕，张西萌，曾静，
申请(专利权)人：北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：北京,11