一种核内稳定表达人巨细胞病毒pp65蛋白K562细胞株的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种新的建立细胞核内稳定表达人巨细胞病毒（HCMV）pp65蛋白细胞株的建立方法及应用。在HCMV pp65基因的3’端增加了核定位信号（pp65-NLS），使得转染该基因的细胞核内表达pp65基因，与HCMV感染宿主细胞时的细胞定位一样。再通过慢病毒介导pp65-NLS整合到K562细胞中，建立稳定表达pp65-NLS的K562细胞株。该细胞株可作为HCMV pp65抗原血症检测试剂盒的阳性对照品，从而实现该试剂盒在临床诊断上的可靠应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种核内稳定表达人巨细胞病毒pp65蛋白K562细胞株的制备方法:包括以下步骤：采用套叠PCR获取3‑’端增加核定位信号的人巨细胞病毒pp65基因；将该基因克隆至慢病毒表达载体PLVX‑puro中，并包装表达pp65‑NLS基因的慢病毒；用表达pp65‑NLS基因的慢病毒感染K562细胞；采用嘌呤霉素筛选出稳定表达pp65‑NLS基因的K562细胞株。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王明丽，甘霖，刘峰，
申请(专利权)人：王明丽，安徽博睿生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34