重组细胞球蛋白在延缓皮肤衰老中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种重组大鼠细胞球蛋白在延缓皮肤衰老中的应用，所述重组大鼠细胞球蛋白，通过构建基因工程菌pET22b-Cygb/E.coli.BL21(DE3)筛选高表达重组大鼠细胞球蛋白菌株，分离纯化鉴定得到高纯度重组大鼠细胞球蛋白。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及重组大鼠细胞球蛋白在延缓皮肤衰老中的应用。
技术介绍
衰老是机体各种组织、器官功能随年龄增长所发生的退行性变化。衰老与人类寿命和死亡密切相关，它是一个复杂的生理过程，涉及诸多领域，是机体各种生化反应的综合表现，同时也是体内外许多因素共同作用的结果。衰老导致生物有机体对各种应激的抵抗能力降低，生物功能进行性衰退，同时更易受到各种疾病的影响。覆盖机体全身的皮肤是机体衰老过程中最为明显的器官之一。随着年龄的增长，皮肤会发生退行性变，表现为皮肤变薄、含水量减少、萎缩、起皱、弹性降低等。有关衰老的机理，学者们曾提出许多学说。皮肤衰老分为两种类型自然衰老，即随年代增长造成的生理性衰老和光老化，即由外界环境因素主要是紫外线(ultraviolet，UV)照射引起的衰老。现已提出一系列衰老学说，主要包括自由基学说、线粒体DNA损伤学说、衰老的端区学说、免疫学说 (immunological theory)、光老化学说、内分泌学说(endocrine theory)等。衰老的皮肤中，由于MMPs(基质金属蛋白酶)的表达量提高或者活性增强，造成细胞外基质重要组成成分胶原(I型和III型胶原为主)和弹性蛋白发生进行性退化。MMf3S表达过量和对细胞外基质重建发挥重要作用的基质金属蛋白酶抑制剂(Tissue inhibitor of MMP，TIMPs)表达量降低，是皮肤衰老的两个重要特征。皮肤衰老的组织学改变主要是胶原蛋白减少和弹性纤维增加；分子学改变主要包括表皮增生和分化性标志表达异常。外界环境中UV照射对人类皮肤结缔组织产生严重损伤，光老化导致细胞活力降低，细胞膜损伤和弹性组织变性(弹性蛋白/原纤维蛋白沉积)。与光老化皮肤外观上相比较，自然衰老的皮肤更薄，色素沉积更加均勻，更加松弛而且细纹相对较多。细胞球蛋白(Cytoglobin，Cygb)，是近几年来在脊椎动物中发现的六配位血红素球蛋白(hxHb)超家族中的新成员，在多种生物及组织中表达。已有多项研究初步表明，细胞球蛋白Cygb可能具有促进皮肤等上皮组织的生长、减缓衰老、抗氧化和抗炎症等功能。专利技术人通过构建基因工程菌pET22b_Cygb/E. C01 i. BL21，筛选高表达大鼠Cygb 菌株，分离纯化鉴定得到高纯度重组大鼠Cygb。利用皮肤细胞H2A氧化应激损伤模型及 D-galactose致小鼠局部皮肤衰老模型等，研究了 Cygb的在延缓皮肤衰老中的抗氧化及相关功能，探讨了 Cygb在抗炎症及促进皮肤创伤愈合方面的作用。
技术实现思路
本专利技术提供一种重组大鼠细胞球蛋白(Cygb)，以及所述重组大鼠细胞球蛋白在延缓皮肤衰老中的应用。本专利技术所述的重组大鼠细胞球蛋白，通过构建基因工程菌pET22b_Cygb/E. coli. BL21(DE3)，筛选高表达重组大鼠细胞球蛋白菌株，分离纯化鉴定得到高纯度重组大鼠细胞球蛋白。本专利技术所述的重组大鼠细胞球蛋白，具体经过以下步骤制备(1)采用基因工程的方法构建高效表达重组大鼠细胞球蛋白的基因工程菌 pET22b-Cygb/E. coli. BL21(DE3)；(2)基因工程菌经大量培养后，经离心得到菌体沉淀经反复冻融后，重悬得粗蛋白提取液，上清总蛋白分别经DEAE-S^hadex A-50离子交换柱层析、S^hacryl S-100凝胶过滤层析及kphadex G25脱盐层析纯化，得到高纯度重组Cygb蛋白，通过WfesternBlotting， 鉴定纯化后重组大鼠细胞球蛋白的准确性。本专利技术制备重组大鼠细胞球蛋白更加详细的过程记载在实施例中。本专利技术还包括，用本专利技术的重组大鼠细胞球蛋白作为药物活性成分制备的药物组合物。本专利技术的药物组合物，根据需要可以含有药物可接受的载体，其中所述的重组大鼠细胞球蛋白作为药物活性成分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.01-99. 99%，其余为药物可接受的载体。本专利技术的药物组合物，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒，口服液的每瓶，颗粒剂的每袋，注射剂的每支等。本专利技术的药物组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括滴丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。本专利技术的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。可以通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂， 或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本专利技术的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉齐U、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。本专利技术的药物组合物，在制备成药剂时可选择性地加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA 二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、 麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。本专利技术的药物制剂在使用时根据病人的情况确定用法用量，如每日1-3次，每次 1-3 支。本专利技术还包括，本专利技术的重组大鼠细胞球蛋白在制备延缓皮肤衰老药物中的应用。本专利技术的重组大鼠细胞球蛋白在制备减轻细胞氧化损伤药物中的应用。本专利技术的重组大鼠细胞球蛋白在制备提高细胞抗氧化能力药物中的应用。本专利技术的重组大鼠细胞球蛋白在制备抗炎症药物中的应用。本专利技术的重组大鼠细胞球蛋白在制备促进皮肤创伤愈合药物中的应用。通过以下实验进一步研究重组大鼠Cygb在延缓皮肤衰老方面的作用。实验一重组Cygb抗细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种重组大鼠细胞球蛋白，经过以下步骤制成：构建基因工程菌ｐＥＴ２２ｂ－Ｃｙｇｂ／Ｅ．ｃｏｌｉ．ＢＬ２１菌株，经培养，分离，纯化，得到重组大鼠细胞球蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种重组大鼠细胞球蛋白，经过以下步骤制成构建基因工程菌pET22b-Cygb/ Ε. coli. BL21菌株，经培养，分离，纯化，得到重组大鼠细胞球蛋白。2.根据权利要求1所述的重组大鼠细胞球蛋白，其特征在于，经过以下步骤制成(1)采用基因工程的方法构建基因工程菌pET2^-Cygb/E.coli.BL21 ；(2)培养后，经离心得到菌体沉淀，经反复冻融后，重悬得粗蛋白提取液，上清总蛋白分别经DEAE-Sephadex A-50离子交换柱层析、Sephac...

【专利技术属性】
技术研发人员：许瑞安，张亭亭，李招发，刁勇，
申请(专利权)人：许瑞安，
类型：发明
国别省市：35