重组Tat-Cygb融合蛋白的抗炎、创伤愈合及抗肝纤维化作用制造技术

本发明专利技术属于生物医学技术领域，涉及重组融合Tat-Cygb蛋白的新用途，实验研究证明：所述Tat-Cygb可以治疗炎症、愈合创伤以及抗肝纤维化，促进肝纤维化的逆转，有望为临床提供重组融合Tat人源细胞球蛋白的新治疗手段。

【技术实现步骤摘要】
重组Tat-Cygb融合蛋白的抗炎、创伤愈合及抗肝纤维化作用
:本专利技术属于生物医学
，涉及重组融合蛋白在抗炎、创伤愈合及抗肝纤维化中的应用。
技术介绍
:炎症(inflammation):是具有血管系统的活体组织对损伤因子发生的防御反应，是感染及其许多疾病的最基本病理过程。炎症的发生发展过程一般分为三期:毛细血管扩张、通透性亢进 ；血小板吸附及白细胞游走；肉芽组织增生。炎症是临床常见的病理过程，可以发生于机体各组织和器官。急性炎症具有红、肿、热、痛等变化，同时常伴有发热、白细胞增多等全身反应。致炎因子作用于机体后，一方面引发细胞损伤坏死；另一方面，刺激机体抗病机能增加，使机体的内坏境及内境界和外坏境之间达到新的均衡。创伤愈合(wound healing):是机体遭受外力作用后,皮肤等组织出现离断或缺损后的愈合恢复过程，包括各种组织的再生和肉芽组织增生、瘢痕组织形成等。皮肤创伤愈合的基本过程主要包括:急性炎症期、细胞增生期、瘢痕形成期、表皮及其它组织再生期。根据创伤的严重程度分为三种情况:创伤仅限于皮肤表皮层；稍重者皮肤和皮下组织断裂并出现伤口 ；严重的创伤可有肌肉、肌腱、神经的断裂。创伤愈合可分为一般愈合、二期愈合、痂下愈合三种类型。I) 一般愈合(healing by first intention):一般愈合的时间短,形成瘢痕较少。多见于如手术切口等组织缺损少、创缘整齐、无感染、经粘合或缝合后创面对合严密的伤口，伤口中只有少量血凝块，炎症反应轻微，表皮再生在24~48小时内便可覆盖伤口。肉芽组织在第3天就可从伤口边缘长出并很快将伤口填满，5~6天胶原纤维形成，约2~3周完全愈合。2) 二期愈合(healing by second intention):见于组织缺损较大、仓ll缘不整、无法整齐对合，或伴有感染的伤口。与一期愈合相比，主要有如下不同:①由于坏死组织多，或由于感染，继续引起局部组织变性、坏死，炎症反应明显。只有控制感染，清除坏死组织，再生才能开始。②伤口大,且伤口收缩明显,从伤口底部及边缘长出肉芽组织将伤口填平。③愈合的时间较长，形成的瘢痕较大。3)痂下愈合(healing under scab):伤口表面的血液、渗出液及坏死物质干燥后形成黑褐色硬痂，在痂下进行愈合。待上皮再生完成后，痂皮即脱落。如果痂下渗出物较多，如果有细菌感染，痂皮阻碍渗出物排出，不利于愈合。此种愈合所需时间长于无痂者，因这种情况下表皮再生必须首先将痂皮溶解，然后才能生长。所以，创伤愈合用药原则应该包括缩小创面、防止再损伤和促进组织再生。损伤的程度及组织的再生能力决定修复的方式、愈合的时间及瘢痕的大小。组织的再生能力主要在进化过程中获得，但仍受全身及局部条件的影响。全身因素(如年龄、营养)及局部因素(如感染与异物感染、局部血液循环、神经支配、电离辐射等)两方面都会影响再生修复的进展。肝纤维化OfepatiC fibrosis, HF):是多种慢性肝脏疾病的共有病理阶段，肝纤维化持续发展可转变为肝硬化甚至肝癌，且肝病的中晚期都会发生致命的并发症。我国是一个肝病大国，高发病率和高死亡率是肝脏疾病的最大特点。肝纤维化是肝脏应对不同病因(炎症、酒精、寄生虫、化学毒物、免疫、营养代谢障碍、血液循环障碍、慢性病毒感染、胆管阻塞等)损伤刺激的自我修复反应；损伤的肝细胞分泌多种细胞因子，伴随肝窦内皮细胞、血小板分泌的细胞因子和某些化学介质共同激活肝星状细胞，使其转化为肝肌成纤维细胞(myofibroblasts, MFB)，MFB通过旁分泌和自分泌作用，产生大量以胶原为主要成分的细胞外基质(extra cellular matrix, ECM), ECM的过渡沉积,合成与降解失衡,导致肝纤维化的发生、发展。研究证明，肝纤维化是可逆的，而一旦发展为肝硬化甚至肝癌，人们将束手无策。肝纤维化是肝硬化的早期阶段和必经阶段，在一定情况下可以逆转，但若病因持续存在，肝纤维化逐渐加重，肝小叶及血管等逐渐被改建，肝脏的正常结构遭到破坏，中心静脉区和汇管区出现间隔、假小叶形成，即发展为不可逆转的肝硬化。积极探索肝纤维化发病机制，寻求有效治疗措施，对降低肝硬化发病率和死亡率具有重要意义。目前，肝纤维化治疗研究主要集中在以下几个方面:1)保护肝细胞，抑制HSC激活，2)抑制ECM合成，促进其降解，3)抑制细胞因子活性，调节信号通路。细胞球蛋白(Cytoglobin, Cygb),是近几年来在脊椎动物中发现的六配位血红素球蛋白(hxHb)超家族中的新成员，在多种生物及组织中表达。研究表明，细胞球蛋白Cygb可能与癌症的发生有关。食管癌、肺癌及结肠癌等恶性肿瘤中，Cygb的表达常常是被抑制的，通过基因治疗的方法表达Cygb，能够抑制肺癌细胞的正常生长。细胞穿膜肽，即CPPs，又称为蛋白转导域或膜转导肽，是一种由30个或者更少氨基酸组成的能够穿透细胞膜的多肽，能够运载生物活性物质如肽、蛋白、反义核苷酸和脂质体等许多物质。细胞穿膜肽的出现，解决了因药物无法进入细胞而导致药效严重削弱的难题。Tat是近年研究较深入的细胞穿膜肽，通过与生物大分子(如核酸或蛋白质)的融合，能够使融合蛋白转导真核细胞膜并进入细胞内。本专利技术所述重组融合Tat-Cygb人源细胞球蛋白的抗炎、创伤愈合及抗肝纤维化作用，迄今为止，尚未见有国内外的相关报道。
技术实现思路
:本专利技术提供了重组融合Tat人源细胞球蛋白在抗炎症中的应用。本专利技术提供了重组融合Tat人源细胞球蛋白在创伤愈合中的应用。本专利技术提供了重组融合Tat人源细胞球蛋白在抗肝纤维化中的应用。Tat -Cygb抗炎症实验结果显示:通过模型组与各给药组的对比可以看出，各给药组均可不同程度地缓解小鼠的耳廓肿胀，高剂量TAT -Cygb组和地塞米松组与模型组相比，均具有显著性差异(P〈0.01)，其中高剂量TAT -Cygb的抗炎效果略逊色于地塞米松组，但二者之间无显著性差异(P>0.05)，而低剂量TAT - Cygb组小鼠的耳廓肿胀程度较地塞米松组和高剂量组高，与模型组相比无显著性差异(P〈0.05)。Tat -Cygb创伤愈合实验结果显示:TAT -Cygb和Cygb均可促进伤口愈合,推测二者均因具有过氧化物酶活性而具有抗炎症作用，从而促进伤口愈合。此外，由于TAT - Cygb带有TAT穿膜肽的功能，能穿透皮肤细胞，在细胞内作用，促进皮肤细胞生长，因此效果较Cygb更明显。Tat - Cygb抗肝纤维化实验结果显示:利用CCI4致小鼠肝纤维化模型，通过观察小鼠的生长状态和肝组织外观、测定血清及组织中各项肝功能指标含量以及病理切片分析验证，治疗组肝脏恢复了血色和光泽，肝脏内胶原纤维含量明显减少；在肝功能检测中，治疗组血清ALT和AST含量均不同程度地降低，接近正常组，与模型组相比有显著差异；纤维化血清标志物检测中，HA、LN、C-1I1、C-1V等含量变化证明TAT-Cygb可减少肝细胞外基质(ECM)的含量；肝组织指标含量变化显示，TAT-Cygb治疗组可减轻超氧化物歧化酶的消耗，使SOD含量恢复正常水平，同时可降低脂质过氧化产物MDA的含量和胶原纤维的亚氨基成分Hyp，综上可知，通过尾静脉注射TA本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组融合Tat‐Cygb人源细胞球蛋白在制备抗炎药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.重组融合Tat- Cygb人源细胞球蛋白在制备抗炎药物中的应用。2.重组融合Tat-Cygb人源细胞球蛋白为活性成分组成的药物组合物在制备抗炎药物中的应用。3.重组融合Tat- Cygb人源细胞球蛋白在制备创伤愈合药物中的应用。4.重组融合Tat...

【专利技术属性】
技术研发人员：许瑞安，李招发，张如倩，
申请(专利权)人：许瑞安，
类型：发明
国别省市：福建;35