对免疫球蛋白治疗时出现的ＮＫ细胞调节作用有反应者和无反应者的测定和评估方法技术

测定针对免疫球蛋白引起的ＮＫ细胞调节作用的患者敏感性的一种测试方法，借助该测试可反映出以免疫球蛋白治疗疾病或预防疾病时患者所出现的反应，其特征在于，针对所说免疫球蛋白引起的天然杀伤细胞的调节作用进行测定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种对患者在以免疫球蛋白治疗疾病或预防疾病时的反应敏感度的 测试方法。
技术介绍
天然杀伤细胞(NK细胞)是先天免疫和宿主防御系统的组成部分。NK细胞的一种 可能的重要功能是攻击诸如病毒和肿瘤细胞等的入侵者。其机理被认为是基于对较少含有 或不含有主要组织相容性复合体I型MHC的细胞的特别识别，它通常在细胞内在化和蛋白 酶解之后呈现于入侵者特定部分。借助所述特有的NK细胞可以区分受感染的和未受感染 的细胞，以便进行定向攻击。特殊病毒甚至能阻止MHC I型分子的输出，规避所述特定的宿 主防御，但因此成为NK细胞攻击的目标。由人细胞表达的特定HLA等位基因本身和与上述识别特征组合，表明“自己的 体细胞受到了保护，提供了自我攻击的额外的安全机制。杀伤的非常有效的机制是通过定向NK靶细胞接触介导的。所述NK细胞向所述外 源细胞释放分子。这些分子是从NK细胞颗粒中释放的，因此，这种效应被称作脱颗粒化，释 放储存的效应分子，NK细胞利用所谓的'穿孔素'，它在靶细胞膜或包被上形成通道，导致 靶细胞严重损伤，甚至导致其'死亡'。其他分子参与了这种攻击，支持由其他机制引起的 破坏作用，如蛋白水解，其中，相关的颗粒酶B也是通过NK细胞脱颗粒化释放的。包括细胞 因子在内的所述信号传导化合物的释放，吸引并且激活了其他细胞，导致对入侵者的组合 攻击，并最终下调所述防御反应。这种杀伤力可被用于独特的癌症治疗途径，其中，肿瘤细胞受到攻击并且被NK细 胞破坏。因此，一直在寻找特殊的化合物和干预方法，以便支持NK细胞活性，并且将它们更 专一性地导向肿瘤细胞。NK细胞是宿主防御的重要部分。不过，当出现所述细胞的调节异常时，例如，不同 的疾病原因或疾病病程，它们能够使自己针对自身结构，造成显著的病理生理后果，如 攻击器官结构和外周和大脑的少突胶质细胞。尽管导致所述错误导向和自身攻击的机制尚 未完全了解，但这些细胞的恢复控制和将其杀伤力减弱到生理学适当的水平是需要的。由 于杀伤效率与脱颗粒化和效应分子的释放密切相关，目的之一是控制所述脱颗粒化，以便 减弱破坏。因此，目的是鉴定并且使用能够调节NK细胞作用减弱/抑制所述作用和随后损 伤的化合物。免疫球蛋白是免疫系统的天然部分，它能识别包括很多不同化合物、结构和作为 细胞结构部分之结构的靶，以便识别并且通常中和他们的生物学作用。所述免疫复合物被 快速清除，导致'外源'分子的消除。因此，识别、结合和去除功能无疑是非常重要的，它得 到了以下事实的证明缺少(或降低)免疫球蛋白含量的患者容易发生严重的或反复的感 染。除了这种针对入侵者的保护作用之外，免疫球蛋白在平衡和调节免疫系统方面具有重3要调控作用。一般来自收集的血液或血浆捐赠，并且按照专家公知的方法配制的免疫球蛋 白产品被用于治疗IMID(免疫介导的炎性疾病)和所谓的AID(自身免疫性疾病)，而这些 定义可以表达疾病的一致或部分一致的特征。所述免疫球蛋白浓缩物通常是静脉内(IVIG) 或皮下(SCIG)使用的，不过也可以肌肉内、吸入、眼内、口服或局部使用。静脉内给药免疫球蛋白(IVIG)治疗自身免疫性疾病的效果首次披露于1950年 代，那时，它被用于治疗患有特发性血小板减少性紫癜的患者。与此同时，许多临床研究证 实了 IVIG在治疗自身免疫性疾病方面的有益效果。其中，IVIG治疗在吉兰-巴雷综合征 (GBS)，川崎病，慢性炎性脱髓鞘多神经病，重症肌无力和皮质类固醇_抗性皮肌炎上得到 了证实(Ephrem et al.，2005 ；Kazatchkine and Kaveri, 2001 ；Boroset al.，2005)。另夕卜， 还通过临床研究证实了 IVIG对疾病进程复发率和多发性硬化症(MS)中的MRI加大损伤方 面有积极效果(Sorensen PS, 2003 ；Sorensen et al. ,2002) IVIG作用的全部机制尚不清楚，不过，它似乎引起了 F。受体表达和功能的调节、干 涉补体激活、T-和B-细胞-激活、分化基因和效应基因功能的调节(Ephrem et al.，2005 ； Kazatchkine and Kaveri,2001 ；Boros et al. ,2005)。当IVIG防治被成功应用于很多患者时，其中也包括了对IVIG应用反应较差甚至 无反应的病例。目前，既没有可靠的测试系统解释这种无反应性，也不能预测使用免疫球蛋 白是否会在患者体内产生预期的效力。最近的研究证实，例如，在经常性自发流产病例中， NK细胞数量和活性可以预测流产和正常怀孕，即如果数量/活性高，意味着较差的预后。另 外，发现在体外进行的免疫球蛋白测试的效果与NK细胞杀伤活性水平相关，不过，NK细胞 活性如何受免疫球蛋白以直接或间接的方式影响尚不了解。因此，进一步进行的试验集中 在存在Cr51-标记的细胞系和Cr51释放的条件下的NK杀伤活性方面，以便于根据该参数进 行评估。另外，可以考虑上面提到的指征是否是例如有代表性的IMID(免疫介导的炎性疾 病)指征。Asphalter 等在 Clin Exp Immunol 2000，121，506-514 中披露了对 NK 亚类的体 内IVIG替代治疗和大剂量IVIG(2g/kg体重)的效果。还披露了细胞内NK IFN-γ分析， 其中，细胞内IFN-Y是在IVIG治疗之前和之后(200-400mg/kg，每3周一次)在NK细胞中 测量的。两次分析的至少一次测量是在治疗之后进行的，它不能提供区别有反应者和无反 应者的可能性。Ruiz.等在 Journal ofReproductive Immunology，31 (1996)，125-141 中披露了 IVIG在体外抑制NK活性的免疫学机制，它被添加到NK中，用外周血淋巴细胞作为靶进行了 细胞毒性分析。较少的Cr51释放表明了 NK细胞毒性的减弱。由于Cr与细胞表面非特异性 结合，值得怀疑的是，测量到的放射活性是来自脱颗粒化。Tha-In Thanyalak 等在 Blood，Vol 110，No 9，9. Nov. 2007 中披露了，在存在 IVIG 的条件下成熟了 18小时的树突细胞(DC’ s)及其对天然杀伤(NK)细胞的影响。通过在5 天之后测定Fc- y -RIII的表达检查所述细胞对NK细胞表型的影响。在48小时之后还用 共同培养的IVIG-DC’ s测定了 INF-Y产量和NK细胞的脱颗粒化，并且证实了高含量的干 扰素-Y。最有趣的是，发现用不含DC’ s的IVIG处理的NK细胞的对照样品仅表现出临界 活性。因此，THA-IN得出的结论是，只有IVIG-DC，s能适当激活NK细胞脱颗粒化。另外， 与本申请相比(IVIG-DC’ s没有被本专利技术使用)，用不同细胞进行的长期分析(48小时和5天)，没有发现可以将以上发现用在以免疫球蛋白治疗疾病时，确定容易对免疫球蛋白做出 响应的患者的证据。另外，不幸的是，唯一可比较的分析(用IVIG处理过的NK细胞)证实 了与本申请相矛盾的结果，没有公开可以进行实质上比较的特定条件(第3257页，左栏， 3-7 行)。Kwak Joanne Y. H.等在 EARLY PREGNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
通过测定由免疫球蛋白引起的ＮＫ细胞调节作用，从而测定出患者对免疫球蛋白敏感性的一种测试方法，以此反映出使用免疫球蛋白治疗或预防由ＮＫ细胞失调引起的疾病时患者所出现的反应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP 2008-1-9 08100251.1通过测定由免疫球蛋白引起的NK细胞调节作用，从而测定出患者对免疫球蛋白敏感性的一种测试方法，以此反映出使用免疫球蛋白治疗或预防由NK细胞失调引起的疾病时患者所出现的反应。2.如权利要求1的方法，其中，自然杀伤细胞的脱颗粒化之量是通过体外法测定的。3.如权利要求1或2的方法，其中，测试得出的自然杀伤细胞脱颗粒化呈阳性的患者， 被确定为对免疫球蛋白治疗敏感型的。4.如权利要求1-3中任意一项的方法，其中，测定患者对免疫球蛋白的敏感性从而反 映出以免疫球蛋白治疗或预防疾病疾病时患者所出现的反应，这一方法是通过检测转录水 平，蛋白水平或转录水平和蛋白水平来进行的。5.如权利要求4的方法，其中，所述转录水平，所述蛋白水平或所述转录水平和蛋白水 平是定量测定的。6.如权利要求1-5中任意一项的方法，其中，转录水平是通过核酸检测法测定的，如聚 合酶链反应(PCR)。7.如权利要求1-6中任意一项的方法，其中，所述蛋白水平是利用释放的自然杀伤细 胞蛋白和/或在所述自然杀伤细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯特凡莫伊尔，托马斯吉泽，克里斯蒂安雅各比，于尔根勒米施，斯特凡哈格，
申请(专利权)人：奥克塔法马有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]