【技术实现步骤摘要】
表达人外源胰岛素原的人造血干细胞及其应用
本专利技术属于医学分子生物学领域，具体涉及一种表达人外源胰岛素原的人造血干 细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
糖尿病是严重危害人类健康的主要疾病之一，已经成为继心血管疾病和肿瘤之后 的第三大疾病。近年来，糖尿病的发病率不断上升，而且发病更趋年轻化。 糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或 其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病病人由于产生胰岛素障碍或胰岛素不能发挥生 理作用引起糖代谢紊乱导致微血管病变，引起肢体坏死、失明和肾功能衰竭等一系列严重 的并发症。目前尚无根治糖尿病的方法，但通过多种治疗手段可以控制好糖尿病，胰岛素治 疗是其中一种有效的方法。虽然采用胰岛素治疗在一定程度上能够改善病人的糖代谢紊 舌L然而长期的胰岛素注射不仅在治疗上给病人带来不便，并且这种方法并不能有效地防 止或逆转糖尿病引起的微血管病变及其并发症。 细胞移植是将在体外建立的功能性细胞移植到体内替代功能缺陷的细胞，以达到 治疗疾病的目的。近年来，许多研究者致力于利用现代基因工程技术...
【技术保护点】
一种重组慢病毒表达载体，其特征在于：所述重组慢病毒表达载体是在慢病毒载体pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑GFP‑T2A‑Puro的多克隆位点插入序列如SEQ ID NO：1所示的人胰岛素原的基因序列，获得含有人胰岛素原基因的重组慢病毒表达载体；所述人胰岛素原的基因序列插入慢病毒载体EcoR1和BamH1位点之间。
【技术特征摘要】
1. 一种重组慢病毒表达载体，其特征在于：所述重组慢病毒表达载体是在慢病毒载体 pCDH-CMV-MCS-EFl-GFP-T2A-Puro的多克隆位点插入序列如SEQ ID NO :1所示的人胰岛素 原的基因序列，获得含有人胰岛素原基因的重组慢病毒表达载体；所述人胰岛素原的基因 序列插入慢病毒载体EcoRl和BamHl位点之间。2. -种重组慢病毒颗粒，其特征在于：将权利要求1所述的重组慢病毒表达载体和慢 病毒包装质粒共同转染宿主细胞后得到的包装体即为重组慢病毒颗粒。3. 根据权利要求2所述的一种重组慢病毒颗粒，其特征在于，所述宿主细胞为293FT。4. 一种表达人外源胰岛素原的人造血干细胞，其特征在于，所述表达人外源胰岛素原 的人造血干细胞是转染有权利要求2或3所述的重组慢病毒颗粒的人造血干细胞，所述的 人造血干细胞为人脐带血造血干细胞。5. 权利要求4所述的表达人外源胰岛素原的人造血干细胞的体外扩增方法，其特征在 于，在单独使用CHIR99021或者LiCl，不需要其他细胞因子的条件下，培养7天，UCB HSCs/ proinsulin数量扩增10倍，扩增细胞保持原始细胞的生物学特性；所述CHIR99021浓度为 3uM-5uM，所述 LiCl 浓...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶治家，韩月雯，汤玲，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：重庆;85
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