外源基因在沙门氏菌中表达优化的方法技术

本发明专利技术提供了外源基因在沙门氏菌中优化表达的方法，包括如下具体步骤：从NCBI数据库中统计获得沙门氏菌密码子使用频率表；分析各密码子使用频率：克隆或者合成目的基因，并且测定其核苷酸序列，根据上述沙门氏菌密码子使用频率表和氨基酸密码子对应表，在不改变氨基酸的情况下，通过分子突变或者基因合成的方式，把所述目的基因中沙门氏菌使用频率最低和较高的密码子突变成为使用频率最高的密码子，获得新的编码目的基因的核苷酸片段；通过分子生物学方法把新的编码目的基因的核苷酸片段插入到表达载体中，而后转入基因工程大肠杆菌，对获得的克隆进行鉴定；将鉴定正确的含目的基因的表达载体导入沙门氏菌中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因优化表达
，具体地，涉及。
技术介绍
在生物活性物质的生产过程中广泛用到基因克隆、表达，而基因在异源宿主中表达量受到多方面的影响，例如启动子、调控序列、终止子、密码子使用频率等等。在基因表达研究中，研究者比较注意选择合适的表达载体和宿主系统，而往往忽视基因本身是否与载体和宿主系统为最佳匹配这样一个实质性问题。基因的最佳化表达可以通过对基因的重新设计和合成来实现，如消除稀有密码子而利用最佳化密码子，二级结构最小化，调整GC含且雄里寺。遗传密码有64种，但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分。那些被最频繁利用的称为最佳密码子，那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子。实际上用做蛋白表达或生产的每种生物(包括大肠杆菌，酵母，哺乳动物细胞，植物细胞和昆虫细胞等)都表现出某种程度的密码子利用的差异或偏爱。丰度高的蛋白质的基因明显避免低利用率的密码子。重组蛋白的表达可能受密码子利用的影响(尤其在异源表达系统中)的事实并不很奇怪。基因利用的密 码子可能不是你正在利用的蛋白生产系统进行高水平表达所偏爱的密码子，这种情况是可能的。利用偏爱密码子并避免利用率低的或稀本文档来自技高网...

【技术保护点】
外源基因在沙门氏菌中优化表达的方法，其特征在于，包括如下具体步骤：步骤1：从NCBI数据库中获得沙门氏菌基因的开放阅读框，将开放阅读框转化成为氨基酸序列，然后按照三个核苷酸编码一个氨基酸的方法，逐一统计每个沙门氏菌基因的开放阅读框的每个氨基酸对应的核苷酸，即编码氨基酸的核苷酸密码子，最终获得沙门氏菌密码子使用频率表；步骤2：分析沙门氏菌密码子使用频率表可知，其中密码子UAA、UGA、UAG、CGA、AGA、AGG、UGU使用的频率最低；而CUA、UCU、UGC、UCA?、CCU、CCC、CCA、CGG、AGU、AUA、ACA、GGA、CAC和ACU密码子使用频率较高；其余密码子使用频率最高；步...

【技术特征摘要】
1.外源基因在沙门氏菌中优化表达的方法，其特征在于，包括如下具体步骤: 步骤1 从NCBI数据库中获得沙门氏菌基因的开放阅读框，将开放阅读框转化成为氨基酸序列，然后按照三个核苷酸编码一个氨基酸的方法，逐一统计每个沙门氏菌基因的开放阅读框的每个氨基酸对应的核苷酸，即编码氨基酸的核苷酸密码子，最终获得沙门氏菌密码子使用频率表； 步骤2:分析沙门氏菌密码子使用频率表可知，其中密码子UAA、UGA、UAG、CGA、AGA、AGG、UGU 使用的频率最低；而 CUA、UCU、UGC、UCA、CCU、CCC、CCA、CGG、AGU、AUA、ACA、GGA、CAC和ACU密码子使用频率较高；其余密码子使用频率最高； 步骤3:克隆或者合成目的基因，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐家华，陈瑞爱，张东霞，汤钦，
申请(专利权)人：广东大华农动物保健品股份有限公司，肇庆大华农生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：