本发明专利技术涉及原细纤维结合抗体及其治疗和诊断帕金森氏症、路易体痴呆和其他α‑共核蛋白病的应用。抗体及其片段具有对人类α‑突触核蛋白原细纤维高的亲和力和α‑突触核蛋白单体的低的结合。组合物包含这样的抗体或片段。利用这样的抗体或片段来检测α‑突触核蛋白原细纤维；预防、推迟具有α‑突触核蛋白病理的神经退化性疾病的发作或治疗所述疾病；制备治疗具有α‑突触核蛋白病理的神经退化性疾病的药物组合物；诊断或监测具有α‑突触核蛋白病理的神经退化性疾病进展，以及减少或抑制α‑突触核蛋白聚集。
【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2011年02月25日的题为“原细纤维结合抗体及其在帕金森氏症、路易体痴呆和其他α-共核蛋白病的治疗和诊断方法中的应用”的中国专利申请号201180011363.X的分案申请。
本专利技术涉及具有对人类α-突触核蛋白(α-synuclein)原细纤维(protofibrils)高的亲和力和α-突触核蛋白单体低的结合的抗体或其片段，其中抗体或片段具有特定的互补决定区(CDR)序列。本专利技术也涉及包含这样的抗体或片段的组合物，并涉及利用这样的抗体或片段检测α-突触核蛋白原细纤维的方法。在进一步的实施例中，本专利技术涉及通过给予这样的抗体或片段预防、推迟具有α-突触核蛋白病理的神经退化性疾病(neurodegenerativedisorder)的发作或治疗所述疾病的方法，并涉及在制备治疗具有α-突触核蛋白病理的神经退化性疾病的药物组合物中应用这样的抗体或片段。本专利技术也涉及在诊断或监测具有α-突触核蛋白病理的神经退化性疾病的发展中应用这样的抗体或片段，并涉及通过这样的抗体或片段的给予减少或抑制α-突触核蛋白聚集的方法。
技术介绍
帕金森氏症(PD)和路易体痴呆(dementiawithLewybodies)(DLB)是具有α-突触核蛋白脑病理的神经退化性疾病的两个最普遍的实例。PD是最普遍的运动紊乱，且PD的特点是僵化、运动功能减退、颤动和姿势不稳定(posturalinstability)。认为大约四到六百万的世界人口患PD。DLB代表所有痴呆的5-15％。除了健忘和经常波动的其他疯狂的症状之外，DLB病人一般遭受反复出现的跌伤和视幻觉。α-突触核蛋白的神经元内(Intraneuronal)积聚导致路易体的形成，球形的嗜曙红玻璃质10-20μm大的内含物，或路易神经突的形成，拉长的线状的畸形的轴突和树突。在PD脑中，路易体和路易神经突的沉积物通常限于连接纹状体和黑质(substantianigra)的神经细胞。这些细胞对于运动和姿势功能的完成、说明PD症状的本性来说是至关重要的。在DLB脑中，在中脑和皮质区域中都发现路易体和路易神经突的广泛分布的沉积物。α-突触核蛋白是主要地发现的神经内的蛋白质。在神经细胞内，α-突触核蛋白主要地位于突触前(presynaptically)，且因此推测它在突触的活性的调节中扮演的作用。识别了α-突触核蛋白的三个主要的亚型，它的最长的和最普通的形式包含140个氨基酸。这种亚型已被应用，根据本专利技术的抗体的α-突触核蛋白(α-突触核蛋白)有关的特征涉及α-突触核蛋白的这种亚型。除了α-突触核蛋白之外，路易体由多种分子组成，其中一个分子是4-羟基-2-壬烯醛(4-hydroxy-2-nonenal)(HNE)、α,β-不饱和的羟基烯烃(hydroxyalkenal)(Qin等人，2007)。在体外已经显示HNE能修饰α-突触核蛋白，且因此促进α-突触核蛋白的寡聚化(oligomerization)。特别地是，已经显示HNE增加和固定原细纤维的形成，例如，α-突触核蛋白的可溶解的较大的寡聚形式(Qin等人，2007；WO2009/133521，包括在此以供参考)。在许多由错误折叠的α-突触核蛋白的病理的积聚表征的神经退化性疾病中已经暗示了氧化应激(Oxidativestress)。各种活性氧组分能诱导脂质的过氧化，如细胞膜或脂蛋白，且也导致来自多不饱和脂肪酸的高度地活性醛的产生(yoritaka等人，1996)。在具有DLB大约50％病例中可看到阿尔茨海默氏病(AD)的脑病理指征，例如，淀粉样斑块(amyloidplaques)和神经原纤维缠结(neurofibrillarytangles)。不清楚的是，平行的病理的存在是否暗示两种不同的疾病或者仅仅代表每一个各自紊乱的变体。有时将共病理的病例描述为具有AD的路易体变体(Hansen等人，1990)。近来的研究暗示了在AD和唐氏综合征(Down'ssyndrome)中α-突触核蛋白的作用，如已经证明了α-突触核蛋白蛋白质在这些紊乱中的边缘区中的积聚(Crews等人，2009)。HNE对半光氨酸、组氨酸和赖氨酸的侧链起反应并修饰所述侧链，充分地改变这些侧链的结构和物理性能。因此，HNE能与C-3碳或与醛基或其组合起反应。因此，HNE能作用于分子间地或作用于分子内共价地修饰蛋白质。帕金森氏症和路易体痴呆的遗传学能通过α-突触核蛋白基因的点突变或重复形成PD和DLB的稀有的主要地遗传的形式。已经描述了引起家族PD的致病突变A30P和A53T(Kruger等人，1998)(polymeropoulos等人，1998)和基因的重复(chartier-Harlin等人，2004)，然而已经报道了引起PD或DLB的一个其他的α-突触核蛋白突变，E46K(Zarranz等人，2004)和α-突触核蛋白基因的三倍体(triplication)(Singleton等人，2003)。仅部分地了解α-突触核蛋白突变种的致病的结果。然而，体外数据已经显示，A30P和A53T突变种增加聚集率(Conway等人，2000)。多种不同组成的α-突触核蛋白种类(单体、二聚体、寡聚体，包括原细纤维)都涉及聚集过程，所有这些可具有不同的毒性。不清楚的是，哪一个分子种类在脑中有毒性作用。然而，最近的研究表明，α-突触核蛋白的寡聚的形式是显著地神经毒性的。通过引起遗传的帕金森氏症的某些α-突触核蛋白突变种(A30P和A53T)，导致寡聚化增加率的观察给出关于寡聚物的作用的另外的证据。还没有完全地了解α-突触核蛋白聚集级联是如何开始的。可能，在这些中间大小种类在路易体中作为不可溶解的原纤维沉积之前，单体的α-突触核蛋白的改变的构造开始二聚体和三聚体的形成，其继续形成较大的可溶解的寡聚体，包括原细纤维。也应该理解，α-突触核蛋白寡聚体，一旦它们形成，则能结合新的单体和/或α-突触核蛋白较小的多聚体，因此加速原纤维(fibrils)形成过程。这样的播种(seeding)作用可能也能在细胞外空间中发生，如最近的证据表明α-突触核蛋白病理可在患病的脑中从神经细胞传播到神经细胞。除了在α-共核蛋白病(synucleinopathies)中的神经病理的改变之外，α-突触蛋白的水平通常在受侵袭的脑区域中增加(Klucken等人，2006)。α-共核蛋白病的主要的病理是细胞内的，其引起免疫治疗途径的挑战。然而，可能，活跃诱导的片段或被动给予的抗体也能在神经元内结合它们的靶抗原。此外，血浆和脑脊髓液两者中的α-突触核蛋白的识别(El-Agnaf等人，2006)说明，不仅仅在神经细胞内发现所述蛋白质。减少的这样的细胞外α-突触核蛋白可改变细胞内和细胞外蛋白质集合之间的平衡，且也导致减少细胞内的α-突触核蛋白。证据表明，在溶液中的α-突触核蛋白能渗透细胞膜中的脂质双分子层，并因此内在化或输出细胞。最近的发现证明，α-突触核蛋白在细胞外的空间中有毒性作用，因此，提供关于α-突触核蛋白病理如何作为疾病发展传遍脑的似乎真实的解释。研究显示，在移植的PD病人中路易病理传播给移植的神经细胞(Li等人，2008)。此外，通过内吞作用(endocytosis)将α-突触核蛋白传播给邻近本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有对人类α‑突触核蛋白原细纤维的高亲和力和α‑突触核蛋白单体及β‑突触核蛋白单体的低结合的抗体，其中，所述抗体对人类α‑突触核蛋白原细纤维的结合超过对α‑突触核蛋白单体的结合的100倍并且超过对β‑突触核蛋白单体的结合的100倍，所述抗体具有选自下列组合的三个可变的重链(VH)CDR序列和三个可变的轻链(VL)CDR序列的组合：(a)VH‑CDR‑1：SEQ ID NO:22，VH‑CDR‑2：SEQ ID NO:28，VH‑CDR‑3：SEQ ID NO:35，VL‑CDR‑1：SEQ ID NO:41，VL‑CDR‑2：SEQ ID NO:47和VL‑CDR‑3：SEQ ID NO:50,(b)VH‑CDR‑1：SEQ ID NO:23，VH‑CDR‑2：SEQ ID NO:29，VH‑CDR‑3：SEQ ID NO:36，VL‑CDR‑1：SEQ ID NO:42，VL‑CDR‑2：SEQ ID NO:47和VL‑CDR‑3：SEQ ID NO:50，(c)VH‑CDR‑1：SEQ ID NO:24，VH‑CDR‑2：SEQ ID NO:30，VH‑CDR‑3：SEQ ID NO:37，VL‑CDR‑1：SEQ ID NO:43，VL‑CDR‑2：SEQ ID NO:48和VL‑CDR‑3：SEQ ID NO:51，(d)VH‑CDR‑1：SEQ ID NO:25，VH‑CDR‑2：SEQ ID NO:31，VH‑CDR‑3：SEQ ID NO:38，VL‑CDR‑1：SEQ ID NO:44，VL‑CDR‑2：SEQ ID NO:47和VL‑CDR‑3：SEQ ID NO:52，(e)VH‑CDR‑1：SEQ ID NO:23，VH‑CDR‑2：SEQ ID NO:33，VH‑CDR‑3：SEQ ID NO:37，VL‑CDR‑1：SEQ ID NO:43，VL‑CDR‑2：SEQ ID NO:48和VL‑CDR‑3：SEQ ID NO:54，以及(f)VH‑CDR‑1：SEQ ID NO:27，VH‑CDR‑2：SEQ ID NO:34，VH‑CDR‑3：SEQ ID NO:40，VL‑CDR‑1：SEQ ID NO:46，VL‑CDR‑2：SEQ ID NO:49和VL‑CDR‑3：SEQ ID NO:55。...
【技术特征摘要】
2010.02.26 US 61/308,638;2010.10.25 US 61/406,2601.一种具有对人类α-突触核蛋白原细纤维的高亲和力和α-突触核蛋白单体及β-突触核蛋白单体的低结合的抗体，其中，所述抗体对人类α-突触核蛋白原细纤维的结合超过对α-突触核蛋白单体的结合的100倍并且超过对β-突触核蛋白单体的结合的100倍，所述抗体具有选自下列组合的三个可变的重链(VH)CDR序列和三个可变的轻链(VL)CDR序列的组合：(a)VH-CDR-1：SEQIDNO:22，VH-CDR-2：SEQIDNO:28，VH-CDR-3：SEQIDNO:35，VL-CDR-1：SEQIDNO:41，VL-CDR-2：SEQIDNO:47和VL-CDR-3：SEQIDNO:50,(b)VH-CDR-1：SEQIDNO:23，VH-CDR-2：SEQIDNO:29，VH-CDR-3：SEQIDNO:36，VL-CDR-1：SEQIDNO:42，VL-CDR-2：SEQIDNO:47和VL-CDR-3：SEQIDNO:50，(c)VH-CDR-1：SEQIDNO:24，VH-CDR-2：SEQIDNO:30，VH-CDR-3：SEQIDNO:37，VL-CDR-1：SEQIDNO:43，VL-CDR-2：SEQIDNO:48和VL-CDR-3：SEQIDNO:51，(d)VH-CDR-1：SEQIDNO:25，VH-CDR-2：SEQIDNO:31，VH-CDR-3：SEQIDNO:38，VL-CDR-1：SEQIDNO:44，VL-CDR-2：SEQIDNO:47和VL-CDR-3：SEQIDNO:52，(e)VH-CDR-1：SEQIDNO:23，VH-CDR-2：SEQIDNO:33，VH-CDR-3：SEQIDNO:37，VL-CDR-1：SEQIDNO:43，VL-CDR-2：SEQIDNO:48和VL-CDR-3：SEQIDNO:54，以及(f)VH-CDR-1：SEQIDNO:27，VH-CDR-2：SEQIDNO:34，VH-CDR-3：SEQIDNO:40，VL-CDR-1：SEQIDNO:46，VL-CDR-2：SEQIDNO:49和VL-CDR-3：SEQIDNO:55。2.根据权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体具有(a)的所述CDR序列组合。3.根据权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体具有(b)的所述CDR序列组合。4.根据权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体具有(...
【专利技术属性】
技术研发人员：埃娃·努德斯特伦，亚里克斯·卡斯拉亚恩，莫妮卡·埃克贝里，瓦伦丁娜·斯克雷潘蒂松德奎斯特，拉尔斯·兰费尔特，马茨·霍姆奎斯特，
申请(专利权)人：生命北极神经科学公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE
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