本发明专利技术涵盖重组痘病毒，优选改良的安卡拉痘苗(MVA)病毒，所述病毒包含可操作地连接至编码抗原的核苷酸序列的Pr13.5启动子，并且涵盖所述痘病毒的用途。本发明专利技术涉及通过向哺乳动物，优选向人施用重组MVA的一次或多次免疫接种来诱导针对特异性抗原的强的CD8T细胞和抗体应答的组合物和方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】用于稳健T细胞和抗体应答的PR13. 5启动子 专利技术背景 MVA来源于安卡拉皮肤痘苗毒株（安卡拉尿囊绒膜痘苗（CVA)病毒），所述病毒在 Vaccination Institute, Ankara, Turkey保持许多年并且用作对人进行疫苗接种的基础。 然而，由于通常发生与痘苗病毒（VACV)相关联的严重接种后并发症，曾经多次试图产生更 加减毒、更安全的天花疫苗。 在1960年至1974年期间，Prof. Anton Mayr通过在CEF细胞中连续传代570次 以上来成功地将CVA减毒（Mayr 等人，1975, Passage History:Abstammung，Eigenschaften und Verwendung des attenuierten Vaccinia-Stammes MVA. Infection 3:6-14)。作为作 为预天花疫苗的MVA的早期开发的一部分，在处于来自痘苗的不良反应的风险下的受试者 中，曾经使用MVA-517(对应于第517次传代）以及Lister Elstree(Stickl, 1974, Smallpox vaccination and its consequences:first experiences with the highly attenuated smallpox vaccine"MVA".Prev.Med. 3(1) :97_101;Stickl 和 Hochstein-Mintzel，1971，I ntracutaneous smallpox vaccination with a weak pathogenic vaccinia virus(〃MVA virus〃）.Munch Med Wochenschr. 113:1149-1153)来进行临床试验。1976 年，在德国，来 源于MVA-571种子储备（对应于第571次传代）的MVA作为两阶段肠胃外天花疫苗接 种程序中的初免疫苗（primer vaccine)加以注册。随后，MVA-572在大约120, 000名高 加索人个体中使用，大部分儿童在1与3岁之间，并且未报道了严重副作用，虽然许多受 试者处于具有与常规痘苗病毒相关联的并发症高风险的群体之中（Mayr等人，1978, The smallpox vaccination strain MVA:marker,genetic structure,experience gained with the parenteral vaccination and behaviour in organisms with a debilitated defence mechanism(作者翻译）.Zentralbl. Bacteriol. (B) 167:375-390)。MVA-572 作 为 ECACC V94012707 寄存于 European Collection of Animal Cell Cultures, Vaccine Research and Production Laboratory, Public Health Laboratory Service, Centre for Applied Microbiology andResearch, Porton Down, Salisbury, Wiltshire SP40JG,United Kingdom。 因为许多传代用于将MVA减毒，所以取决于CEF细胞中的传代数目，存在许多不同 毒株或分离物。所有MVA毒株来源于Dr. Mayr并且大多数从在德国的天花根除程序期间 使用的MVA-572,或广泛用作兽医疫苗的MVA-575得到。MVA-575于2000年12月7日在 European Collection of Animal Cell Cultures (ECACC)以寄存编号 V0012〇7〇7 寄存。 通过CVA在原代鸡胚胎成纤维细胞中的连续繁殖（超过570次传代），获得减毒的 CVA-病毒MVA(改良的安卡拉痘苗病毒）。MVA由Bavarian Nordic进一步传代并且被称为 MVA-BN。与祖CVA病毒相比，MVA以及MVA-BN缺少大约13% (来自六个主要和多个次要缺 失位点的26. 5kb)的基因组。这些缺失影响许多毒力和宿主范围基因，以及编码A型包涵体 蛋白（ATI)的基因和编码将成熟病毒粒子引导至A型包涵体中的结构蛋白质的基因的较大 片段。MVA-BN的样品于2000年8月30日以编号V00083008寄存于European Collection of Cell Cultures(ECACC)〇 MVA-BN可连接并且进入人细胞，其中病毒编码的基因非常有效地表达。然而，子 代病毒的组装和释放未发生。MVA-BN和衍生物的制剂已经施用至许多类型的动物，和超过 2000名人受试者，包括免疫缺陷个体。所有疫苗接种已经证明总体上安全并良好耐受的。 来自许多不同出版物的认识是所有MVA毒株是相同的并且代表高度减毒、安全、 活病毒载体。然而，临床前测试显示与其它MVA毒株相比，MVA-BN展示极好的减毒和功效 (WO 02/42480)。如例如以编号V00083008寄存于ECACC的MVA变体毒株MVA-BN能够在体 外在鸡胚胎成纤维细胞（CEF)中繁殖性复制，但是不能够在人细胞中繁殖性复制，其中MVA 575或MVA 572可繁殖性复制。举例来说，MVA-BN在人角化细胞细胞系HaCaT、人胚胎肾细 胞系293、人骨骼骨肉瘤细胞系143B和人宫颈腺癌细胞系HeLa中不能繁殖性复制。此外， 在不能产生成熟B和T细胞并且因此严重免疫受损并对于复制病毒非常敏感的小鼠模型 中，MVA-BN毒株不能复制。MVA-BN毒株的额外或替代性质是在与DNA初免/痘苗病毒加强 方案相比时，能够在痘苗病毒初免/痘苗病毒加强方案中诱导至少基本上相同水平的免疫 力。 术语"不能繁殖性复制"在本申请中如WO 02/42480和美国专利6, 761，893中所定 义来使用，所述文献通过引用并入本文。因此，此术语适用于使用美国专利6, 761，893中所 描述的测定在感染之后4天具有小于1的病毒扩增率的病毒，所述测定通过引用并入本文。 病毒的"扩增率"是从感染细胞产生的病毒（输出）与最初用于首先感染细胞的量（输入） 的比率。输出与输入之间的"1"的比率定义从感染细胞产生的病毒的量与最初用于感染细 胞的量相同的扩增状态。 根据一个实施方案，MVA-BN或它的衍生物的特征是在与DNA初免/痘苗病毒加强 方案相比时，在痘苗病毒初免/痘苗病毒加强方案中诱导至少基本上相同水平的免疫力。 痘苗病毒被视为在与DNA初免/痘苗病毒加强方案相比时，在痘苗病毒初免/痘苗病毒加 强方案中诱导至少基本上相同水平的免疫力，只要在与DNA初免/痘苗病毒加强方案相比 时，在痘苗病毒初免/痘苗病毒加强方案中，如在W002/42480所公开的"测定1"和"测定 2"之一，优选地在两种测定中所测量的CTL应答至少基本上相同。更优选地，在与DNA初 免/痘苗病毒加强方案相比时，痘苗病毒初免/痘苗病毒加强施用本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种在人体内诱导针对新抗原的稳健CD8T细胞应答的方法，其包括向所述人施用重组改良的安卡拉痘苗(MVA)病毒的一次或多次施用；其中所述重组MVA包含Pr13.5启动子，所述启动子可操作地连接至编码所述新抗原的核苷酸序列，其中所述Pr13.5启动子包含至少40个碱基的核酸序列的至少1个拷贝，所述核酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％同一性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗宾·施泰格瓦尔德，凯·布林克曼，
申请(专利权)人：巴法里安诺迪克有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK
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