本发明专利技术涉及ＳＰＡ－抗体三聚体及基于该聚体的细胞处理试剂盒及其制备方法和用途。该三聚体由抗红细胞抗体和ＳＰＡ以及某种抗白细胞抗原或其他抗原的抗体形成。该三聚体通过自身的抗红细胞抗体和红细胞结合、另一种抗体和相应的白细胞抗原（或其他抗原）结合，之后通过血沉过程或其他如密度梯度离心等方法沉淀白细胞（或其他细胞、因子）和红细胞，起到清除相应细胞等成分的目的，也可借助ＳＰＡ使红细胞和相应抗原连接，作为检测某些抗原的手段。本发明专利技术方便简单，可直接用于临床分离、提取干细胞／祖细胞，且收集提取的干细胞／祖细胞无任何外来的标记物。而基于该三聚体的试剂盒可工业化生产，以实现了人类造血干细胞分离、纯化技术的推广。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学
，特别是涉及葡萄球菌A蛋白 (staphylococalprotein A，以下简称SPA)-抗体三聚体及基于该聚体的细胞处理试剂盒及 其制备方法和用途。
技术介绍
SPA能与人及多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc片段结合。结合的亲和性次序 依次是猪、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛。SPA除与IgG结合外，还能与血清中少量的IgM和 IgA结合，SPA菌对各类免疫球蛋白的吸附率IgG为90% 98%，IgM为2% 30%，IgA 为 1. 5% 20%。出现共沉反应的SPA与IgG必须有两个结合部位，它们分别在Fc和Fab段上，缺 一虽能与SPA结合，但不出现共沉反应，这种Fab的参与并非SPA-抗体反应。现已研究表 明，IgG与SPA的结合部位是CH2和CH3的交界处。SPA应用很广，但所有应用的原理都离不开SPA具有与IgG的Fc段的结合能力，主 要应用方面如下1. SPA菌的协同凝集作用用已知的标准血清，吸附到SPA菌的表面，使之成为吸附抗体的载体，再以此去诊 断相应的未知抗原而产生肉眼可见的凝集颗粒，诊断的抗原可以是颗粒性的，也可以是可 溶性的。此种凝集相当于反向间接血凝，但省去间接血凝中的抗体纯化，红血球鞣化等复杂 手续，而只需要SPA菌体及粗制免疫血清即可。所以此法简单、快速，特异性敏感性均较满辰、ο2.作为广谱第二抗体用SPA代替抗体IgG的第二抗体，有如下优点①SPA制备容易，性质稳定，易纯 化，对人和多种哺乳动物的IgG都能应用，不受种属限制。②SPA的结合力强，相当于游离抗 体与抗原的结合力，对人和兔的亲和常数均为IO3L/克分子，结合后对IgG的活性无影响。 无论在01、371、441及561几乎均能立即结合而无需长时间的孵育，因此可以缩短试验 时间；③SPA容易标上1251、荧光素、辣根过氧化物酶、铁蛋白等，因此可与多种技术相结合； ④SPA分子高度均一，它不是免疫球蛋白，不受Fc受体影响，所以有较高的抗IgG特异性。3.用于提取纯化IgG利用SPA与IgG的结合特性提取IgG，比常规采用硫酸铵、 Sephadex柱，DEAE柱或免疫梯度离心等法要简便得多，而且纯度好。4.检测和提纯IgM IgM在病毒的早期诊断中具有重要意义，为了检测特异性IgM 抗体，必须首先在血清中除去IgG。采用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的办法，利用 此法也为IgM的提纯开辟了道路。5.其它方面用于免疫复合物的检测、体外激活补体功能试验、细胞表面标记以及 肿瘤表面抗原的检测等。干细胞(stem cell)是指具有无限或较长期的自我更新能力，并能分化出至少一 种高度分化子代细胞的细胞。根据细胞来源将干细胞分成胚胎性干细胞和成体干细胞，而 成体干细胞包括自体干细胞和异体干细胞。目前国内外的最新进展促使“骨髓干细胞”移植血管新生的作用机理、机体内环境 对干细胞疗效的影响以及转基因骨髓源干细胞的作用进行进一步的研究，以提高干细胞的 治疗效果。 临床上的治疗过程中主要采集骨髓或外周血来源的单个核细胞进行移植，并认为 其中的⑶34+或⑶133+/VEGF-R2+细胞为血管新生的干/祖细胞，但这类细胞的增殖分化 功能、他们的归巢到血管损伤部位的能力以及达到治疗效果的有效数量等都是尚未充分了 解的内容。表面抗原(Lineage surface antigen)是当干细胞分化为各系的祖细胞和成熟细 胞时，会出现各系的专一性标志，如淋巴系⑶粒细胞系⑶13、⑶11、⑶15、⑶16，红 细胞系的 CD47、CD51、CD71，巨核细胞系的 CD31\CD41\CD42\CD61\CD63\CD107，T\NK 系的 ⑶2\OT25\ra7，这些在特定类型的血细胞表面出现的抗原通称为系表面抗原，Lin抗原阳 性就可以确定为祖细胞和成熟细胞，还有许多Lin抗原阴性的细胞称之为原始干细胞，如 ⑶34\rai33\SCA-l\OT38等等。我们可以根据各科室不同要求去除相关的成熟细胞系。干细胞能有效治疗各种细胞损伤性疾病，这已是全世界主流医学界公认的事实。 但是如何得到干细胞，如何分离、纯化取得存活的、很理想的干细胞是全世界科学家共同研 究的课题。目前从骨髓、脐带血中分离提取干细胞的技术有很多，如免疫磁珠法和流式细 胞仪法等。这些方法所存在的共同问题是第一不能有效保留所有类型的干细胞，第二造价 贵，技术条件要求较高。在临床推广应用上有一定的难度。
技术实现思路
本专利技术提供了一种将血液中红细胞和其他细胞/因子结合的中介物spa-抗体三 聚体，通过该三聚体可以将红细胞和所需要的白细胞或其他细胞/因子结合，通过血沉或 梯度离心等方法可以将血液中的特定细胞/因子去除。本专利技术的技术方案为1. Spa-抗体三聚体及其制备方法材料重组SPA ；A抗体抗红细胞单克隆或多克隆抗体；B抗体可根据临床和实 验需要选用不同的单克隆或多克隆抗体，如特异性淋巴细胞抗体(抗cd2抗体、抗cd3抗 体、抗cd4抗体、抗cdll抗体、抗cdl5抗体、抗cdl6抗体、抗cd8抗体、抗cdl9抗体、抗cd5 抗体、抗cd7抗体、抗cdl3抗体、抗cd33抗体、抗cdlO抗体、抗cd21抗体、抗cd22抗体、抗 cd23抗体、抗cd32抗体、抗cd35抗体、抗40cd抗体、抗cd45抗体、抗cd54抗体、抗cd56 抗体、抗cd64抗体、抗cdl33抗体、抗cdll7抗体、抗cd90抗体)、抗马立克氏病毒抗体、抗 HBS抗体、抗猪瘟病毒抗体、抗副溶血性弧菌抗体、抗伤寒抗体等。Spa以无菌PBS液稀释，将A抗体(抗红细胞单克隆抗体或多克隆抗体)和B抗体 以抗体稀释液稀释，各种稀释浓度均可(推荐spa为0. lmg/ml，抗体浓度0. lmg/ml稀释)。原料质量配比为=SPA A抗B抗为1. 5 1 1 ；如SPA为1. 5ml，A抗为Iml, B抗为lml。(浓度均为0. lmg/ml)反应温度4°C 40°C等均可，较佳反应温度为室温 40°C，推荐37°C温育(水浴 或温箱均可)。反应时间20分钟 12小时，较佳反应时间为30分钟 3小时，推荐37°C温育30 分钟。产物浓度0·lmg/ml。贮存条件4°C贮存。该三聚体可以用于从人类骨髓和脐带血中分离有核细胞的体外分离试剂盒等，该技术具有方法简单，造价低廉，可以工业化生产，易于推广的特点。该技术有效的去除了血 浆、红细胞、血小板、血浆蛋白、离子，以及其他所需要去除德成熟的单核细胞、淋巴细胞、多 核细胞，而保留了所有的干细胞、祖细胞、间充质干细胞等。这是一种可以直接用于临床分 离、提取干细胞的骨髓/脐带/外周血干细胞体外分离试剂盒的应用方法。2、细胞处理试剂盒基于上述三聚体，结合淋巴细胞分离液，抗体结合的层析板， 采用密度梯度离心法、免疫层析法及免疫共沉淀法相结合的方法，制作细胞处理试剂盒。其 特征在于该试剂盒中包含有SPA(葡萄球菌蛋白A)和红细胞抗体、特异性淋巴细胞抗体的三聚体。SPA和抗红 细胞单克隆抗体和各种抗淋巴细胞抗体的反应浓度均为0. 1 lmg/ml。SPA为1. 5ml，抗 红细胞单克隆抗体为lml，抗淋巴细胞抗体为lml。37°C水浴箱内温育30 6本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种葡萄球菌Ａ蛋白－抗体三聚体，其特征在于：所述三聚体为葡萄球菌Ａ蛋白同抗体Ａ、抗体Ｂ的结合，所述抗体Ａ为抗红细胞单克隆抗体或多克隆抗体，所述抗体Ｂ为待测单克隆抗体或多克隆抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张厚亮，
申请(专利权)人：张厚亮，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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