人巨细胞病毒中和抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及特异性针对中和人巨细胞病毒(hCMV)的中和抗体，特别是特异性针对于hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A的组合的抗体。本发明专利技术的抗体以高效力中和感染。本发明专利技术还涉及产生该抗体的永生化B细胞、该抗体所结合的表位，以及该抗体和表位在筛选方法以及疾病的诊断和治疗中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有中和人巨细胞病毒(hCMV)的高效力(potency)且特异性针对 hCMV蛋白ULU8、UL130和UL131A的组合的抗体，以及产生该单克隆抗体的永生化B细胞。 本专利技术还涉及通过hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A的组合确定的、该抗体所结合的表面 抗原，以及该抗体和表位在筛选方法以及疾病的诊断、预防和治疗中的用途。
技术介绍
人巨细胞病毒(hCMV)是一种广泛分布的病原体，其可在免疫抑制的成人中和胎 儿感染后导致严重的病理，并参与例如动脉粥样硬化的慢性疾病。hCMV感染多种细胞类型， 包括成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞和造血细胞[1]。正在被开发作为候选疫苗的体外繁 殖的hCMV减毒菌株已经丧失了内皮细胞的向性(tropism)，但是仍然保留感染成纤维细胞 的能力[2]。hCMV的细胞向性被认为是由两种病毒糖蛋白复合物调控的。例如gH、gL和g0 的糖蛋白的复合物似乎是感染成纤维细胞所需要的，而gH、gL和由UL131-ULU8基因编码 的蛋白质的复合物参与内皮细胞、上皮细胞和树突细胞的感染[2-8]。超免疫球蛋白已被商业化用于预防移植相关的hCMV疾病，并且最近的证据表明 它们对孕妇有治疗效果[9]。该治疗方法受限于可被递送的中和抗体的量低，因而非常需要 获得具有高中和能力的人抗体(如人单克隆抗体)。然而，hCMV中和抗体的靶点仍尚待确 定。尽管一些针对gH、gB以及ULU8和UL130基因产物的抗体在体外表明具有中和活性[7， 10，11]，且针对gH的抗体已经在临床试验中进行了评估(由于缺乏治疗效果被终止了)，但 分离的单克隆抗体的中和效力至今仍一般，因为在抗体浓度范围是0. 5-20mg/ml时才可以 观察到中和作用。此外，目前的方法通常使用成纤维细胞作为目标细胞来测定抗-hCMV抗 体的中和效力。然而，已知hCMV通过感染其他细胞类型(例如内皮细胞、上皮细胞以及白 细胞)也能引起病理。已知的针对UL 1 和UL 130的抗体显示在中和内皮细胞感染中的 效力很低[7]，且看起来不存在可用的能够以高效力中和目标非成纤维细胞的感染的单克 隆抗体。因此，需要能够以高价中和目标非成纤维细胞的hCMV感染的抗体，以及阐明该抗 体结合的靶点。专利技术概述本专利技术部分是基于能够以高效力中和hCMV感染的新抗体以及本专利技术的这些抗体 所结合的新表位的发现。因此，在一个实施方式中，本专利技术包括具有中和hCMV的高效力 的中和抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段特异性针对hCMV蛋白UL128、UL130和 UL131A的组合。在另一个实施方式中，本专利技术包括编码本专利技术抗体或抗体片段的核酸分子。在再一个实施方式中，本专利技术包括含有编码本专利技术抗体或抗体片段的核酸分子的载体。在另一个实施方式中，本专利技术包括含有包含本专利技术核酸分子的载体的细胞。在另一个实施方式中，本专利技术包括表达具有中和hCMV的高效力的抗体的永生化B 细胞克隆，其中所述抗体特异性针对hCMV蛋白ULU8、UL130和UL131A的组合。在再一个实施方式中，本专利技术包括与本专利技术的抗体相结合的表位。在进一步的实施方式中，本专利技术包括包含与本专利技术的抗体相结合的表位的免疫原 性多肽。在另一个实施方式中，本专利技术包括与结合本专利技术的抗体的表位相结合的配体。在进一步的实施方式中，本专利技术包括用于制备具有中和hCMV的高效力的抗体的 方法，其中所述的抗体特异性针对hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A的组合。该方法包括 (i)培养表达本专利技术抗体的永生化B细胞克隆和(ii)从B细胞分离抗体。在另一个实施方式中，本专利技术包括一种包含本专利技术抗体或抗体片段、本专利技术的核 酸、表达本专利技术抗体的永生化B细胞克隆，或包含与本专利技术的抗体或抗体片段相结合的表 位的免疫原性多肽的药物组合物。在进一步的实施方式中，本专利技术包括具有中和hCMV的高效力的抗体或抗体片段 (其中所述抗体特异性针对hCMV蛋白ULU8、UL130和UL131A的组合)、编码具有中和hCMV 的高效力的抗体或抗体片段的核酸(其中所述抗体特异性针对hCMV蛋白质UL128、UL130 和UL131A的组合)、表达具有中和hCMV的高效力的抗体的永生化B细胞克隆(其中所述抗 体特异性针对hCMV蛋白质ULU8、UL130和UL131A的组合)，或包含结合具有中和hCMV的 高效力的抗体的表位的免疫原性多肽(其中所述抗体特异性针对hCMV蛋白质UL128、UL130 和UL131A的组合)在治疗或诊断中的应用。在另一个实施方式中，本专利技术包括一种用于诊断hCMV感染的试剂盒，其包含本发 明抗体或抗体片段、编码本专利技术的抗体或抗体片段的核酸，或结合本专利技术抗体的表位。在另一个实施方式中，本专利技术包括用于制备重组细胞的方法。该方法包括(i)对 来自表达本专利技术抗体的永生化B细胞克隆的核酸进行测序和(ii)利用获自步骤(i)的序 列信息来制备用于插入至表达宿主以允许在该宿主中表达目的抗体的核酸。在进一步的实施方式中，本专利技术包括用于制备具有中和hCMV的高效力并且特异 性针对hCMV蛋白ULU8、UL130和UL131A的组合的抗体的方法。该方法包括培养或传代培 养通过上述方法获得的表达宿主，且任选地纯化目的抗体。在另一个实施方式中，本专利技术包括筛选可诱导针对hCMV的免疫应答的多肽的方 法，包括利用本专利技术的抗体或抗体片段筛选多肽库。附图简述附图说明图1显示了表明人单克隆抗体(mAb)6G4识别通过hCMV蛋白ULU8、UL130和 UL131A的组合所确定的表位的FACS分析。图2显示了抗体6G4的重链和轻链的核苷酸和氨基酸序列。⑶R序列为粗体。专利技术详述本专利技术是基于中和hCMV感染和具有中和hCMV感染的特别高的效力的抗体和抗体 片段的制备的。这些抗体是令人想要的，因为仅需低浓度就能中和一定量的病毒。施用较 低量的抗体就能有利于高水平的保护。人单克隆抗体和分泌这些抗体的永生化B细胞克隆也同样包含在本专利技术的范围之内。本专利技术人发现了针对hCMV蛋白ULU8、UL130和UL131A的组合的抗体在中和hCMV 中是特别有效的。不希望局限于任何理论，该组合可以是形成由抗体识别的独特表位的 UL128.UL130和UL131A的精确复合物。本专利技术还涉及对抗体所结合的表位的表征以及表位在提高免疫应答中的用途。本专利技术还涉及不同的涉及本专利技术抗体和它们结合的表位的方法和用途。本专利技术的抗体本专利技术提供了具有中和hCMV的特别高的效力的单克隆抗体或重组抗体。本专利技术 还提供了这些单克隆或重组抗体的片段，特别是保留了所述抗体的抗原结合活性的片段。 在本说明书中，“中和hCMV的高效力”是指本专利技术的抗体分子在标准检测中以比本领域公知 的抗体(例如与MSL-109、8F9或3E3相比)低得多的浓度中和hCMV。在一个实施方式中，本专利技术的抗体分子能以0. 16μ g/ml或更低的浓度(即0. 15、 0.125,0.1,0.075,0.05,0.025,0.02,0.015,0.0125,0.01,0.0075,0.005,0.004,0.003、 0.002或更低)中和hCMV。在另一个实施方式中，该抗体能以0.016 μ g/ml或更低本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种具有中和人巨细胞病毒（ｈＣＭＶ）的高效力的中和抗体，其中所述抗体特异性针对ｈＣＭＶ蛋白ＵＬ１２８、ＵＬ１３０和ＵＬ１３１Ａ的组合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种具有中和人巨细胞病毒(hCMV)的高效力的中和抗体，其中所述抗体特异性针 对 hCMV 蛋白 UL128、UL130 和 UL131A 的组合。2.根据权利要求1所述的抗体，其包括SEQID NO :1_6中的一个或多个。3.根据权利要求1所述的抗体，其包括包含SEQID NO :1-3中的一个或多个的重链。4.根据权利要求1所述的抗体，其含有包含SEQID NO :1的⑶RH1、SEQ ID NO :2的 CDRH2 及 SEQ ID NO 3 的 CDRH3 的重链。5.根据权利要求1所述的抗体，其包括包含SEQID NO :4_6中的一个或多个的轻链。6.根据权利要求1所述的抗体，其含有包含SEQID NO :4的⑶RL1、SEQ ID NO :5的 CDRL2 及 SEQ ID NO 6 的 CDRL3 的轻链。7.根据权利要求3所述的抗体，其中所述重链具有SEQID NO :7所示的序列。8.根据权利要求5所述的抗体，其中所述轻链具有SEQID NO :8所示的序列。9.根据前述任一项所述的抗体，其中所述抗体为人单克隆抗体。10.根据权利要求9所述的抗体，其中所述抗体为单克隆抗体6G4。11.与能够结合前述任一项权利要求所述的抗体的表位相结合的抗体。12.前述任一项权利要求所述的抗体的片段，其中所述片段特异性针对hCMV蛋白 UL128、UL130 和 UL131A 的组合。13.根据权利要求12所述的抗体片段，其为Fab、Fab，、F(ab')2或Fv片段。14.编码前述任一项权利要求所述的抗体或抗体片段的核酸分子。15.根据权利要求14所述的核酸分子，其中所述核酸分子包括SEQID NO :9_16中的 任一个。16.包含权利要求14或权利要求15所述的核酸分子的载体。17.包含权利要求16所述的载体的细胞。18.表达权利要求1-11中任一项所述的抗体的永生化B细胞克隆。19.结合权利要求1-11中任一项所述的抗体的表位。20.包含权利要求19所述的表位的免疫原性多肽。21.结合权利要求19所述的表位的配体。22.根据权利要求21所述的配体，其为抗体。23.一种用于制备权利要求1-11中任一项所述的抗体的方法，包括(i)培养权利要求 18所述的永生化B细胞克隆和(ii)从B细胞分离抗体。24.一种药物组合物，其包含权利要求1-13或22中任一项所述的抗体或抗体片段、权 利要求14或权利要求15所述的核酸、权利要求18所述的永生化B细胞克隆或权利要求20 所述的免疫原性多肽。25.根据权利要求M所述的药物组合物，其包含特异性针对通过hCMV蛋白UL128、 UL130和UL131A的组合确定的表位的第一抗体或抗体片段，以及特异性针对第二表位的第 二抗体或片段。26.根据权利要求M或权利要求25所述的药物组合物，其进一步包含药学上可接受的 稀释剂或载体。27.权利要求1-13或22中任一项所述的抗体或抗体片段、权利要求14或权利要求15 所述的核酸、权利要求18所述的永生化B细胞克隆或权利要求20所述的免疫原性多肽在治疗或诊断中的用途。28.权利要求1-13或22中任一项所述的抗体或抗体片段、权利要求14或权利要求15 所述的核酸、权利要求18所述的永生化B细胞克隆或权利要求20所述的免疫原性多肽在 ⑴制备用于治疗hCMV感染的药物或(ii)疫苗中的用途。29.根据权利要求1-13...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·兰扎维希雅，A·玛卡格诺，
申请(专利权)人：胡马斯有限公司，
类型：发明
国别省市：US