重组制造抗ＲＳＶ抗体的方法技术

本发明专利技术涉及制造重组抗－ＲＳＶ抗体及抗体组合物的方法。该方法包括获得以变体核酸序列之集合转染的细胞的集合，其中在该集合中的每个细胞均以单一独特的抗－ＲＳＶ抗体转染，并能够表达它们。细胞是在适当的条件下培养以表达该抗－ＴＳＶ抗体。通过以避免位点特异性整合的表达载体转染，将核酸序列导入细胞内。本方法适合制造可供治疗用途的重组的单－和多克隆抗－ＲＳＶ抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及制造重组抗-RSV抗体，其使用不依赖位点特异性整合的生产系统。 现有技术可通过从具有针对想要靶之免疫反应的供体中分离编码抗体之核酸，接着筛选与该想要靶特异地结合的抗体，来生重组多克隆抗体。可通过经适应之哺乳动物表达技 术(其基于将一抗体表达质粒以位点特异性整合到每个细胞相同的基因组位置内，如同 在TO 2004/061104中描述的)，在容器中制造多克隆抗体。这类型多克隆抗体的一个实例 为针对罗猴(Rhesus)D的重组多克隆抗体(W0 2006/007850)。其它实例为针对正痘病毒 (orthopoxvirus)的重组多克隆抗体(W0 2007/065433)。使用位点特异性整合，导致在细 胞群中，每个细胞中含有一单一拷贝，并预期其中的表达水平和生长速率是相对较一致的。
技术实现思路
本专利技术提供生产特定重组多克隆抗-RSV抗体的供选择方法，该方法不依赖位 点特异性整合，并因此提供增加的关于细胞系选择的弹性，同时仍维持抗体的多克隆性 (polyclonality)。此外，表达水平可比利用位点特异性整合的可能性有的更高。本专利技术之方法是基于将编码抗-RSV抗体之基因随机整合到宿主细胞内，优选的 是接着克隆具有想要特征之经稳定转染的单一细胞。然后混合分别产生该多克隆抗-RSV 抗体之个别成员的个别细胞克隆，以产生制造多克隆之细胞系，用以产生多克隆抗-RSV抗 体。因此，第一方面本专利技术涉及多克隆细胞系，其包括2至η个细胞亚群，每个亚群表 达重组多克隆抗-RSV抗体的一个独特(distinct)抗体成员，该细胞包括至少一个表达构 建体，其编码一个独特的抗体成员，且随机并稳定地整合到基因组内，其中该重组多克隆 抗-RSV抗体的独特成员选自由包括⑶R1、⑶R2和⑶R3区(其选自由在本文表3中提供之 VH和VL对所组成的组)的抗体分子所组成的组。本专利技术亦关于制造重组多克隆抗-RSV抗 体的方法，包括培养这类多克隆细胞系，并从上清液中回收该多克隆抗体。表3的抗体是分离自健康供体(其业已暴露在RSV感染下并已经升高针对RSV之 免疫反应)的完全人类抗体。因此，包含来自表3的不同抗体之多克隆抗体，反映对RSV的 人类多克隆免疫反应。本专利技术允许重组多克隆抗-RSV抗体在一个容器中的商业生产，例如以用于医药 组合物。本专利技术之一重要特征为在制造期间，使构成该多克隆抗-RSV抗体之个别分子的偏 好表达保持在低水平，以将不想要的批-至-批变异减至最少，并避免在制造期间排除该多 克隆抗-RSV抗体的成员。在其它方面，本专利技术涉及使用依赖将表达构建体随机整合到宿主细胞之基因组内 的表达系统，制造特定单克隆抗-RSV抗体的细胞系和方法。特定而言，本专利技术涉及包括能够指导抗-RSV抗体表达之表达构建体的细胞，该抗体选自由至少包括在表3中列举的抗体之互补性-决定-区(CDR)的抗体所组成的组，其中该细胞包括至少一个表达构建体，其被稳定地整合在基因组中的随机位置。这类细胞可通过以下产生在允许随机整合至该细胞之基因组内的条件下，以编 码该抗-RSV抗体之表达构建体转染细胞，并选择至少一个具有稳定整合在随机位置之表 达构建体的细胞，该表达构建体编码抗-RSV抗体，其选自由至少包括在表3中列举的抗体 之互补性-决定-区(OTR)的抗体所组成的组。在优选的具体实施方案中，该多克隆细胞系是用作为制造多克隆的细胞系，并冷 冻储存，且用作为多克隆主细胞库(polyclonal Master Cell Bank, pMCB)，从其中可将试 样融解，并用来作为多克隆工作细胞库(polyclonalWorking Cell Bank，pWCB)。为了制造 单克隆抗体，使用单克隆细胞系以产生主细胞库(Master Cell Bank，MCB)，可从其中产生 工作细胞库(Working CelIBank，WCB)。定义“蛋白质”或”多肽”意指任何链的氨基酸，不管长度或翻译-后修饰。蛋白质可以 单体或多聚体形式存在，包括二或多个组装好的多肽链、蛋白质之片段、多肽、低聚肽或肽。“重组多克隆抗体之独特成员” 一词代表包括不同抗体分子之抗体组合物的一个 抗体分子，其中每个抗体分子都是与该组合物之其它分子同源的，但亦含有一或多片可变 多肽序列，其特征在于在该多克隆抗体的独特成员之间的氨基酸序列差异。“抗体”一词描述血清的功能组份，且通常意指分子(抗体或免疫球蛋白)的集合， 或为单一分子(抗体分子或免疫球蛋白分子)。抗体分子能够与特定的抗原决定位(抗原 或抗原之抗原决定位)结合或反应，其可转而诱导免疫学之效应物机制。通常认为个别的 抗体分子是单特异性的，而抗体分子之组合可能是单克隆(即由相同的抗体分子组成)或 多克隆的(即由不同的抗体分子组成，其与在相同抗原上，或甚至是在个别、不同抗原上相 同或不同的抗原决定位(表位)反应)。每个抗体分子均具有独特的结构，使其得以特异地 结合其相对应之抗原，且所有天然的抗体分子均具有相同的整体基本结构，有两个相同的 轻链和两个相同的重链。亦将抗体集体地称为免疫球蛋白。在本文中使用的抗体一词，亦 企图包含嵌合型和单链抗体，还有抗体之结合片段，如Fab、Fv片段或scFv片段，以及多聚 体形式，如二聚的IgA分子或五价IgM。“多克隆抗体”一词描述不同抗体分子的组合物，其能够与在相同或在不同抗原上 的数个不同的特定抗原性决定位结合或反应。通常，认为多克隆抗体的变异性是位在所谓 的多克隆抗体之可变区。然而，在本专利技术之前后文中，亦可了解多克隆性是描述在个别抗 体分子所属之所谓的恒定区之间的差异，例如在含有二或多个抗体同种型(如人类同种型 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl、IgA2、IgM、IgD 和 IgE，或小鼠同种型 IgGl、IgG2a、IgG2b、 IgG3和IgA)之抗体混合物的情况下。经常使用“免疫球蛋白”一词作为在血液或血清中找到之抗体混合物的集合名称， 但亦可用来称呼衍生自其它来源之抗体的混合物。“免疫球蛋白分子” 一词代表个别的抗体分子，例如作为免疫球蛋白的一部分，或 任何多克隆或单克隆抗体组合物的一部分。使用“变体核酸分子库”一词，描述核酸分子的集合，其集体地编码”重组多克隆 抗-RSV-抗体”。当用于转染时，将变体核酸分子库纳入表达载体库中。这类库典型地具有至少 3、5、10、20、50、1000、104、105 或 IO6 个个别的成员。当在本文中使用时，应了解“独特的核酸序列”一词为可编码不同多肽链(其一起 组成抗-RSV抗体)的核酸序列。在该独特的核酸序列由一个以上编码序列构成之处，这些 序列可以呈双顺反子转录单元的形式，或若以可操作之方式与适当的启动子连接，它们便 可以两个分开的转录单元来运作。同样的，若将选择标记连同编码抗体或其亚单元(亚基) 之核酸一起纳入转录单元内，则可考虑使用三_或四顺反子转录单元。优选的是，本专利技术之 独特的核酸序列为核酸分子(像是例如载体)的一部分。当将其导入细胞内时，一起编码 完全组装好之抗体的基因，也在相同的载体中，因此在一个核酸序列中连接在一起。当在本文中使用时，“载体”一词意指为了在不同遗传环境之间运 送，和/或为了在 宿主细胞中表达，可将核酸序列插入本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多克隆细胞系，其包括２到ｎ个细胞亚群，每个亚群表达重组多克隆抗－ＲＳＶ抗体的一个独特抗体成员，该细胞包括至少一个编码一个独特抗体成员的表达构建体，其随机且稳定地整合在基因组内，其中该重组多克隆抗－ＲＳＶ抗体的独特成员选自由包括ＣＤＲ１、ＣＤＲ２和ＣＤＲ３区的抗体分子所组成的组，其中所述区选自在本文表３中提供的Ｖ↓［Ｈ］和Ｖ↓［Ｌ］对的组。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：安妮B托尔斯特拉普，约翰兰托，芬恩威伯格，拉斯S尼尔森，
申请(专利权)人：西福根有限公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]