针对甲型流感病毒H5N1株系的抗体制造技术

本发明专利技术人提供了可中和甲型流感病毒H5N1株系的人类抗体。发明专利技术人还提供了可中和H5亚型进化枝2中的甲型流感病毒株系的抗体，可中和甲型流感病毒H5N1株系并具有λ轻链的抗体，和是可中和甲型流感病毒H5N1株系的IgG抗体(但不具有IgG1重链)的抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对流感病毒，并且特别是对人类H5m甲型流感病毒具有特异性的人 类抗体。
技术介绍
甲型流感病毒是在人类中引起严重疾病的病原体。可参考株系的血凝素(HA)和 神经氨酸酶(NA)表面蛋白的亚型对它们进行分类。目前有抗原性彼此不同的16种已知的 HA亚型(Hl至H16)和9种NA亚型(附至N9)。人类群体中目前流行的甲型流感病毒是 Hmi或H3N2株系。当出现能够进行人类-至-人类(水平)传播并且相对于目前流行的株系具有新 HA或NA亚型的甲型流感病毒株系时，即产生流感大流行。例如，人类群体目前在免疫学上 首次接触(immimoligically naive)H5W株系，H5W株系已在禽类群体中流行了若干年。 如果H5W株系变得适应于人类-至-人类传播，则它可引起流感感染的大范围爆发。目前应对H5m爆发的方法包括预防性免疫接种或使用神经氨酸酶抑制剂诸如奥 司他韦(达菲TM(TamifluTM))和扎那米韦(瑞乐#TM(RelenzaTM))。参考文献1报道，具有 人类恒定域(κ轻链和IgGl重链)和鼠可变域的嵌合单克隆抗体可中和H5W病毒株系， 并因而适合用于预防和治疗。参考文献2公开了针对禽流感株系A/Ck/HK/Yu22/02制备的 鼠单克隆抗体，并提议可将它们人源化。在H5亚型内，根据HA序列病毒落入不同的谱系(称为进化枝)。2004年和2005 年分别在越南和印度尼西亚分离的病毒指定为进化枝1和进化枝2(有时提及时使用罗 马数字I和II)的参考株系。参考文献1的抗体是针对A/Vietnam/1203/04和A/Hong Kong/213/03株系制备的，二者均在进化枝1中[3]。需要进一步的和改进的材料来预防和治疗H5m甲型流感病毒感染和疾病，包括 H5N1的各个进化枝。
技术实现思路
如下文更详细地说明的，本专利技术人提供了可中和甲型流感病毒H5m株系的血凝 素的人类单克隆抗体。专利技术人还提供了具有选自由FLA5. 10、FLD21. 140、FLA3. 14和FLD20. 19组成的组 中的抗体的一个或多个CDR的抗体。优选地，这些抗体可中和甲型流感病毒H5W株系的血凝素。专利技术人还提供了具有选自由FLD84、FLD93、FLD122, FLD127, FLD129, FLD132 和 FLD194组成的组中的抗体的一个或多个⑶R的抗体。优选地，这些抗体可中和甲型流感病毒H5m株系的血凝素。专利技术人还提供了与选自由FLA5. 10、FLD21. 140、FLA3. 14和FLD20. 19组成的组中 的抗体结合相同表位的抗体。优选地，这些抗体可中和甲型流感病毒H5m株系的血凝素。专利技术人还提供了与选自由FLD84、FLD93、FLD122, FLD127, FLD129, FLD132 和 FLD194组成的组中的抗体结合相同表位的抗体。优选地，这些抗体可中和甲型流感病毒 H5N1株系的血凝素。专利技术人还提供了与选自由FLA5. 10、FLD21. 140、FLA3. 14、FLD20. 19、FLD84、FLD93、 FLD122、FLD127、FLD129、FLD132和FLD194组成的组中的抗体竞争结合H5血凝素蛋白的抗 体。优选地，这些抗体可中和甲型流感病毒H5W株系的血凝素。专利技术人还提供了可中和H5亚型进化枝2中的甲型流感病毒株系的血凝素的抗体。专利技术人还提供了可中和甲型流感病毒H5W株系的血凝素的抗体，其中所述抗体 具有Iambda(A)轻链。专利技术人还提供了可中和甲型流感病毒H5m株系的血凝素的I gG抗体，条件是所述 抗体不具有IgGl重链。专利技术人还提供了本专利技术第一抗体和本专利技术第二抗体的组合，其中所述第一抗体和 第二抗体结合甲型流感病毒H5m株系的血凝素上的不同表位。因此所述抗体可能能够同 时结合单个血凝素蛋白分子。一个此类组合包含抗体FLD20. 19和FLD194。另一组合包含 (i)与FLD20. 19竞争结合H5血凝素蛋白的抗体，和(ii)与FLD194竞争结合H5血凝素蛋 白的抗体。另一组合包含(i)与FLD20. 19结合相同表位的抗体，和(ii)与FLD194结合相 同表位的抗体。这些不同抗体可以各种方式生产，并可用于预防和治疗病毒感染和疾病。它们还 可在诊断情况中使用。人类单克隆抗体在一些实施方案中，本专利技术提供可中和甲型流感病毒H5W株系的血凝素的人类 单克隆抗体。和非人类抗体不同，这些人类抗体在施用于人类时将不会引起针对它们的恒 定域的免疫应答。与嵌合抗体(诸如参考文献1中公开的那些)不同，这些人类抗体的可 变域是100%人类的(特别是除了互补性决定区[CDR]之外，可变域的构架区是100%人类 的)，并且因此不会在施用于人类时引起针对可变域构架区的免疫应答(任选地，任何抗独 特型应答除外)。人类抗体不包括不具有人类来源的任何序列。术语“单克隆”在最初涉及抗体使用时指由免疫细胞的单个克隆系产生的抗体，其 与“多克隆”抗体相反，多克隆抗体虽然全部识别相同靶蛋白，但是却由不同B细胞产生， 并且将针对所述蛋白上的不同表位。如本文所用，词语“单克隆”并不暗示任何特定的细胞 来源，而是指全部具有相同的氨基酸序列并识别相同靶蛋白中的相同表位的抗体的任何群 体。因此，单克隆抗体可使用任何合适的蛋白质合成系统包括免疫细胞、非免疫细胞、非细 胞系统等产生。这一用法在本领域中是常见的，例如以下产品的产品数据表均提到这些产 品为单克隆抗体表达于鼠骨髓瘤NSO细胞系的CDR移植的人源化抗体Synagis ，表达于 CHO细胞系的人源化抗体赫赛汀TM(HerceptinTM)，和表达于CHO细胞系的噬菌体展示抗体 Humira 。人类单克隆抗体可通过各种方法制备。例如，产生目标抗原的人类B细胞可通过例如用埃巴病毒(EBV)感染而被永生化。人类单克隆抗体还可在非人类宿主中产生，通 过将所述宿主自身的免疫系统替换为有功能的人类免疫系统，例如至kid小鼠或三合体 (Trimera)小鼠中。人类Ig基因座转基因的小鼠已成功用于产生人类单克隆抗体(包括针 对流感病毒M2蛋白的人类抗体[4])，例如Abgenix的“异种小鼠(xeno-mouse) ” [5]。噬 菌体展示也已成功W]，并得到了 Humira 产品。产生人类单克隆抗体的优选方法公开于 参考文献7&8。在此方法中，使用EBV在多克隆B细胞活化物的存在下转化靶抗原特异性的 人类B记忆淋巴细胞。在本专利技术的具体实施方案中，专利技术人制备了本文称作FLA5. 10、FLD21. 140、 FLA3. 14和FLD20. 19的人类单克隆抗体。在本专利技术的进一步具体的实施方案中，专利技术人制 备了本文称作 FLD84、FLD93、FLD122, FLD127, FLD129, FLD132 和 FLD194 的人类单克隆抗 体。这些抗体是使用参考文献7&8的技术制备的。抗体FLA5. 10特异性识别进化枝1中的H5W病毒。表位作图研究显示它识别HA 蛋白。它的重链可变域的氨基酸序列是SEQ ID NO :13(由SEQID NO 14编码)，并且它的轻 链(κ)可变域是SEQ ID NO :15(由SEQ ID而16编码)。因此它本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人类单克隆抗体，其可中和甲型流感病毒Ｈ５Ｎ１株系。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2007.03.13 US 60/894,6121.一种人类单克隆抗体，其可中和甲型流感病毒H5m株系。2.如权利要求1所述的抗体，其结合甲型流感病毒H5m株系的病毒体中存在的血凝素。3.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO 13的重链和包含SEQ ID NO 15 的轻链。4.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO 5的重链和包含SEQ ID NO 7的 轻链。5.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO :9的重链和包含SEQ ID NO 11 的轻链。6.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO 1的重链和包含SEQ ID NO 3的 轻链。7.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO :42的重链和包含SEQ ID NO 44 的轻链。8.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO :52的重链和包含SEQ ID NO 54 的轻链。9.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO :62的重链和包含SEQ ID NO 64 的轻链。10.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO :72的重链和包含SEQ ID NO 74 的轻链。11.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO :82的重链和包含SEQ ID NO 84 的轻链。12.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO :92的重链和包含SEQ ID NO 94 的轻链。13.如权利要求2所述的抗体，其具有包含SEQID NO :102的重链和包含SEQ ID NO 104的轻链。14.一种抗体，其具有选自由 FLA5. 10、FLD21. 140、FLA3. 14、FLD20. 19、FLD84、FLD93、 FLD122, FLD127, FLD129, FLD132 和 FLD194 组成的组中的抗体的一个或多个 CDR(SEQ ID NO :17-40、45-50、55-60、65-70、75-80、85-90、95-100、105-110)。15.一种抗体，其与选自由 FLA5. 10、FLD21. 140、FLA3. 14、FLD20....

【专利技术属性】
技术研发人员：A·兰扎韦基亚，
申请(专利权)人：胡马斯有限公司，
类型：发明
国别省市：US