单链FC多肽制造技术

本发明专利技术涉及包含一种或多种免疫球蛋白Ｆｃ结构域的单链多肽。本发明专利技术具体涉及在所述多肽链内形成至少一个功能性Ｆｃ结构域的单链Ｆｃ多肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含一种或多种免疫球蛋白Fc结构域的单链多肽。本 专利技术具体涉及在所述多肽链内形成至少一个功能性Fc结构域的单链 Fc多肽。
技术介绍
免疫球蛋白是二价的Y形分子，其包含两个相同的重链和两个相 同的轻链。二硫键将重链和轻链对及两个重链相连。每个链包括一个 序列变化并负责抗原结合的可变域，将重链和轻链中的所述可变域分 别称为VH和VL结构域。每个链还包括至少一个恒定域。轻链中有一个 的恒定域(CL)，而重链中有至少3个(CJ、 CJ和Ch3),有时有四 个(Ch4)(取决于同种型)恒定域。人有五种不同类型或同种型的抗 体，包括IgA (其包括IgAl和IgA2) 、 IgD、 IgE、 IgG(其包括IgGl、 IgG2、 IgG3和IgG4亚类)和IgM。抗体的Fc结构域通常包含每个链的至少两个重链恒定区结构域， 其二聚化形成Fc结构域。Fc结构域负责提供抗体效应功能，包括决 定抗体半衰期和在体内的分布、固定补体和结合于细胞表面Fc受体的 能力。Fc结构域的性质使其成为有用的治疗剂，并已将Fc结构域融 合于其它非抗体蛋白质，例如受体蛋白，例如依那西普。也可将Fc 结构域融合体用作研究试剂，"Fc标签"，其有利于融合蛋白的检测 和纯化。此外，已对许多包含Fc结构域的替代性抗体结构进行了描述 (Dumont " ". ， 2006， Biodrugs， 20 (3) 151-160、 W02005001025、 WO2005077981、 WO2005017148,及Haydene"/. ， 1994, Therapeutic Immunology, 1， 3-15) 。 WO2005077981描述了其中各个链包含两个 Fc结构域的抗体，即每个抗体链包含CH2 CH3 CH2 CH3的依次排列，且这些结构域二聚化形成两个功能性Fc结构域，以提供增强的效应功 能。W02005017148和Hayden等人在之前描述了包含融合于半个Fc结 构域的单链Fv的单链多肽，即sc-Fv-CH2 CH3。这些多肽可兼以单体 或二聚体形式存在。抗体的结合特异性使其成为有用的治疗剂，然而，二价分子(例 如抗体)通常并非某些细胞表面抗原的合适的耙向制剂。二价结合可 导致靶细胞经历共刺激、激活和/或抗原调整，从而为所述细胞提供了 逃避补体和由抗体Fc结构域募集的多种效应细胞的手段。作为代替， 为了靶向这类细胞表面抗原， 一般将抗体缀合于予细胞内化后将其杀 死的药物或毒素上。相反，由于不发生表面抗原的重新分布，及因此无共刺激作用和 内摄作用，所以一价抗体片段不引发抗原调整。因此可期望在这类片 段中保留抗体的所述天然效应功能，且由此绕开昂贵且耗时的结合于 药物或毒素的工序。通过对兔IgG的溶蛋白性切割产生所述抗体片段 的一个实例(Glennie and Stevenson, 1982， Nature, 295， 712-713)。 所述片段仅包含一个Fab结合位点，但保留了完整的Fc结构域。通过 对兔IgG抗体A12异型变体的木瓜蛋白酶消化产生所述片段，所述变 体的一条链被糖基化，使所述链具有木瓜蛋白酶消化抗性，从而使可 保留一个Fab臂。已证实，所产生片段可比全IgG更有效激活补体介 导的细胞溶解。已通过对人IgG进行蛋白水解消化(Michaelsen and Natvig, Scand. J. Immunology, 1973， 2， 299-312; Michaelsen and Natvig， Scand. J. Immunology, 1972， 1， 255-268 )及通过化学切 割(Wines and Easterbrook-Smith， Molecular Immunology, 1991， 28， 8， 855-863 )得到类似片段。因为进行蛋白水解需进行长时间准 备，且产率低，所得产物为混合物，所以所述片段不适用于商业化生 产。WO20050010125描述了包含两个多肽链的杂化蛋白，其中第一多 肽链包含Fc区和生物活性分子，而第二多肽链包含Fc区，但无所述 第一链的所述生物活性分子。独立制备两条链，并使其相互二聚化或7化学缀合。尽管如此可获得理想的功能分子，但所述制备过程复杂， 且包括低产率的层析程序。我们现已令人惊讶地发现制备作为单链多肽的功能性Fc结构域 是可能的。因此，本专利技术的多肽具有可大量通过重组方法制备，并可而且，由于抗体恒定域在链内形成Fc结构域，从而本专利技术的多肽不易 于二聚化，因此正如所期望的，可避免二价结合结构域。
技术实现思路
因此，本专利技术提供包含两个CH2结构域和两个CH3结构域的单链 多肽，其特征在于所述CH2和CH3结构域在链内形成功能性Fc结构域。 本专利技术的单链多肽中的功能性Fc结构域不是通过两条链的二聚化而 形成，即，两个CH2结构域和两个CH3结构域存在于单链中，并在单 链内形成功能性Fc结构域。因此，本专利技术提供包含两个CH2结构域和 两个CH3结构域的单链多肽，其特征在于所述CH2和CH3结构域在所 述链内形成功能性Fc结构域，而并非通过与另一多肽链二聚化形成。 因此，在本专利技术的单链多肽中，在多肽链内，第一CH2结构域与第二 CH2结构域二聚化，且第一 CH3结构域与第二 CH3结构域二聚化。本文所用术语"功能性，，是指在单链多肽内形成Fc结构域以提供 一种或多种通常与Fc结构域有关的效应功能的能力，尽管也可将其它 功能整合入所述结构域中。效应功能的实例包括决定全身Fc多肽的半 衰期和/或分布、Fc多肽固定补体的能力，及Fc多肽结合细胞表面Fc 受体的能力。所述效应功能的实例包括但不限于，抗体依赖性细胞毒 性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和补体依赖的细胞毒 性(CDC )。本专利技术的Fc结构域包含四个或更多的恒定域，其可能源自任何合 适的物种和/或抗体类型。优选人源恒定域。人有五种不同类型或同种 型的抗体，包括IgA (其包括IgAl和IgA2) 、 IgD、 IgE、 IgG(其包 括IgGl、 IgG2、 IgG3和IgG4亚型)和IgM。根据所需效应功能，可使用任何合适的Fc结构域。本文所称Fc结构域通常指IgA、 IgD和 IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域(CH2和CH3 )，及IgE和IgM 的最后三个恒定区结构域(CH2、 CH3和CH4)，尽管在某些情况下无 需所有所述结构域，例如在IgE或IgM的情况下仅CH2和CH3结构域 即足够。也可在单链Fc多肽内形成一个以上的Fc结构域，且所述Fc 结构域可源自相同或不同同种型。通常根据Kabat等人设计的系统对抗体结构域中的残基进行编 号。此系统在Kabat等人，1987 ， in Sequences of Proteins of Immunological Interest ， US Department of Health and Human Services, NIH， USA(以下"Kabat等人{参见上文}")中提出。除非 另有说明，在本说明书中使用所述编号系统。在一个实施方案中，Fc结构域源自IgA，且所述单链 两个Coc2结构域和两个Coc3结构域。在一个实本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含两个ＣＨ２结构域和两个ＣＨ３结构域的单链Ｆｃ多肽，其特征在于所述ＣＨ２和ＣＨ３结构域在所述多肽链内形成功能性Ｆｃ结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：ADG劳森，PE史蒂芬斯，
申请(专利权)人：UCB医药有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]