miR-449c-5p及其拟似物在制备治疗和预防心脏瓣膜疾病产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了miR-449c-5p及与之相关的双链RNA拟似物在制备治疗和预防心脏瓣膜疾病产品中的应用。本发明专利技术所提供的应用中，miR-449c-5p为序列1所示的单链RNA；双链RNA的一条链序列为序列1，另一条链序列为序列2；双链RNA的拟似物是对双链RNA中序列1所示的单链RNA进行下述修饰得到产物：对3′末端的一个核糖核苷酸进行胆固醇修饰；对5′末端的核糖核苷酸的磷酸骨架进行硫代磷酸修饰；对3′末端的核糖核苷酸的磷酸骨架进行硫代磷酸修饰；对所有核糖核苷酸进行甲氧基修饰。实验证明，本发明专利技术的miR-449c-5p、双链RNA及其拟似物可以用于主动脉瓣膜钙化的治疗及相关药物的制备。

Use of miR-449c-5p and its analogs in the preparation, treatment and prevention of heart valve disease products

The present invention discloses the use of miR-449c-5p and related double stranded RNA analogs in the preparation, treatment and prevention of heart valve disease products. The application provided by the invention, miR-449c-5p is a single chain RNA sequence shown in Figure 1; a chain sequence double stranded RNA sequence 1, another chain sequence is sequence 2; double stranded RNA analogue is the modification of single stranded RNA sequences in double stranded RNA 1 shows the product a: cholesterol modification of RNA 3 'end of the RNA of the phosphate backbone; the 5' end of the phosphorothioate; phosphate backbone ribonucleotide on 3 'end of the phosphorothioate; of methoxy modification of all rna. The experiments show that the miR-449c-5p, double stranded RNA and the analogs thereof can be used for the treatment of aortic valve calcification and the preparation of related drugs.

【技术实现步骤摘要】
miR-449c-5p及其拟似物在制备治疗和预防心脏瓣膜疾病产品中的应用
本专利技术涉及生物
中miR-449c-5p及与之相关的双链RNA拟似物在制备治疗和预防心脏瓣膜疾病产品中的应用。
技术介绍
心血管疾病严重威胁着人类健康，已经超越肿瘤成为人类健康的第一杀手。其中，心脏瓣膜病是仅次于高血压和冠心病的第三大心血管疾病。随着人口老龄化的加剧，主动脉瓣狭窄和(或)关闭不全患者比例逐年上升，是当今老年人最常见的心脏瓣膜病。主动脉瓣狭窄和(或)关闭不全往往是由年龄的增长、心脏瓣膜结缔组织发生退行性病变及纤维化引起的瓣膜增厚、变硬、变形及钙化导致的。主动脉瓣狭窄和(或)关闭导致心脏血流动力学的异常，继而损害心脏功能。但目前临床上除了瓣膜置换仍然没有有效的药物治疗方法。既往认为主动脉瓣膜钙化是钙磷等矿物质的被动沉积。近年来，大量研究表明主动脉瓣膜钙化是由细胞和信号通路介导的主动性过程，涉及慢性炎症反应、脂代谢异常、瓣膜间质细胞分化及重塑以及钙盐沉积，这一过程与骨形成相似。Mohle等从已发生钙化狭窄的主动脉瓣膜上分离出瓣膜间质细胞，发现该细胞表型在体外特定的诱导条件下可转化为成骨细胞样细胞特征，并能够形成钙化结节。相关活体动物实验也证实，促进表型可塑的瓣膜间质细胞向成骨细胞转分化是导致瓣膜异位钙化的前提基础。microRNA作为转录后的调控者参与了很多生理和病理性过程，包括细胞增殖、凋亡、分化，而microRNA的失调经常会导致细胞功能受损。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何治疗和/或预防心脏主动脉瓣膜钙化。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了下述a1)或a2)的应用：a1)双链RNA或所述双链RNA的拟似物在制备治疗和/或预防心脏瓣膜疾病产品中的应用；所述双链RNA的一条链序列为序列表中序列1，所述双链RNA的另一条链序列为序列表中序列2；a2)miR-449c-5p在制备治疗和/或预防心脏瓣膜疾病产品中的应用；miR-449c-5p为序列1所示的单链RNA；上述应用中，所述双链RNA的拟似物可为对所述双链RNA进行下述A1)、A2)、A3)和/或A4)修饰得到的双链RNA修饰物：A1)对3′末端的一个核糖核苷酸进行胆固醇修饰；A2)对5′末端的核糖核苷酸的磷酸骨架进行硫代磷酸修饰；A3)对3′末端的核糖核苷酸的磷酸骨架进行硫代磷酸修饰；A4)对所有核糖核苷酸进行甲氧基修饰。上述应用中，所述双链RNA的拟似物具体可为对所述双链RNA中序列1所示的单链RNA进行所述A1)、A2)、A3)和/或A4)修饰得到的双链RNA修饰物。上述应用中，A2)可为对5′末端的两个核糖核苷酸的每个磷酸骨架分别进行硫代磷酸修饰；A3)可为对3′末端的四个核糖核苷酸的每个磷酸骨架分别进行硫代磷酸修饰。上述应用中，所述双链RNA的拟似物可为miR-449c-5p拟似物agomir-449c-5p。所述miR-449c-5p拟似物agomir-449c-5p为上海吉玛制药技术有限公司，货号为B06002。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了下述b1)、b2)、c1)或c2)的用途：b1)所述双链RNA或所述双链RNA的拟似物在治疗和/或预防心脏瓣膜疾病中的应用；b2)miR-449c-5p在治疗和/或预防心脏瓣膜疾病中的应用；c1)与miR-449c-5p相关的生物材料在制备治疗和/或预防心脏瓣膜疾病产品中的应用，所述与miR-449c-5p相关的生物材料为下述B1)-B10)中的任一种：B1)编码miR-449c-5p或其前体的DNA分子或cDNA分子；B2)含有B1)所述DNA分子的表达盒；B3)含有B1)所述DNA分子的重组载体；B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；B5)含有B1)所述DNA分子的重组微生物；B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；B9)含有B1)所述DNA分子的转基因动物细胞系；B10)含有B2)所述表达盒的转基因动物细胞系；c2)与所述双链RNA相关的生物材料在制备治疗和/或预防心脏瓣膜疾病产品中的应用，所述与所述双链RNA相关的生物材料为下述C1)-C10)中的任一种：C1)编码所述双链RNA的DNA分子或cDNA分子；C2)含有C1)所述DNA分子的表达盒；C3)含有C1)所述DNA分子的重组载体；C4)含有C2)所述表达盒的重组载体；C5)含有C1)所述DNA分子的重组微生物；C6)含有C2)所述表达盒的重组微生物；C7)含有C3)所述重组载体的重组微生物；C8)含有C4)所述重组载体的重组微生物；C9)含有C1)所述DNA分子的转基因动物细胞系；C10)含有C2)所述表达盒的转基因动物细胞系。上述应用中，B2)所述的含有编码miR-449c-5p的DNA分子的表达盒(miR-449c-5p表达盒)是指能够在宿主细胞中表达miR-449c-5p的DNA，该DNA不但可包括启动miR-449c-5p或其前体转录的启动子，还可包括终止miR-449c-5p或其前体转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子。可用现有的表达载体构建含有所述miR-449c-5p表达盒的重组载体。上述应用中，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。上述应用中，B5)-B8)所述的微生物可为酵母、细菌、藻或真菌。上述应用中，B9)-B10)所述的转基因动物细胞系不包括繁殖材料。上述应用中，C2)所述的含有编码所述双链RNA的DNA分子的表达盒是指能够在宿主细胞中表达所述双链RNA的DNA，该DNA不但可包括启动所述双链RNA转录的启动子，还可包括终止所述双链RNA转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子。可用现有的表达载体构建含有所述双链RNA表达盒的重组载体。上述应用中，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。上述应用中，C5)-C8)所述的微生物可为酵母、细菌、藻或真菌。上述应用中，C9)-C10)所述的转基因动物细胞系不包括繁殖材料。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了所述与miR-449c-5p相关的生物材料或所述与所述双链RNA相关的生物材料在治疗和/或预防心脏瓣膜疾病中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了下述X1)或X2)：X1)治疗和/或预防心脏瓣膜疾病的药物，其活性成分为miR-449c-5p、所述与miR-449c-5p相关的生物材料、所述双链RNA或所述双链RNA的拟似物、或所述与所述双链RNA相关的生物材料；X2)用于治疗和/或预防所述心脏瓣膜疾病的物质Z，所述物质Z为miR-449c-5p、所述与miR-449c-5p相关的生物材料、所述双链RNA或所述双链RNA的拟似物、或所述与所述双链RNA相关的生物材料。本专利技术中，所述心脏瓣膜疾病为主动脉瓣狭窄和/或主动脉瓣关闭不全。本专利技术中，所述心脏瓣膜疾病可为主动脉瓣膜钙化，如主动脉瓣膜钙结节的生成。所述主动脉瓣膜钙化可体现在主动脉流出道血流速度增加和主动脉瓣跨瓣压差增加上。实验证明，本专利技术的miR-449c-5p及其拟似物可以抑制主动脉瓣膜钙结节的生成及主动脉瓣膜间质细胞的钙化：miR-449c-5pmimics、miR-449c-5pi本文档来自技高网...

【技术保护点】
a1)或a2)：a1)双链RNA或所述双链RNA的拟似物在制备治疗和/或预防心脏瓣膜疾病产品中的应用；所述双链RNA的一条链序列为序列表中序列1，所述双链RNA的另一条链序列为序列表中序列2；a2)miR‑449c‑5p在制备治疗和/或预防心脏瓣膜疾病产品中的应用；miR‑449c‑5p为序列1所示的单链RNA。

【技术特征摘要】
1.a1)或a2)：a1)双链RNA或所述双链RNA的拟似物在制备治疗和/或预防心脏瓣膜疾病产品中的应用；所述双链RNA的一条链序列为序列表中序列1，所述双链RNA的另一条链序列为序列表中序列2；a2)miR-449c-5p在制备治疗和/或预防心脏瓣膜疾病产品中的应用；miR-449c-5p为序列1所示的单链RNA。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述双链RNA的拟似物是对所述双链RNA进行下述A1)、A2)、A3)和/或A4)修饰得到的双链RNA修饰物：A1)对3′末端的一个核糖核苷酸进行胆固醇修饰；A2)对5′末端的核糖核苷酸的磷酸骨架进行硫代磷酸修饰；A3)对3′末端的核糖核苷酸的磷酸骨架进行硫代磷酸修饰；A4)对所有核糖核苷酸进行甲氧基修饰。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：A2)为对5′末端的两个核糖核苷酸的每个磷酸骨架分别进行硫代磷酸修饰；A3)为对3′末端的四个核糖核苷酸的每个磷酸骨架分别进行硫代磷酸修饰。4.权利要求1-3中任一所述双链RNA或所述双链RNA的拟似物在治疗和/或预防心脏瓣膜疾病中的应用。5.miR-449c-5p在治疗和/或预防心脏瓣膜疾病中的应用。6.c1)或c2)：c1)与miR-449c-5p相关的生物材料在制备治疗和/或预防心脏瓣膜疾病产品中的应用，所述与miR-449c-5p相关的生物材料为下述B1)-B10)中的任一种：B1)编码miR-449c-5p或其前体的DNA分子或cDNA分子；B2)含有B1)所述DNA分子的表达盒；B3)含有B1)所述DNA分子的重组载体；B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；B5)含有B1)所述DNA分子的重组微生物；B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；B9)含有B1)所述DNA分...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴建武，杨赟，肖志峰，赵燕南，陈冰，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11