本发明专利技术一般性地涉及针对ＳＡＲＳ－ＣｏＶ的人单克隆抗体、该抗体所结合的表位及其使用方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】背景本申请要求2008年1月17日提交的美国临时申请No.61/021,798的优先权，其 公开内容连同其中所引用的所有文件均以其全文援引加入本文。本专利技术一般性地涉及针对SARS-CoV的人单克隆抗体及其使用方法。在2002-2003年，一种新的冠状病毒引起了严重急性呼吸综合征(SARS-CoV) 的爆发，其感染了超过8000人，并且伴有 10%的致死率(4，21)。此外，在2003年 和2004年报道了几例SARS-CoV感染的实验室获得性病例，包括群体传播，这突出了对 治疗剂的需要(27，33)。老龄(> 60岁)明显与由于快速进行性呼吸损坏(急性呼吸窘 迫综合征)所致的增加的SARS相关性死亡相关(4，28，42)。SARS-CoV是一种动物传染(zoonotic)病毒，其最可能起源于中华菊头蝠 (Chinese horseshoe bat)，在活动物市场的狸猫(palm civet)和貉(Raccoon dog)中扩增，并 随后传播到人群中(17)。该2003-2004年的流行基于分子流行病学研究而被分为动物传 染期、早期、中期和晚期(6)。来自流行病所有不同阶段中人和动物分离物的SARS-CoV 基因组比较分析显示了病毒附着蛋白棘突(spike，S)糖蛋白的高速进化，在流行病的进 程中有23个氨基酸发生变化(39)。若干研究显示SARS-CoV棘突糖蛋白与受体血管紧张肽1转变酶2 (ACE-2)结 合，介导病毒进入(24，54)。已鉴定出ACE2中共18个氨基酸与SARS-CoV的受体结 合结构域(RBD)中的14个残基接触(23)。已显示这些氨基酸中的两个，479和487，在 RBD与人ACE2的结合中很关键并且与流行病期间进入人的跨物种传播有关。不令人惊 奇的是，棘突(S)糖蛋白还被鉴定为是保护性免疫的主要成分并且其是高免疫原性的， 含有至少三个被中和抗体靶向的结构域(11，14，22)。中和表位的确切数目是未知的， 在SARS-CoV流行病期间分离的不同S糖蛋白之间这些区域的序列变异对中和的影响也 是未知的。已经开发了针对三种晚期SARS-CoV病毒株(包括Urbani、Tor-2和 HKU-39849)的人和鼠单克隆抗体(mAb)并且描述了它们的体外中和活性(48-50)。最 近对从SARS患者分离大量单克隆抗体的方法的开发提供了在天然SARS-CoV感染后鉴 别同源和异源中和反应所需的试剂(49)。尽管使用假型化的慢病毒和重组SARS-CoV RBD蛋白的研究已显示了一些交叉中和或交叉反应活性(13，26，45，58，60)，但未 测试这些mAb针对来自流行病的中、早或动物传染期或疾病的致死模型中的实际异源 SARS-CoV病毒株的中和活性。这是潜在的问题，因为在过去两年人病例的缺乏表明将 来的流行病可能由动物传染性传播产生。因此，提供强交叉中和活性的抗体是中断动物 传播和遏制将来的流行病所必需的(3，38)。在小鼠、白鼬和仓鼠中使用选定的mAb进行的被动免疫研究已经证明一些中和 抗体可以成功地预防或限制感染(37，45，47，49)。尽管预防性治疗可以导致对啮齿动 物中SARS-CoV感染的完全保护，但是感染后治疗通常不强却显著降低肺中的病毒效价 (37)。迄今为止，所有先前的研究都在年轻动物中进行，这容许在不存在显著临床症状和疾病的条件下进行病毒复制(39，44)。因此，基于目前的技术，抗体将预防临床疾病 或针对同源或异源致死攻击提供可测量水平的保护并不仅仅是假设，尤其是在更易受攻 击的衰老群体中。对衰老群体中的被动保护也进行了不充分的研究，然而年老群体对严重和致命 的SARS-CoV感染是最易受攻击的(4，28，42)。在年老BALB/c小鼠模型中，来自小 鼠的超免疫SARS-CoV抗血清的被动传递预防了同源晚期Urbani病毒株的感染(53)。然 而，在年老群体中使用人mAb预防或治疗致死性异源SARS-CoV感染还未详细研究。此 外，最近报道的疫苗在年老群体中的失败使得被动免疫成为有吸引力的选择(8)。根据以上内容，如果再度出现高传染性并且通常为致死的严重急性呼吸综合征 (SARS)冠状病毒(SARS-CoV)感染，则迫切需要有效的预防和治疗。目前，SARS预 防主要依赖于改善的认识、监督和地方性、区域性以及国际性公共卫生护理措施的制定 (参见 Stadler 等人，Nat Rev Microbioll 209-18 (2003))。已开始在 SARS 疫苗研究领 域进行大量努力，并且最近报道已证明对来自预先感染SARS-CoV的小鼠、或者来自 用编码SARS S蛋白的DNA质粒或表达S蛋白的痘苗病毒接种的小鼠的免疫血清的传 递可以预防肺和上呼吸道中的病毒复制(参见Bisht等人，Proc.Natl Acad SciUSA 101 6641-46(2004) ； Subbarao 等人，J Virol 78: 3572-77(2004) ； Yang 等人，Nature 428 561-64(2004))。此外，在人的SARS-CoV感染中已观察到来自鼻咽抽吸物、血清、 尿和粪便的病毒效价降低与中和抗体的产生共同发生(参见Li等人，N Engl Med 349 508-09(2003) ； Peiris 等人，Lancet361 1767-72(2003))。已报道了用恢复期血浆进行 的 SARS 治疗(参见 Burnouf 等人，Hong Kong Med.J.9 309-10 (2003) ； Wong 等人， Hong KongMed.J.9 199-201 (2003))。这些研究支持了体液免疫在针对SARS-CoV的保护中的重要性并表明应开发特 异有效的人单克隆抗体(mAb)用来在人群中出现流行或甚至大范围地再度出现时提供针 对SARS的预防和早期治疗。理想地，从世界卫生观点来看，交叉中和多种病毒株的有 效人单克隆抗体将赋予最佳保护。专利技术概述本专利技术部分基于发现交叉中和不同SARS-CoV病毒株的抗体以及本专利技术抗体结 合的新表位。因此，在一个实施方案中，本专利技术包括交叉中和至少三种SARS-CoV病毒 株的单克隆抗体。在另一实施方案中，本专利技术包括结合本专利技术抗体的表位。本专利技术的示例性表位 包括但不限于包含来自SARS-CoV棘突蛋白的氨基酸的表位。在又一实施方案中，本专利技术包括免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含来 自SARS CoV棘突蛋白的氨基酸以及任选包含药学上可接受的载体。在又一实施方案中，本专利技术包括预防由冠状病毒引起的疾病或病患的方法。所 述方法包括向具有患所述疾病或病患风险的人施用治疗有效量的一种或多种本专利技术的单 克隆抗体。本专利技术的其他特征和优点将从下列的详细说明和权利要求中得知。附图简述附图说明图1通过系统进化分析和交叉竞争研究对由人mAb识别的SARS-COVS糖蛋白上的中和表位作图。(A)动物传染性和人流行病分离物的SARS-CoV S糖蛋白中氨基酸改 变的系统进化分析。SARS-CoV S糖蛋白的图示显示了受体结合结构域(RBD)、推定的 融合肽(FP)和七残基重复序列2 (HR2)中变体氨基酸的位置。(B)结合本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种单克隆抗体，其交叉中和至少三种ＳＡＲＳ－ＣｏＶ病毒株。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：A兰扎韦基亚，
申请(专利权)人：胡马斯有限公司，
类型：发明
国别省市：US
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