本发明专利技术涉及中和血管内皮生长因子受体的人单克隆抗体及其用途。具体而言，本发明专利技术涉及中和血管内皮生长因子受体的人ＳｃＦｖ分子、以及含有该人ＳｃＦｖ分子的抑制血管生成的组合物和治疗癌症的组合物。相对于商业可供的针对血管内皮生长因子受体的抗体，所公开的中和血管内皮生长因子受体的单克隆抗体在活体细胞中表现出优异的中和能力，并不仅在人而且在小鼠和大鼠中也表现出中和血管内皮生长因子受体的能力。因而，单克隆抗体可用于抗癌研究并在癌症治疗中高度有效。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及中和血管内皮生长因子受体的人单克隆抗体及其用途，尤其涉及中和 血管内皮生长因子受体的人ScFv分子、以及含有该人ScFv分子的抑制血管生成的组合物 和治疗癌症的组合物。
技术介绍
血管生成是指通过内皮细胞的生长、分化和移动由先存在的血管形成新血管，这 不发生在健康成人中，除非因为某些特殊的原因，包括伤口愈合，月经等。然而，已经报道了 在疾病(如肿瘤生长和转移、老年性黄斑退化、风湿性关节炎、糖尿病视网膜病变、银屑病 和慢性炎症)中过度形成新血管(Cameliet and Jain, Nature，407 249，2000)。因此，在 采用血管生成抑制剂治疗疾病尤其是肿瘤上进行了许多努力。参与血管生长的因子包括血管内皮生长因子(VEGF)、上皮生长因子(EGF)、血小 板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子-b(TGFb)、成纤维细胞生长因子(FGF)等。其中，血 管内皮生长因子是直接参与内皮细胞生长、分化和移动的内皮细胞特异性因子，存在四种 不同亚型(VEGF165、VEGF121、VEGF189和VEGF206)。四种亚型之中，VEGF165是除了胎盘 外所有人组织中最丰富的亚型(Tisher et al.，J. Biol. Chem.，266 =11947,1991) 血管内皮生长因子(VEGF)调控由内皮前体(成血管细胞)原位分化而引起的新 血管形成，VEGF在伤口愈合期间在胚胎组织(Breier et al.，Development (Camb), 114 521，1992)、巨噬细胞以及增生的上皮角蛋白细胞中表达(Brown et al.，J. Exp. Med.，176 1375，1992)，并且VEGF可能是形成炎症相关的组织水肿的原因(Ferrara et al. ,Endocr. Rev. , 13 :18，1992)。原位杂交研究已证实，包括多形性成胶质细胞瘤、成血管细胞瘤、中枢 神经系统肿瘤和AIDS相关的卡波希肉瘤在内的大量人肿瘤系中存在VEGF的高表达(Plate etal. , Nature,359 845,1992 ；Plate et al. , Cancer Res. ,53 :5822,1993 ；Berkman etal. , J. Clin. Invest. ,91 :153,1993 ；Nakamura et al.，AIDS Weekly，13(1)，1992)。在 缺氧诱导的血管生成中也观察到高水平的VEGF(Shweiki et al.，Nature, 359 :843，192)。VEGF的生物功能是通过高亲和力的VEGF受体介导的，所述VEGF受体在胚胎形 成(Millauer et al. , Cell, 72 =835,1993)和肿瘤形成期间在内皮细胞中进行选择性表 达。VEGF受体(VEGFR)通常是III级受体型酪氨酸激酶，其特征在于在受体的氨基末端 细胞外配体结合域具有几个(通常是5或7个)免疫球蛋白样环(Kaipainen et al., J. Exp. Med.，178 :2027，1993)。其他两个区域包括一个跨膜区和一个通过插入可变长度 的亲水性内激酶序列而阻断的羧基末端细胞内催化域，该羧基末端细胞内催化域称为激酶 插入域(Termanet al.，Oncogene, 6 :1677，1991)。VEGF 受体包括 fms-样酪氨酸激酶受 体(Flt-1),或 VEGFR-1(Shibuya et al. , Oncogene, 5 519,1990 ；W0 92/14248 ；Terman et al.，Oncogene，6 :1677，1991)，含激酶插入域的受体/胎儿肝激酶(KDR/Flk-1)， 或VEGFR-2 (Matthews et al.，PNAS, 88 9026,1991)，尽管其他受体如神经纤毛蛋白 (neuropilin)-l和神经纤毛蛋白_2也可结合VEGF。其他酪氨酸激酶受体VEGFR-3 (Flt_4)结合VEGF同系物VEGF-C和VEGF-D，且在淋巴管的生长中是很重要的。渗入神经胶质瘤的内皮细胞表达高水平的Flk-1 (Plate et al. , Nature, 359 845，1992)。由人成胶质细胞瘤产生的VEGF特异性地正调节Flk-1水平(Plate et al., Cancer Res.，53 :5822，1993)。与内皮细胞相关的成胶质细胞瘤(GAEC)中高水平的Flk-1表达表明了在肿瘤形 成期间可能诱导受体活性，因为在正常脑内皮细胞中几乎检测不到Flk-1转录物。这种正 调节限于最接近肿瘤的血管内皮细胞。在裸鼠中封闭VEGF活性和中和抗VEGF单克隆抗体 (mAbs)可抑制人肿瘤异种移植物的生长(Kim, K. et al.，Nature, 362 :841_844，1993)，这 表明了 VEGF在肿瘤相关的血管生成中的直接作用。尽管在肿瘤细胞中VEGF配体被正调节，并且其受体在肿瘤渗入血管内皮细胞中 被正调节，但在与血管生成无关的正常细胞中VEGF配体和其受体的表达水平是很低的。因 此，这种正常细胞会封闭VEGF和其受体之间的相互作用以抑制血管生成，从而抑制肿瘤生长。由渗入神经胶质瘤的内皮细胞表达高水平VEGFR-2，并由人成神经胶质瘤产生的 VEGF对其进行特异性正调节(Plate et al. , Nature, 359 :845，1992 ；Plate et al. , Cancer Res. ,53 =5822,1993)。在成神经胶质瘤相关的内皮细胞(GAEC)中VEGR-2的高水平表达表 明了在肿瘤形成期间诱导了受体活性，因为在正常脑内皮细胞中几乎检测不到VEGFR-2转 录物。因此，正积极地开展研究，关注于抑制在肿瘤生长位点表达的VEGF的活性，以抑 制血管生成，从而抑制肿瘤生长。通常地，已经发展了抑制癌细胞膜上的VEGF受体以阻止 VEGF进入细胞的方法。产生VEGFR抗体的细胞系实例包括产生大鼠抗小鼠VEGFR-2单克 隆抗体的杂交瘤细胞系(DC101 ；ATCC HB 11534)、产生小鼠抗小鼠VEGFR-2单克隆抗体mAb 25的杂交瘤细胞系(M25,18A1 ；ATCC HB 12152)、和产生小鼠抗小鼠VEGFR-2单克隆抗体 mAb 73 的杂交瘤细胞系。已持续研发了针对VEGF受体的人源化抗体。迄今为止，这些针对VEGF受体的人 源化抗体在体外表现出与VEGF的高度竞争性，但存在一个问题即它们中和细胞中VEGF受 体的能力下降了且抗体在小鼠或大鼠中未表现出交叉反应性，以致未能进行动物试验。因此，本专利技术人构建了非免疫完全人抗体文库，筛选了针对VEGF受体(KDR)的单 链可变区片段(ScFv)抗体，并发现了抗体不仅在体外，而且在细胞内和体内也显示出优异 的KDR中和效应，甚至在小鼠和大鼠中表现出交叉反应性，因此完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供完全的人单链可变区片段(single chain variablefragment, ScFv)抗体6A6_ScFv和6A6_IgG，其具有优异的在细本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种单链可变区片段分子，该单链可变区片段分子含有由ＳＥＱＩＤＮＯＳ：１－１９的任一氨基酸序列所表示的轻链可变区，并且具有中和血管内皮生长因子受体的功能。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：柳珍山，李元燮，沈相烈，朴美熙，姜贞恩，金渡伦，李俊哲，李东宪，赵头贤，薛衫淑，权英根，片宝贞，金贵和，尹採玉，金蓝珠，全在元，李东燮，朴英宇，罗根配，张贤淑，柳贤美，金圣祐，金世美，高尚锡，
申请(专利权)人：韩国生命工学研究院，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]
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