本发明专利技术公开了白细胞介素-27在制备抗流感病毒药物中的应用。本发明专利技术证实白细胞介素-27在体外对A型流感病毒具有良好的抑制流感病毒复制的作用。用蛋白抗体芯片技术筛选到流感病毒感染的病人血清和体外感染的PBMCs中，IL-27都是显著上调的，并且，A型流感病毒通过促炎因子COX-2激活PKA-CREB通路IL-27的表达，IL-27起到类似干扰素的作用来抑制病毒复制。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，更具体涉及白细胞介素-27在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。
技术介绍
流感病毒是引起流行性感冒的病原，甲型流感病毒呈球形，新分离的毒株则多呈丝状，其直径在80至120纳米之间，丝状流感病毒的长度可达400纳米。流感病毒结构自外而内可分为包膜、基质蛋白以及核心三部分。流感病毒分为甲、乙、丙三型，其中以甲型流感对人类威胁最大。人流感病毒主要是H1、H2和H3亚型，而目前危害严重的高致病性禽流感病毒多为H5、H7和H9亚型，即H5m、H7N7、H9N2等，其中以H5m亚型病死率高。本专利技术主要以甲型流感病毒为研究对象，对白介素-27的抗病毒复制作用进行了探讨。流感病毒属正粘病毒科，是单股负链RNA病毒，基因组约为13. 61Λ，具有包膜的8 个片段，共编码11种蛋白质的单链负RNA病毒。与其他RNA病毒不同的是，流感病毒所有 RNA(mRNA、cRNA, vRNA)的合成均在被感染细胞的核内完成。mRNA在核内合成后转移到胞浆，合成病毒的结构和非结构蛋白；而后开始装配流感病毒，完成后以出芽方式释放出子代病毒颗粒，进一步侵入新的宿主细胞。目前，流感仍属未能有效控制的急性上呼吸道传染病。由于流感病毒的抗原变异能力强，加之个体免疫力的不同，疫苗的保护率并不高，且疫苗只对已知的流感病毒亚型有预防作用，而对于由抗原性漂移或抗原性转换所产生的新型流感病毒无效。流感病毒感染将导致宿主细胞变性、坏死乃至脱落，造成粘膜充血、水肿和分泌物增加，从而产生鼻塞、流涕、咽喉疼痛、干咳以及其它上呼吸道感染症状，当病毒蔓延至下呼吸道，则可能引起毛细支气管炎和间质性肺炎。流感病毒不仅感染人类而且感染畜禽类，给人类和畜禽的健康造成极大的威胁。白细胞介素27 (Interleukin 27，IL-27)是最近发现的I型细胞因子IL-6/IL-12 家族的新成员。IL-27是一个异源二聚体蛋白，由P^和Epstein-Barr病毒诱导3蛋白组成。通过由TCCR/WSX-1组成的受体介导信号传导。IL-27具有促进炎症和抑制炎症的作用，在桥接先天免疫和适应性免疫中起到重要作用，并且调控INF-α、IFN-γ、IL-10、IL-17 和IL-21的表达。除此以外，IL-27还具有抑制HIV在⑶4+T细胞中复制，抑制HCV和HCV/ HIV共感染。IL-27通过与IL-27受体结合后，激活STATl，继而促进转录因子T_bet、IL-12Rβ 和IFN-γ等的表达。在IL-27高表达的病毒性肝炎和肿瘤模型中，可增强⑶8+Τ细胞 IFN-Y产生，增强细胞毒作用和对肿瘤的清除能力。在自身免疫性疾病动物模型中如关节炎，IL-27可促进炎性反应，而IL-27特异性抗体可改善动物模型中的炎性反应。然而，在一些寄生虫和细菌感染的IL-27受体缺失动物模型中，IL-27却主要表现为T细胞反应的拮抗因子。虽然内源性IL-27在感染过程中促进细胞免疫反应的证据有限，但是一些研究显示它能促进自身免疫性疾病动物模型和肿瘤动物模型的炎症反应。在IL-27高表达的病毒性肝炎和肿瘤模型中，可增强CD8+T细胞INF- γ产生，增强细胞毒作用和对肿瘤的清除能力。另外，有报道在严重的由佐剂诱导的关节炎大鼠模型和EAE小鼠模型可通过使用IL-27 特异性抗体从而改善其炎性反应，在后一模型中使用IL-27p^能显著增加INF-Y和TNF 的产生并放大炎症反应。虽然在最初的研究证实IL-27及其受体在促进Thl反应中扮演重要角色，但最近的研究表明它们同时也抑制不同的免疫细胞反应的过程，包括抑制免疫细胞的增殖和细胞因子的产生。IL-27及其受体的这种相互矛盾的作用，既可促进炎症反应又可抑制炎症反应，可能对调解控制机体的免疫平衡起到重要作用，进一步深入研究IL-27及其受体的生物学功能可更加完善地了解机体的免疫系统及免疫过程，从而为人们对控制和预防疾病将起到至关重要的作用。
技术实现思路
本专利技术研究白细胞介素-27在流感病毒复制中的作用，探讨流感病毒感染后诱导白介素-27表达上调的作用机制，从而揭示出白细胞介素-27在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。白细胞介素-27在细胞和分子水平上对流感病毒复制有抑制作用，预示IL-27可以做为临床抗病毒药物而进一步研究开发。通过流感病毒感染上调IL-27在A549细胞和人外周血细胞中的表达实验证实了流感病毒感染人外周血细胞能上调IL-27的表达，并以 A549细胞作为细胞模型来研究流感病毒诱导IL-27表达的分子机制；通过流感病毒感染通过CREB激活IL-27/EBI3启动子实验确定了转录调控因子CREB在A型流感病毒感染激活 EBI3启动子的过程中是必需的；通过PKA是A型流感病毒通过CREB激活IL-27/EBI3启动子的上游信号通路的实验，我们可以得出A型流感病毒感染通过PKA信号通路激活CREB，促进CREB结合到IL-27/EBI3启动子，激活IL-27表达，同时，Ca离子信号通路又在PKA-CREB 信号通路的上游；通过流感病毒通过C0X-2/PGE2-PKA通路诱导IL-27表达实验我们得出A 型流感病毒感染诱导炎症因子C0X-2的高表达和其催化产物PGE2的累积，PGE2累积则激活 PKA-CREB信号通路，最后促进IL-27/EBI3启动子的活化和IL-27的表达；通过IL-27可以通过激活PKR来抑制流感病毒的复制实验我们得出流感病毒感染上调IL-27的表达是机体应对病毒的入侵，自我防卫的免疫机制，IL-27能起到类似干扰素的作用，激活抗病毒信号激活因子STATl和STAT2，促进抗病毒因子PKR的磷酸化，最终抑制流感病毒的复制；通过 IL-27在流感病人血清中表达水平和血清PGE2的临床相关性实验验证了签名细胞水平上 IL-27表和PGE2的关系，进一步说明了流感病毒感染，PGE2表达和IL-27上调的相关性。总体实验揭示了尚未被发现的A型流感病毒感染诱导IL-27表达的机制。即A型流感病毒感染后，激活炎症因子C0X-2的表达，C0X-2催化机体产生大量的PGE2，PGE2促及PKA的磷酸化，磷酸化后的PKA具有激酶活性，激活转录因子CREB转核并结合到IL-27/ EBI3的启动子上，促进IL-27的表达。同时A型流感病毒感染也能激活Ca依赖的PKA-CREB 信号通路，后者也能促进IL-27的表达。机体应答流感病毒的感染产生的大量IL-27，IL-27 发挥类似与干扰素的作用，激活抗病毒信号通路和促进抗病毒因子的表达，最后抑制流感病毒的复制。临床上，IL-27在流感病毒感染者血清中的高表达以及和PGE2的相关性，反过来证明了这里实验在细胞水平的结果和临床一致。本专利技术揭示了尚未被发现的A型流感病毒感染诱导IL-27表达的机制。在流感病毒感染细胞后能促进IL-27表达的上调，抑制病毒的复制，这一新发现为研制流感病毒药物提供基础。本专利技术实验结果说明，白细胞介素-27是一种很有潜力的抗甲型流感病毒药物， 可以用于制备抗甲型流感病毒药物。本专利技术也公开了抗甲型流感病毒的药物，其中含有白细胞介素-27，其制备方法按制药工业现有技术制备。附图说明图IA型流感病毒可以上调IL-27在A549细胞和PBMCs中的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱应，吴建国，刘礼，曹中莹，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：
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