抗人巨细胞病毒（HCMV）的抗体制造技术

本发明专利技术提供了新型抗体序列，其与人巨细胞病毒（ｈＣＭＶ）结合并中和ｈＣＭＶ感染。该新型序列能够用于ｈＣＭＶ感染的医学处理，尤其是用于制备用于预防或治疗ｈＣＭＶ感染的药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及从对感染人细胞的病毒具有特异性生物活性的人B细胞分离的新型抗体序列。
技术介绍
人巨细胞病毒(hCMV)是ー种分布广泛、高度种类特异性的疱疹病毒，在免疫抑制或免疫不成熟的个体中造成很高的发病率和死亡率。最近的几篇文献综述分析了 hCMV的生物和临床表现(Landolfo S et al,2003 ；Gandhi M and Khanna R, 2004 ；Soderberg-NaucIer C, 2006a)。这种病韋病原体感染世界上大多数人口，儿童期时在接触了体液后获得，因为该病毒通过上消化道或呼吸系统的内皮细胞或上皮细胞进入，或通过生殖泌尿系统进入。hCMV的血清阳性在发展中国家或低收入区域中中更加普遍。在原发感染之后，hCMV可以以潜伏的状态在骨髓细胞系统的特异性宿主细胞中存在，在许多不同类型的细胞(造血细胞、上皮细胞、内皮细胞或成纤维细胞)中复制和传播，并且避开宿主的免疫系统。hCMV在健康人中通常是无症状的，因为hCMV感染和传播是被保持在免疫系统的控制之下的，但是很少达到全部hCMV的清除。实际上，hCMV病毒已经发展了使病毒的基因组以潜伏的状态保留在选择的位点的有效机制。任何削弱免疫功能的情況，如压カ状态或特殊的治疗，可以导致hCMV激活。hCMV临床表现(如视网膜炎、小肠结肠炎、肺炎、胃炎或肝炎)会在病毒的原发感染、再感染或激活之后发生。大约1 0%的婴儿在从其母亲经由胎盘、在分娩中或通过哺乳传播之后的6个月被感染。hCMV病毒由二十面的核壳体构成，其含有线形、230kb长的双链DNA基因组。hCMV基因组的表达是由复杂的级联转录事件控制，其引起超过200种与多种涉及病毒感染、潜伏和复制的生物活性相关的蛋白质的合成(Britt W and Mach M，1996)。结构蛋白形成非常复杂并且仍未完全确定的病毒体包膜。它包括与在其它疱疹中确定的结构蛋白同族的糖蛋白，其可以在病毒体中形成ニ硫键连接的蛋白质复合物:gCI (只包括gB)、gCII (包括gM和gN)和gCIII (包括gH、gL和g 9 )。gB, gH和gN还已被用于基因分型 hCMV 菌株(Coaquette A et al.，2004 ；Dar L，2007)。糖蛋白gN和gM是最丰富的，并且与gH和gB —起显示出是hCMV包膜和宿主细胞表面之间的最初的相互作用所必需的，因此对于产生感染性的hCMV是必需的。基于这个原因，以gB、gH、gN和/或gM为靶标的化合物可以通过在hCMV感染、再感染或激活之后阻止循环的hCMV进入细胞来有效地抑制hCMV的感染。因为可用的治疗选择很少，因此hCMV感染的治疗是比较困难的。目前可用的抑制病毒复制(Ganciclovir、Cidofivir、Foscarnet、Maribavir和其它的还在开发中的药物)的药物化合物产生了显著的临床进展，但是可能会出现到了口腔生物活性低、效カ低、出现hCMV抗性(由于病毒目标中的突变)和剂量限制性毒性的问题(DeClercq E，2003 ；Baldanti F and Gerna G,2003 ；Gilbert C and Boivin G,2005)。在移植安置(transplantation setting)和产前预防中需要预防和治疗hCMV感染的新方法，特别是对于免疫功能低下的个体。事实上，在HIV患者和器官移植接受者体内，hCMV是临床上重要的机会致病菌，其会造成不同于移植排斥的移植失败，导致发病和死亡(Puius Y and Snydman D，2007)。骨髓和实体器官移植接受者数量量的增加使hCMV临床表现的可能性提高，如hCMV视网膜炎(ffiegand T and Young L，2006)。此外，hCMV是出生缺陷(如听觉丧失 、发育延缓或智力迟钝)的主要感染原因，这些出生缺陷是由于通过hCMV感染的母亲传播的先天的或围产期的hCMV感染(Griffiths P and Walter S，2005)。因此，提供用于普遍的事先性、预防性的hCMV特异性治疗的药物是重要的，例如用于预防移植接受者中(Hebart H and Einsele H, 2004 ；KaKl A et al., 2005 ；Snydman D,2006)、患有hCMV相关的神经病的患者(Griffiths P，2004)中或高危妊娠(Schleiss M，2003)中的hCMV疾病从而预防垂直传播并危及胎儿和新生儿生命的hCMV感染。此外，抗hCMV的药物组合物可以用于治疗其它的传播更广泛的疾病(如心血管疾病和自身免疫疾病，或某些类型的癌症)，其中hCMV是潜在的辅助因子并且/或在免疫抑制治疗中可被激活。例如，目前hCMV是如肿瘤入侵和免疫逃避中的长期并发症的疾病的越来越重要的人类病原，因为hCMV感染对于细胞凋亡、分化和迁移具有肿瘤调节作用。在自体免疫或血管疾病中，hCMV感染可以改变免疫和炎症反应(Cinatl J et al.,2004 ；Soderberg-Naucler C,2006b)。一种预防hCMV感染的可替代的方法是在高危患者人群中提供保护的范围内接种疫苗。但是，还未完全了解接种疫苗和产生的免疫反应之间的关系，并且最佳的hCMV疫苗法(使用特异性的候选抗原或活的减毒疫苗)看起来取决于要被保护的患者人群。因此，预防接种法仍然在评价之中(McLean G et al.,2006 ；Schleiss M，2005)。由于目前hCMV感染的药理学策略的局限，对于宿主与hCMV的关系，尤其是hCMV特异性免疫反应的认识越来越多，使得基于免疫的疗法成为取代或补充现有的用于成功治疗hCMV相关并发症的疗法的良好选择(Gandhi M and Khanna R，2004)。最近，通过输入(transfer,移植)病毒特异性记忆B细胞，在免疫缺陷小鼠中获得了对于CMBV感染的致死过程的长期保护，这表示这样的细胞具有治疗效用(Klenovsek K et al.，2007)。对于基于细胞的疗法的一种更简单备选方法是被动免疫疗法，该疗法是将包含具有确定的抗人或病毒抗原(例如hCMV)的中和活性的治疗抗体的药物组合物给予个体。已经根据针对人类或病毒治疗目标的抗体和抗体片段的抗原结合和生物特性来设计该疗法(Dunman P and Nesin M, 2003 ；KellerM and Stiehm E,2000)。被动免疫疗法已经被引入到临床实践中，迅速増加了治疗各种疾病(包括感染性疾病、免疫调节疾病和癌症)的机率。在其免疫系统不能产生阻止和/或消灭目标分子所需的量和/或特异性抗体的患者中，该方法是尤其有效的(Chatenoud L, 2005 ；Laffly E and Sodoyer R, 2005)。在hCMV治疗的领域中，该方法是通过静脉给药人免疫球蛋白制剂来实施的，人免疫球蛋白制剂是通过收集具有高滴定量的抗hCMV抗体的人血清而获得的，并且被商业化以用于临床应用(名称为Cytotect或CytoGam)。但是对于抑制hCMV感染，这些产品只是部分满足要求的解决方案。事实上，在免疫功能低下的患者中使用这种疗法，主要是为了事本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含与ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．：８具有至少９０％同一性的序列的蛋白质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP 2006-12-15 PCT/EP2006/069780;EP 2007-6-20 071101.ー种抗体，由重链和轻链构成，其中，所述重链由SEQ ID N0.:15表示，所述轻链由SEQ ID N0.:17 表示。2.根据权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体是人重组抗体。3.根据权利要求1至2中任一项所述的抗体，其中，所述抗体结合并中和人巨细胞病毒(hCMV)。4.一种编码前述权利要求中任一项所述的抗体的核酸。5.根据权利要求4所述的核酸，其中，所述核酸的序列由SEQID N0.:14和SEQ IDN0.:16的序列组成。6.—种包含权利要求4或5所述的核酸的载体。7.ー种包含权利要求4或5所述的核酸的原核或真核宿主细胞。8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其中，所述细胞分泌权利要求1至3中任一项所述的抗体。9.权利要求4或5所述的核酸用于产生权利要求1至3中任一项所述的抗体的应用。10.权利要求7或8所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿达富纳罗，乔治格里包多，桑托兰多尔福，
申请(专利权)人：里博瓦克斯生物工艺有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]