Ⅱ型登革病毒KMB17细胞适应株及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种Ⅱ型登革病毒KMB17细胞适应株及其制备方法，能将流行的Ⅱ型登革病毒株在人胚肺二倍体细胞KMB17上适应，从而得到能稳定传代且病毒扩增量高的细胞适应株，经噬斑纯化获得毒力较强、纯度较高的纯化株，经鉴定，该病毒纯化株保持了原始毒株的基本生物学特性，且具有较好的抗原性。能够以人胚肺二倍体细胞KMB17为基质，进行Ⅱ型登革病毒扩增，打破了Ⅱ型登革病毒宿主细胞的局限性，为具有我国地域特色的预防登革病毒疫苗的研发开拓新的思路，为研发Ⅱ型登革病毒灭活和减毒活疫苗奠定基础，同时也具备大规模生产的可行性，此疫苗的研发将产生巨大的经济价值和社会效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种病毒株的制备方法，尤其是II型登革病毒在KMB17细胞上的适应株的分离、筛选、选育、纯化以及培养方法，属于病毒疫苗

技术介绍
登革病毒是以埃及伊蚊和白纹伊蚊等进行传播的虫媒病毒，广泛流行于世界100多个热带和亚热带国家及地区，能引起登革热、登革出血热及更为严重的登革出血休克征。依抗原性不同可将登革病毒分为I、II、III、IV四个血清型，其中II型传播最广泛。近年来， 由于全球气候变暖、人口流动频繁等因素，登革热在全世界的发病率提高了近30倍。在过去两年中全球登革热感染人群的数量持续增长，在东南亚中部和南部地区、美国以及南太平洋地区，每年约8000万人感染登革病毒，估计24000人死亡，超过100个国家的30亿人受到威胁。登革热是过去50年间世界上最为严重的传染病之一，已经成为严重的全球公共卫生问题。登革热不仅严重危害人民的健康，而且还为国家和个人带来严重的经济负担。由于还没有可供使用的登革热疫苗用于预防，登革热的防控形式日趋严峻，因此登革热疫苗相关的应用基础研究是一项迫在眉睫的任务。现有的灭活和减毒活疫苗，主要以Vero、PDK、PGMK和FrhL等非本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Ⅱ型登革病毒KMB17细胞适应株，其特征在于通过下列步骤获得：1）、按1ml病毒液/瓶的量，将浓度为4.0MOI的Ⅱ型登革病毒液接种到生长致密，透明度好的白纹伊蚊细胞C6/36上，于温度为28+2℃、CO2体积浓度为5%的环境中，恒温吸附1小时，于相同环境中，按1:9的体积比，补加下列病毒维持液：RPMI？1640培养基？+？2%体积比的小牛血清？+？2%体积比的质量浓度为6.6%的碳酸氢钠溶液，培养至第5天，于相同环境中，按2%的体积比补加质量浓度为6.6%的碳酸氢钠溶液，培养至第8～9天，当白纹伊蚊细胞C6/36病变CPE达++++时，收集细胞液，于4℃，3500×g离心分离5min，...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙强明，赵玉娇，潘玥，陈俊英，杨丽娟，岳耀斐，黄新伟，施海晶，丁晓洁，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：