人乳头瘤病毒18型单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了人乳头瘤病毒18型（HPV18）特异性的单克隆抗体。本发明专利技术提供的特异性单克隆抗体与其它型别HPV无明显交叉反应，用于检测具有高特异性、高敏感性的优点，可以准确检测疫苗种中HPV18型有生物活性疫苗的含量，在临床检测和疫苗生产过程中将会得到广泛应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子病毒学和免疫学领域，具体而言，本专利技术涉及人乳头瘤病毒18型杂交瘤细胞系及其产生的单克隆抗体以及编码它们的序列，和它们进行诊断、预防和治疗的应用。
技术介绍
人乳头瘤病毒（HPV）是无包膜的双链小DNA病毒，主要侵及人的上皮组织，进而诱发各种良、恶性增生病变。高危型HPV感染与多种恶性肿瘤的发生相关，低危型的HPV感染则引起肛门和生殖疣。HPV感染的流行范围广，所引发的相关致死性的恶性肿瘤和多种性传播疾病对人类健康具有严重的危害性，开发安全有效的预防或治疗性疫苗具有重大意义。HPV病毒颗粒直径为55～60nm，核衣壳呈20面体对称，由72个主要衣壳蛋白L1的五聚体及次要衣壳蛋白L2组成。大量研究证实，HPVL1蛋白是HPV疫苗的主要靶蛋白。在多种表达系统中表达的HPVL1蛋白无需L2蛋白辅助即可形成在形态结构与天然病毒颗粒相似的类病毒颗粒(Virus-L1keParticle，VLP)。重组HPVL1-VLP疫苗已经成功上市并用于预防HPV感染及由此导致的宫颈癌、尖锐湿疣等疾病，并充分证明了L1-VLP具有与野生同型病毒相同的抗原性和免疫原性，其结构与天然HPV高度相似，保留了天然病毒的绝大多数中和表位，可诱导高滴度的中和抗体。国家食品药品监督管理局（CFDA）在《预防用疫苗临床前研究技术指导原则》中指出：“在生产工艺的各个环节和步骤中的产品均应建立相应的监控标准，以便后续工艺的进行，保证产品的质量、工艺的稳定性”，同时要求“在半成品和成品阶段的质量控制至少包括鉴别试验”在HPV疫苗研发过程中，需要开展四个方面的测定，即型别鉴定实验、抗原含量检测和体外效力测定。其方法均可以采用双抗体夹心法ELISA。因此，在疫苗研究中，单克隆抗体是疫苗抗原质控的重要工具，尤其是具有特异性和中和活性的抗体在疫苗研发中具有不可替代的作用。目前国外已上市的人乳头瘤病毒疫苗主要有三种，分别是：2006年首次上市的由16、18、6和11型人乳头瘤病毒L1重组蛋白构成的四价疫苗（Gardasil），2007年首次上市的由16和18型乳头瘤病毒L1重组蛋白构成的二价疫苗（Cervarix），以及2014年12月首次上市的由6、11、16、18、31、33、45、52和58型人乳头瘤病毒L1重组蛋白构成的九价疫苗（Gardasil9）。本专利技术提供了最多可针对九价范围内HPV18的特异性和中和活性的单克隆抗体，利用其中的两株制备的ELISA检测试剂盒，可以特异性地用于快速鉴别并定量HPV18L1蛋白，可以广泛应用于临床检测和目前疫苗厂家生产疫苗过程中的质检，对女性的健康发展和公共卫生防控将具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供能够识别HPV18的单克隆抗体以及产生该抗体的杂交瘤细胞系。本专利技术的第二个目的是提供一种用于检测HPV18的双抗体夹心ELISA试剂盒。本专利技术的第三个目的在于提供单克隆抗体的制备方法。本专利技术的第四个目的在于提供HPV的抗原检测试剂盒的制备方法。本专利技术实验目的是通过如下技术方案实现：本专利技术提供的单克隆抗体，其是以HPV18L1五聚体蛋白作为免疫原，制备获得。具体地说是HPV18L1五聚体蛋白作为免疫原免疫小鼠，采用杂交瘤技术经过细胞融合并筛选得到能持续、稳定分泌抗HPV18L1的杂交瘤细胞株，由各细胞株分泌得到单克隆抗体。在一个优选的实施方案中识别人乳头瘤病毒18型L1蛋白的单克隆抗体，由杂交瘤细胞株1B1产生，其保藏编号：CGMCCNo.11294；分类命名：杂交瘤细胞；保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年10月30日。本专利技术公开的单克隆抗体1B1，包含至少1个抗体重链可变区和至少1个抗体轻链可变区，并且其中所述抗体轻链可变区具有CDR序列CDRL1、CDRL2或/和CDRL3，其中:CDRL1包括SEQIDNO：1;CDRL2包括SEQIDNO：2;CDRL3包括SEQIDNO：3。抗体重链可变区具有选自CDRH1、CDRH2或/和CDRH3，其中：CDRH1包括SEQIDNO：4；CDRH2包括SEQIDNO：5；CDRH3包括SEQIDNO：6。在一个优选的实施方案中人乳头瘤病毒18型L1蛋白的单克隆抗体或抗原结合片段，包含至少1个抗体轻链可变区包括SEQIDNO：7和至少1个抗体重链可变区包括SEQIDNO：8。在一个优选的实施方案中本专利技术提供一种分离的核酸，该核酸编码本专利技术抗体的至少一个轻链可变区SEQIDNO：7和重链可变区SEQIDNO：8。在一个优选的实施方案中本专利技术提供一种核酸的表达载体，该载体转染宿主细胞时所述核酸与宿主细胞识别的控制序列有效连接。在一个优选的实施方案中本专利技术提供一种表达载体的宿主细胞。在一个优选的实施方案中本专利技术提供另一种人乳头瘤病毒18型L1蛋白的单克隆抗体，其特征在于该单克隆抗体由杂交瘤细胞株4C2产生，其保藏编号：CGMCCNo.11297；分类命名：杂交瘤细胞；保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年10月30日。由杂交瘤细胞株4C2产生的单克隆抗体，包含至少1个抗体重链可变区和至少1个抗体轻链可变区，并且其中所述抗体轻链可变区具有CDR序列CDRL1、CDRL2或/和CDRL3，其中:CDRL1包括SEQIDNO：9;CDRL2包括SEQIDNO：10;CDRL3包括SEQIDNO：11。由杂交瘤细胞株4C2产生的单克隆抗体的重链可变区具有选自CDRH1、CDRH2或/和CDRH3，其中：CDRH1包括SEQIDNO：12；CDRH2包括SEQIDNO：13；CDRH3包括SEQIDNO：14。在一个优选的实施方案中本专利技术提供一种识别人乳头瘤病毒18型L1蛋白的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于其中包含至少1个抗体轻链可变区包括SEQIDNO：15和至少1个抗体重链可变区包括SEQIDNO：16。在一个优选的实施方案中本专利技术提供一种分离的核酸，其编码本专利技术抗体的至少一个轻链可变区SEQIDNO：15和重链可变区SEQIDNO：16。在一个优选的实施方案中本专利技术提供一种核酸的表达载体，其载体转染宿主细胞时所述核酸与宿主细胞识别的控制序列有效连接。在一个优选的实施方案中本专利技术提供一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种识别人乳头瘤病毒18型L1蛋白的单克隆抗体，其特征在于该单克隆抗体由杂交瘤细胞株1B1产生，其CGMCC保藏号为11294。

【技术特征摘要】
2014.11.12 CN 20141063538821.一种识别人乳头瘤病毒18型L1蛋白的单克隆抗体，其特征在于该单克隆抗体由杂交
瘤细胞株1B1产生，其CGMCC保藏号为11294。
2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于所述抗体包含至少1个抗体重链可变区
和至少1个抗体轻链可变区，并且其中所述抗体轻链可变区具有CDR序列CDRL1、CDRL2或/和
CDRL3，其中:
CDRL1包括SEQIDNO：1;
CDRL2包括SEQIDNO：2;
CDRL3包括SEQIDNO：3。
3.如权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于其中所述抗体重链可变区具有选自
CDRH1、CDRH2或/和CDRH3，其中：
CDRH1包括SEQIDNO：4；
CDRH2包括SEQIDNO：5；
CDRH3包括SEQIDNO：6。
4.一种识别人乳头瘤病毒18型L1蛋白的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于其中
包含至少1个抗体轻链可变区包括SEQIDNO：7和至少1个抗体重链可变区包括SEQIDNO：
8。
5.一种分离的核酸，其特征在于所述核酸编码本发明抗体的至少一个轻链可变区SEQ
IDNO：7和重链可变区SEQIDNO：8。
6.一种包括权利要求5所述核酸的表达载体，其特征在于载体转染宿主细胞时所述核
酸与宿主细胞识别的控制序列有效连接。
7.一种包括权利要求6表达载体的宿主细胞。
8.一种识别人乳头瘤病毒18型L1蛋白的单克隆抗体，其特征在于该单克隆抗体由杂交
瘤细胞株4C2产生，其CGMCC保藏号为11297。
9.如权利要求8所述的单克隆抗体，其特征在于所述抗体包含至少1个抗体重链可变区
和至少1个抗体轻链可变区，并且其中所述抗体轻链可变区具有CDR序列C...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海江，潘勇昭，陈健平，陈丹，张尧，任冬妍，刘玉莹，刘永江，夏丽，
申请(专利权)人：北京康乐卫士生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11