本发明专利技术公开了人乳头瘤病毒的表位肽及其应用。具体地，本发明专利技术涉及一种人乳头瘤病毒(HPV)16型E6和E7蛋白的抗原表位最小基序肽及其用途。本发明专利技术提供了十五个可用于制备识别HPV16 E6和E7蛋白单或多克隆抗体，特别是可单独或组合制备专门用于检测HPV16病毒感染后所生成抗体的化学合成肽和/或重组多表位肽抗原。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程和免疫学
，具体地，涉及与妇女宫颈癌发生最密切相关的人乳头瘤病毒(HPV)16型E6和E7致癌蛋白能诱发抗体的全部精细线性B细胞表位肽及其应用。
技术介绍
众所周知，一靶蛋白上能诱发抗体生成的B细胞表位(Bcellepitope,BCE)肽，能用作研制抗体有效的预防性/治疗性合成肽疫苗的候选表位肽，或用来制备科学研究和临床诊断用的单克隆或多克隆抗体(单抗或多抗)。因此，通常使用成熟的常规化学合成肽法、噬菌体展示文库法、不同长短肽芯片法以及借助计算机软件预测鉴定已知氨基酸序列靶蛋白上的BCE肽。但是，由于表位扫描作图方法的限制，以往获得可用于合成肽疫苗和临床诊断肽抗原或抗体Kit研制的肽段经常都是大于8个残基的肽段，即它们实际上都是非抗体识别的最小序列肽，都是含一特异表位基序的一段抗原性肽，因而不能真正称为BCE肽。这样的抗原性肽在实际应用上的缺陷是显而易见的，也就是，肽越长，其中的N个表位数越多。因而作为合成肽疫苗的候选表位肽，其游离母蛋白抗原后单独诱发特定功能性/保护性抗体的效果，显然存在不确定性或效果不能达到最佳(因为在研究疫苗的这一抗原性肽内的N个表位中，哪一个潜在的表位是诱发抗体的优势表位就无法知晓或确定)。其作为诊断肽抗原往往也存在缺乏特异性的问题，尤其在自身免疫疾病和病毒自然感染诱发抗体滴度不高的情况下，由于检测血清样本稀释度通常不可能高(常见1:10-1:100)，加上人体内原本就存在成千上万种抗不明抗原的抗体这一因素，因而易出现一些或较高的假阳性检测结果就能理解了。特别需要指出的是，许多病毒感染或自身免疫疾病抗体检测不容许假阳性结果，因为那会因此对检测的正常对象带来不必要的药物治疗伤害和无谓甚至高昂的经济负担。另外，这样的检测也会导致许多临床基础研究结果的不确定性。人类乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是一组环状DNA病毒的总称。目前发现HPV型别已超过150多种，其中超过40种型别可感染女性生殖道上皮，而与宫颈癌以及宫颈上皮内高度病变发生密切相关的高危型HPV涉及HPV16、18、26、31、33、35、39、45、52、53、56、58、66、67、69、73、82和97等20多种型别，其中，HPV16流行率在世界各国排第一。现已清楚高危型HPV导致的子宫颈癌在妇女肿瘤发生中位居第三位。作为针对严重威胁妇女生殖健康的HPV病毒的预防和治疗措施，准确诊断不同高危型HPV感染是关键的第一步。目前的诊断方法可主要分为三大类，即细胞学诊断、HPVDNA鉴定和HPV血清学检测。其中前两者已在临床中普遍应用，后者经济简便但目前仍然始终处于研究中。究其原因，就是相对其他病毒HPV免疫原性弱(感染后抗体应答水平低)，而目前普遍采用的E6、E7和L1诊断抗原或它们的抗原性肽又缺乏真正的特异性，乃至检测准确率不高。鉴于以上所说技术发展背景，有必要建立新型高特异性高灵敏度的HPV诊断用重组多表位肽检测抗原。
技术实现思路
本专利技术提供了一种人乳头瘤病毒的表位肽及其应用。本专利技术第一方面，提供了一种分离的短肽，所述短肽的结构如式I所示：X1-X-X2式I，并满足以下特征：(a)式I中X为4-8个氨基酸的核心片段；较佳地为4、5、6、7、或8个氨基酸；(b)式I中X1、X2为无、1、2或3个氨基酸，且X1和X2氨基酸个数总和≤4，较佳地，≤3、2、1，更佳地为0；(c)所述的核心片段的序列选自SEQIDNO.:1-15中的一个或多个，较佳地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15个；和(d)所述的短肽具有与抗HPV16型E6-E7蛋白抗体结合的活性；其中，“-”表示肽键或肽接头。在另一优选例中，所述分离的短肽来自人乳头瘤病毒(HPV)16型E6-7蛋白的。在另一优选例中，所述X1或X2分别对应于所述核心片段X在人乳头瘤病毒(HPV)16型E6-7蛋白中侧翼氨基酸序列。在另一优选例中，所述的短肽的长度≤10个氨基酸，较佳地≤9个氨基酸，更佳地≤8个氨基酸。在另一优选例中，所述的短肽选自如SEQIDNO.:1-15所示的短肽。在另一优选例中，所述满足式I的短肽还如表2所示。表2本专利技术第二方面，提供了一种具有本专利技术第一方面所述核心片段的分离的衍生多肽，其特征在于，所述多肽是经本专利技术第一方面所述的短肽的X1或X2分别经过1-3个氨基酸的添加、1-2个缺失并仍含有所述核心片段X，且具有与抗人HPV16型E6-7C抗体结合活性的多肽。在另一优选例中，所述X1或X2分别是任意的序列、且不是所述核心片段X在人乳头瘤病毒(HPV)16型E6-E7蛋白中侧翼氨基酸序列。本专利技术第三方面，提供了一种分离的肽集合，所述的肽集合由选自下组的肽或多肽构成：至少两种选自本专利技术第一方面所述的短肽或其衍生多肽。在另一优选例中，所述的肽集合中至少含有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15种选自本专利技术第一方面所述的短肽或其衍生多肽，优选地，所述肽集合至少含有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15种选自SEQIDNO.:1-15的短肽或其衍生多肽。在另一优选例中，所述的肽集合还包括除SEQIDNO.:1-15以外的分离的HPV表位肽，优选地，为HPV16型E6-7蛋白表位肽。在另一优选例中，其特征在于，所述的肽集合中至少含有SEQIDNO.:5和/或SEQIDNO.:14所示的短肽。本专利技术第四方面，提供了一种表达载体，所述的表达载体表达本专利技术第一方面所述的短肽或其衍生多肽、或本专利技术第三方面所述的肽集合。本专利技术第五方面，还提供了一种融合载体蛋白，所述的融合载体蛋白具有以下结构：式I短肽-载体蛋白；或载体蛋白-式I多肽。其中，式I短肽满足一下特征并满足以下特征：(a)式I中X为4-8个氨基酸的核心片段；较佳地为4、5、6、7、或8个氨基酸；(b)式I中X1、X2为无、1、2或3个氨基酸，且X1和X2氨基酸个数总和≤4，较佳地，≤3、2、1，更佳地为0；(c)所述的核心片段的序列选自SEQIDNO.:1-15中的一个或多个，较佳地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15个；和(d)所述的短肽具有与抗HPV16型E6-E7蛋白抗体结合的活性；其中，“-”表示肽键或肽接头。在另一优选例中，所述的载体蛋白包括GST。在另一优选例中，所述的载体蛋白包括截短GST188(由188个氨基酸残基组成)。本专利技术第六方面，提供了本专利技术第一方面所述短肽或其衍生多肽、本专利技术第三方面所述的肽集合、或本专利技术第五方面所述的融合载体蛋白的用途，其特征在于，用于制备诊断或检测人乳头瘤病毒(HPV)的试剂和试剂盒。在另一优选例中，所述的人乳头瘤病毒为HPV16型。本专利技术第七方面，提供了一种试剂盒，所述的试剂盒含有特异性检测本专利技术第一方面所述短肽或其衍生多肽、本专利技术第三方面所述肽集合或本专利技术第五方面所述的融合蛋白的检测试剂，和说明书。在另一优选例中，所述的说明书中记载：该试剂盒中的检测试剂用于诊断或检测人乳头瘤病毒(HPV)。在另一优选例中本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的短肽，所述短肽的结构如式I所示：X1‑X‑X2式I，并满足以下特征：(a)式I中X为4‑8个氨基酸的核心片段；较佳地为4、5、6、7、或8个氨基酸；(b)式I中X1、X2为无、1、2或3个氨基酸，且X1和X2氨基酸个数总和≤4，较佳地，≤3、2、1，更佳地为0；(c)所述的核心片段的序列选自SEQ ID NO.:1‑15中的一个或多个，较佳地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15个；和(d)所述的短肽具有与抗HPV16型E6‑E7蛋白抗体结合的活性；其中，“‑”表示肽键或肽接头。
【技术特征摘要】
1.一种分离的短肽，所述短肽的结构如式I所示：X1-X-X2式I，并满足以下特征：(a)式I中X为4-8个氨基酸的核心片段；较佳地为4、5、6、7、或8个氨基酸；(b)式I中X1、X2为无、1、2或3个氨基酸，且X1和X2氨基酸个数总和≤4，较佳地，≤3、2、1，更佳地为0；(c)所述的核心片段的序列选自SEQIDNO.:1-15中的一个或多个，较佳地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15个；和(d)所述的短肽具有与抗HPV16型E6-E7蛋白抗体结合的活性；其中，“-”表示肽键或肽接头。2.如权利要求1所述的短肽，其特征在于，所述的短肽选自如SEQIDNO.:1-15所示的短肽。3.一种分离的肽集合，其特征在于，所述的肽集合由选自下组的肽或多肽构成：至少两种选自权利要求1所述的短肽或其衍生多肽。4.如权利要求3所述的肽集合，其特征在于，所述的肽集合中至少含有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15种选自权利要求1所述的短肽或其衍生多肽，优选地，所述肽集合至少含有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15种选自SEQIDNO.:1-15的短肽或其衍生多肽。5.如权利要求3所述的肽集合，其特征在于，所述的肽集合还包括除SEQI...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐万祥，唐海平，刘日廷，张富春，连文博，詹建民，李轶杰，张爱莲，王健，
申请(专利权)人：广州恒上医药技术有限公司，刘日廷，
类型：发明
国别省市：广东;44
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