一种新城疫病毒核酸RT-PCR检测的方法技术

本发明专利技术涉及一种病毒检测方法，更具体的讲是一种新城疫病毒核酸RT-PCR检测的方法，其包括病毒增殖、设计引物、提取核酸、产物鉴定、序列鉴定，本发明专利技术的有益效果是：本方法采用先接种鸡胚增殖病毒，而后进行PCR检测，通过将F-F引物中添加R简并引物，使得在进行检测的同时对弱病毒和强病毒进行检测，检测准确，并减少了分别对弱病毒和强病毒检测的时间，解决了传统方法中容易漏检的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种病毒检测方法，更具体的讲是一种新城疫病毒核酸RT-PCR检测的方法。
技术介绍
新城疫((Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV )引起禽的一种急性、烈性传染性疾病，给养禽业和珍禽业带来极大的经济损失。另外从多种野禽如麻雀、鸽、乌鸦等中也已分离出NDV。融合蛋白F是NDV感染细胞所必需的。病毒囊膜与靶细胞融合，使病毒进入细胞内进行复制，融合的过程就是靠F蛋白来实现。大量的研究表明，NDV的F蛋白F1/F2多肽裂解位点氨基酸的基序和NDV的毒力密切相关，其致病机理已通过反向遗传操作技术得以证实。F蛋白通常以无活性的H)前体形式存在，但 H)必须裂解成以二硫键连接的Fl和F2亚单位后，才使病毒具有感染性。F蛋白能否被裂解取决于病毒毒力的强弱和宿主细胞的特性。FO的裂解是病毒与细胞融合所必需的，也是病毒感染所必需的。强毒株的氨基酸基序为112R/K-R-Q-K/R-R_F117，弱毒株的基序为112G/E-K/R-Q-G/E-R-L117,两种情况都是在117位前裂解。对病毒的检测可以取内脏组本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新城疫病毒核酸RT?PCR检测的方法，包括以下步骤：（1）病毒增殖：取需要检测的动物粪便，将质量比为1：3的动物粪便与生理盐水加入离心管中充分震荡形成混悬液，按每毫升混悬液加入青霉素和链霉素各1000单位，反应4?6h后进行8000?g离心，取无菌上清液，将上清液经尿囊腔接种9?11日龄鸡胚，弃去24h内死亡鸡胚，收取24h～96h的鸡胚尿囊液，?20℃备用；（2）设计引物：参照GenBank中新城疫病毒的F基因序列，设计一对引物F?F和F?R，用于扩增F基因，序列为：F?F：5“?TCTGGAGGAAGGAGACARRRR?3“；F?R：5“?GATCAGGCCGCTACCAATTAA?...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：袁小远，王友令，张玉霞，徐绍建，
申请(专利权)人：山东省农业科学院家禽研究所，
类型：发明
国别省市：