一种人乳头瘤病毒荧光核酸扩增检测方法技术

本发明专利技术公开了一种人乳头瘤病毒荧光核酸扩增检测方法，首先用宫颈刷采集宫颈脱落细胞，将采集完毕的宫颈刷浸泡于3-5ml宫颈细胞保存液中，保存液可以使生理盐水，也可以是pH7.4的磷酸盐缓冲液；然后将宫颈刷在细胞保存液中充分洗涤，后丢弃，然后将细胞保存液与10000g，左右离心10分钟。去除上清，加500ul细胞裂解液(10mM?Tris-Hcl?pH9.0、50mM?Kcl)，震荡混匀，100℃孵育5分钟后，自然冷却至室温后，10000g，离心3分钟，每个25ul的荧光PCR反应取1-5ul上清。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用寡核苷酸探针的溶解曲线，和特定的荧光标记实现HPV亚型的分型检测方法，特别涉及。
技术介绍
宫颈癌是妇女高发的恶性肿瘤之一。几乎所有的宫颈癌标本中可检出HPV DNA, HPV阴性者几乎无罹子宫颈癌之忧，因此，HPV被确认为子宫颈癌发生的必要条件。人乳头状瘤病毒(HPV)型别有80多种，按其感染部位分为皮肤型和生殖道型HPV。大约有35种型别与生殖道感染有关，约20种与肿瘤相关。依据与癌发生关系,分为低危型HPV(如6、11、42,43和44型等可引起外生殖器湿疣、宫颈上皮内低度病变等)和高危型HPV(如HPV16、 18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型与子宫颈癌及宫颈上皮内高度病变的发生相关)。而HPV16和18型感染率最高，即HPV16占所有型别的50%，其病理类型主要为子宫颈癌鳞状上皮细胞癌；HPV18占14%，在子宫颈腺上皮细胞癌占主要地位；HPV45占8% ; HPV31占5% ;其他型别占23%。所以针对HPV分型的检测对于宫颈癌的预防十分有必要。 由于目前尚无有效的技术手段能够在体外培养HPV，所以目前为止没有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人乳头瘤病毒荧光核酸扩增检测方法，其特征在于是通过以下的技术方案实现的：第一步：用宫颈刷采集宫颈脱落细胞，将采集完毕的宫颈刷浸泡于3?5ml宫颈细胞保存液中；第二步：将宫颈刷在细胞保存液中充分洗涤，后丢弃，然后将细胞保存液与10000g，左右离心，去除上清，加500ul细胞裂解液(10mMTris?Hcl?PH9.0、50mM?KCL)，震荡混匀，100℃孵育5分钟后，自然冷却至室温后，10000g，离心3分钟，每个25ul的荧光PCR反应取1?5ul上清。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：潘振华，孙朝辉，
申请(专利权)人：潘振华，
类型：发明
国别省市：