病原微生物核酸无扩增检测与分型方法技术

本发明专利技术公开了一种病原微生物核酸无扩增检测和分型方法以及相关的试剂盒，本发明专利技术以多探针并结合荧光量子点层层组装技术，实现病原微生物核酸无扩增检测和分型。本发明专利技术的方法对于低浓度核酸无需扩增，可以直接检测；多探针保证了信号放大过程中容易出现的假阳性问题，提高了检测准确性，该技术可以实现病原微生物拷贝数的实时检测与同步基因分型，速度快，成本低廉。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药生物领域，尤其涉及一种病原微生物核酸无扩增直接检测与分型方法及试剂盒。
技术介绍
感染性疾病是严重危害人类健康的最重要疾病之一。据国家疾控中心(⑶C)统计2011年我国法定传染病发病632万例，死亡I. 5万人。其中病毒性肝炎、肺结核和梅毒的发病率位居前三位，占乙类传染病发病总数的85. 41%。且乙型肝炎、丙型肝炎等血源性传染病的发病率呈逐年上升趋势。上述数据表明，乙型病毒性肝炎仍占据我国感染性疾病发病率首位，其发病人数亦占我国肝炎发病总人数的70%以上。大量临床资料和研究表明，乙型病毒性肝炎患者的血清学转归和预后与所感染乙型肝炎病毒(HBV)的基因型及拷贝数密切相关。因此，建立快速、准确的HBV检测与分型方法对于乙型病毒性肝炎的早期诊断、疗效监测、预后判断和个体化治疗具有重要临床意义。对于HBV感染的检测，目前的实验室方法主要分为直接检测和间接检测两大类。 其中间接检测以生物化学方法和免疫学为主。生物化学方法通过检测多项转氨酶(ALT， AST, γ-GGT等)的升高来间接判断病毒感染，其灵敏度较高，但易受其它原因导致的肝损伤影响，故特异性差。免疫法包括早期的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种病原微生物核酸无扩增检测和分型方法，其特征在于包括如下步骤：(1)根据待测样品的核酸序列合成DNA和/或PNA探针1，2，3，所述的探针1，2，3能够分别与待测样品杂交并且互不重叠；(2)分别将探针1，2，3与磁性纳米颗粒和两种荧光量子点耦联，所述的荧光量子点的荧光可以相同，也可以不相同。(3)合成生物素连接的桥连DNA合/或PNA序列1，2以及互补的序列1’，2’，将序列1’和2’与步骤(2)中的两种荧光量子点分别耦联；(4)合成两种生物素修饰的荧光颜色不同的两种荧光量子点，这两种荧光量子点可以与步骤(2)中的荧光量子点相同，也可以不同；(5)选择步骤(2)中的探针修饰的磁性纳米颗粒和其...

【技术特征摘要】
1.ー种病原微生物核酸无扩增检测和分型方法，其特征在于包括如下步骤 (1)根据待测样品的核酸序列合成DNA和/或PNA探针1，2，3，所述的探针1，2，3能够分别与待测样品杂交并且互不重叠； (2)分别将探针1，2，3与磁性纳米颗粒和两种荧光量子点耦联，所述的荧光量子点的荧光可以相同，也可以不相同。(3)合成生物素连接的桥连DNA合/或PNA序列1，2以及互补的序列I’，2’，将序列I’和2’与步骤(2)中的两种荧光量子点分别耦联； (4)合成两种生物素修饰的荧光颜色不同的两种荧光量子点，这两种荧光量子点可以与步骤(2)中的荧光量子点相同，也可以不同； (5)选择步骤(2)中的探针修饰的磁性纳米颗粒和其中ー种探针修饰的荧光量子点，将其与待测样品以及相应的桥连序列进行杂交并进行磁性分离；然后通过重复加入Sa(链霉亲和素)-洗涤-加入步骤(4)中的其中ー种生物素修饰的荧光量子点-洗涤的步骤进行层层组装，然后通过磁性分离得到待测样品的富集物，任选地，对富集物的样品进行荧光強度測定； (6)选择另外ー种探针修饰的荧光量子点，将其与步骤(5)获得的富集物以及相应的桥连序列进行杂交并进行磁性分离；然后通过重复加入Sa-洗涤-加入步骤(4)中的另外ー种生物素修饰的荧光量子点-洗涤的步骤进行层层组装，然后通过磁性分离得到待测样品的第二富集物，任选地，对第二富集物的样品运用荧光光谱成像技术或者流式细胞仪技术进行检测。2.ー种病原微生物核酸无扩增检测和分...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗阳，张波，蒋天伦，府伟灵，刘炜，
申请(专利权)人：重庆西南医院，
类型：发明
国别省市：