本发明专利技术涉及一种HLA‑B*5801基因分型检测试剂盒，该试剂盒包括有2条引物、4条常规探针、以及2条与纳米金颗粒连接的探针；所述引物为：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；所述常规探针分别为SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6，或分别为SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6的反向互补序列；所述与纳米金颗粒连接的探针的碱基组成如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示，或SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8的反向互补序列所示。所述HLA‑B*5801基因分型检测试剂盒，可实现可视化、低成本、高灵敏的HLA‑B*5801基因分型检测。
【技术实现步骤摘要】
可视化HLA-B*5801基因分型检测试剂盒
本专利技术属于分子生物技术和基因检测领域，具体是一种HLA-B*5801基因分型检测试剂盒。
技术介绍
别嘌呤醇是治疗痛风的一线药物，是目前惟一的黄嘌呤氧化酶抑制剂。该药可引起严重副反应，包括Stevens-John综合征(SJS)及中毒性表皮坏死症(TEN)。HLA-B*5801等位基因与别嘌呤醇引发的SJS或TEN的强相关性首先由中国台湾学者在汉族人群中发现，并被泰国、新加坡、香港和中国多个研究小组在汉族人群中证实，汉族人中HLA-B*5801等位基因频率为9-15％(呈地域差异)。研究表明，HLA-B*5801等位基因与别嘌呤醇引发的严重皮炎副反应呈现很强的相关性，尤其在汉族人中高达100％，几乎所有副反应的患者都是HLA-B*5801的携带者，而别嘌呤醇耐受者中只有15％左右的HLA-B*5801携带者，检测HLA-B*5801等位基因可以预防别嘌呤醇引发的SJS或TEN。在2012年美国风湿病学会更新的痛风管理指南中也建议使用别嘌呤醇前，应对严重过敏反应的高危人群，建议进行HLA-B*5801等位基因检测。然而，由于HLA-B*5801等位基因较为复杂，直接对其检测很不方便。有研究进一步证实，对于亚洲人种，PSORS1C1基因的SNP位点(rs9263726)与HLA-B*5801等位基因存在直接相关性，且相关性达到100％，因此，可以检测与HLA-B*5801等位基因关联的SNP位点来反映携带者是否携带HLA-B*5801等位基因。本项目通过检测PSORS1C1基因的SNP位点(rs9263726)来反映服用别嘌呤醇药物的临床携带者发生SJS/TEN的风险。目前市场上已有的HLA-B*5801等位基因分型检测试剂盒基本都是基于荧光信号检测的PCR扩增技术，需要用到实时荧光PCR设备，其价格较为昂贵，不利于在设施条件差的医疗单位使用。而同时临床中，至今为止尚未有能够直接采用普通PCR循环仪器就能够实现可视化分型HLA-B*5801等位基因的闭管方法。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的为提供一种对设施条件要求低、可视化、成本低廉的新型HLA-B*5801等位基因分型检测试剂盒。实现上述目的的技术方案如下。一种可视化HLA-B*5801基因分型检测试剂盒，包括有2条引物，4条常规探针、以及2条与纳米金颗粒连接的探针；所述2条引物为：SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；所述4条常规探针分别为SEQIDNO.3至SEQIDNO.6，或所述4条常规探针分别为SEQIDNO.3至SEQIDNO.6的反向互补序列；所述2条与纳米金颗粒连接的探针的碱基组成如SEQIDNO.7至SEQIDNO.8所示，或SEQIDNO.7至SEQIDNO.8的反向互补序列所示。本专利技术利用了基于纳米金探针的可视化核酸检测技术，在将高灵敏的PCR扩增方法、高特异的酶切方法及可视化的纳米金探针检测方法相结合，构建了可视化HLA-B*5801基因分型检测试剂盒，可用于HLA-B*5801基因分型的可视化检测，实现低成本、高灵敏的HLA-B*5801基因分型检测。通过检测患者基因组DNA中的SNP位点(rs9263726)单核苷酸多态性位点，判定该患者的HLA-B*5801基因编码酶的药物代谢速率类型，并根据携带者的等位基因类型辅助医生对别嘌呤醇用药的不良反应发生风险进行评价，指导携带者的安全用药，为临床提供一种新型检测方法。本专利技术具有以下有益效果。采用本专利技术中的试剂盒对HLA-B*5801基因SNP位点进行分型检测无需使用荧光探针，试剂存放无需避光，不必担心荧光衰减的问题，因此存放条件更加稳定。本专利技术采用的纳米金探针有比较成熟的方法合成，成本低；具备高稳定性，能够耐受强热循环和强机械冲击；具备强适用性，能够与各种酶反应液共存而不影响反应的正常进行。利用本专利技术中的试剂盒可实现短时间高灵敏度的闭管核酸检测，能够有效的避免扩增产物的交叉污染。本专利技术中的试剂盒能够采用普通PCR仪完成对HLA-B*5801基因SNP位点的分型检测，且结果区分特征明显。附图说明下列附图用于说明本专利技术的具体实施方案，不用于限定有权利要求所界定的本专利技术范围。图1是本专利技术中引物探针设计原理。图2是实施例2中检测反应的灵敏度。图3是实施例3中匹配基因型检测结果。图4是实施例4中干扰实验检测结果。图5是实施例5中代表性样本检测结果。具体实施方式除非另有定义，本专利技术所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本专利技术。本专利技术所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。实施例1引物探针根据HLA-B*5801基因SNP位点的分别特异性设计对应的引物和探针，针对该位点分别由一对特异性的引物和探针决定其检测结果，其引物设计的位置和方法的原理如图1所示。所述HLA-B*5801基因分型检测试剂盒，包含2条引物、4条常规探针、2条纳米金修饰探针、反应液、酶液。引物、探针和纳米金探针序列如引物1-引物2、探针1-探针4、纳米金探针1-纳米金探针2，或为上述序列的互补序列：引物1：GGACCCCAGCTCCTTAACA；SEQIDNO.1引物2：CCATGTGGCAAAGTCGG；SEQIDNO.2探针1：CGCGCCGAGGGTCCCCCCC；SEQIDNO.3探针2：CGCGCCGAGGATCCCCCCC；SEQIDNO.4探针3：AGAGTTTCCTCGGAG；SEQIDNO.5探针4：GTCTTGTGGTACTGCACTCGTCTCGGTTTTCCGAGACGAGTCCTCGGCGCGATCGTGATGAACCAT；SEQIDNO.6纳米金探针1：Au-AAAAAAAAAAGTTCATGATCACGAT；SEQIDNO.7纳米金探针2：GCAGTACCACAAGACAAAAAAAAAA-Au。SEQIDNO.8本实施例所述的试剂盒中，所述的纳米金探针的纳米金颗粒平均尺寸为1nm-200nm，较佳的纳米金颗粒平均尺寸为5nm-80nm，本实施例中所用的纳米金探针平均尺寸为10nm-30nm。上述纳米金颗粒市面上能够购买得到的合格产品即可。所述的分型检测试剂盒，所述酶液有两种酶混合而成，两种酶分别为扩增酶和内切酶，扩增酶可以是TthDNA聚合酶、pfuDNA聚合酶、TaqDNA聚合酶、VentDNA聚合酶，内切酶可以是TaqPol、TthPol、TaqExo、AfuFEN、PfuFEN、MjaFEN或MthFEN。本实施例中所用的扩增酶是TaqDNA聚合酶，内切酶所用的是AfuFEN。所述HLA-B*5801基因分型检测试剂盒对HLA-B*5801基因SNP位点进行分型检测每例样本需要2管反应实现结果分型的判读，分别针对HLA-B*5801基因SNP位点野生型(P1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种HLA‑B*5801基因分型检测试剂盒，其特征在于，包括有2条引物，4条常规探针、以及2条与纳米金颗粒连接的探针；所述2条引物为：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；所述4条常规探针分别为SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6，或所述4条常规探针分别为SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6的反向互补序列；所述2条与纳米金颗粒连接的探针的碱基组成如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示，或SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8的反向互补序列所示。
【技术特征摘要】
1.一种HLA-B*5801基因分型检测试剂盒，其特征在于，包括有2条引物，4条常规探针、以及2条与纳米金颗粒连接的探针；所述2条引物为：SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；所述4条常规探针分别为SEQIDNO.3至SEQIDNO.6，或所述4条常规探针分别为SEQIDNO.3至SEQIDNO.6的反向互补序列；所述2条与纳米金颗粒连接的探针的碱基组成如SEQIDNO.7至SEQIDNO.8所示，或SEQIDNO.7至SEQIDNO.8的反向互补序列所示。2.根据权利要求1所述的HLA-B*5801基因分型检测试剂盒，其特征在于，所述纳米金颗粒的平均尺寸为1nm-200nm。3.根据权利要求2所述的HLA-B*5801基因分型检测试剂盒，其特征在于，所述纳米金颗粒的平...
【专利技术属性】
技术研发人员：王建平，潘腾飞，
申请(专利权)人：广州市宝创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。