免疫检测载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种免疫检测载体的制备方法，包括以下步骤：提供固相基材；将所述固相基材使用含有多巴胺盐和聚乙烯亚胺的第一溶液进行浸泡；将经过所述第一溶液浸泡的固相基材使用含有金属离子和有机配体的第二溶液进行浸泡，得到所述免疫检测载体。本发明专利技术的制备方法可以有效地提升传统固相基材的比表面积以及与抗体等生物分子的结合位点。MOF的三维和多孔结构进一步降低了材料表面大分子之间反应的空间位阻，从而增加了抗体等生物分子的反应活性，充分暴露其表位，提升检测信号及灵敏度。而且，MOF负载抗体等生物分子之后，能够较长期保护抗体等生物分子免于外部环境温度变化造成的活性降低等影响。成的活性降低等影响。成的活性降低等影响。

【技术实现步骤摘要】
免疫检测载体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，特别是涉及一种免疫检测载体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]目前用于检测蛋白基生物标志物的技术包括酶联免疫吸附测定法(ELISA)、微流控法、免疫层析法、化学发光法等，主要是通过固相载体结合捕获对应的抗体，然后与样本中的待测抗原或标志物发生特异性免疫反应，实现抗原或标志物的检测。如传统ELISA法所用固相载体为96孔反应杯，材质为聚苯乙烯(PS)塑料；微流控法可用聚合物塑料(PS、PMMA、COP等)或玻璃形成微流道，在层流流道中实现微量样品的有效检测；免疫层析法则是以多孔硝化纤维素薄膜作为固相层析载体包被抗体；而化学发光法常常依靠微米磁珠作为固相载体表面来结合抗体，实现抗原标志物检测。而由于抗体/蛋白质本身对暴露温度和pH等环境变化的敏感性，基于以上市场主流的检测方法，固相表面结合抗体后，产品常常需要低温保存和运输。同时，传统ELISA等法还存在低灵敏度和检测限(LOD)等局限性。
[0003]因此，传统的免疫检测载体难以确保结合抗体的稳定性，也就无法降低免疫诊断产品的运输成本，免疫反应的灵敏度也较低。

技术实现思路

[0004]基于此，有必要提供一种能够提高结合抗体效力和稳定性，以及增强免疫反应灵敏度的免疫检测载体。
[0005]一种免疫检测载体的制备方法，其包括以下步骤：
[0006]提供固相基材；
[0007]将所述固相基材使用含有多巴胺盐和聚乙烯亚胺的第一溶液进行浸泡；/>[0008]将经过所述第一溶液浸泡的固相基材使用第二溶液进行浸泡，得到所述免疫检测载体，所述第二溶液含有能形成金属有机框架材料的金属离子和有机配体。
[0009]在其中一个实施例中，在使用所述第二溶液进行浸泡之前，还包括以下步骤：将经过所述第一溶液浸泡的固相基材使用含有戊二醛的第三溶液进行浸泡。
[0010]在其中一个实施例中，所述第三溶液中，所述戊二醛的浓度为0.5wt％～1.5wt％。
[0011]在其中一个实施例中，所述第一溶液中，所述多巴胺盐的浓度为0.1wt％～1wt％，所述聚乙烯亚胺的浓度为0.1wt％～1wt％，所述聚乙烯亚胺的分子量为2000～75000Da。
[0012]在其中一个实施例中，所述第二溶液中，所述金属离子的摩尔浓度为0.001M～0.1M，所述有机配体的摩尔浓度为0.5M～2M。
[0013]在其中一个实施例中，所述金属离子源自对应金属的可溶性的硝酸盐、盐酸盐、硫酸盐和/或醋酸盐，所述金属离子为锌离子、铁离子、铜离子、锰离子、铝离子、镁离子、钾离子、镍离子和铬离子中的一种或多种。
[0014]在其中一个实施例中，所述有机配体为2
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甲基咪唑、2
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硝基咪唑、苯并咪唑、2
‑
咪
唑甲醛和4
‑
甲基咪唑
‑5‑
甲醛中的一种或多种。
[0015]本专利技术还提供了一种免疫检测载体，其包括依次层叠的固相基材、多巴胺
‑
聚乙烯亚胺层和金属有机框架材料层。
[0016]本专利技术还提供了一种免疫检测方法，其包括以下步骤：提供如上所述的免疫检测载体，加入抗体溶液进行孵育，然后使用封闭液进行封闭，洗涤后加入待测样本进行孵育。
[0017]本专利技术还提供了一种免疫检测材料，其包括如上所述的免疫检测载体，以及结合于所述免疫检测载体表面的抗体。
[0018]金属有机框架材料(MOF)是一种含有金属离子和有机配体基团的混合材料，MOF由有机配体配位的金属原子或原子簇构成一维、二维或三维的结构，在氢气存储、气体吸附与分离、传感器、药物缓释等领域有重要的应用。除了可调谐的孔径外，它还具有很大的比表面积和很高的孔隙度。封装在MOFs中的酶或蛋白质表现出有限的结构变化，导致即使在变性条件下也能维持其原本相应的生物活性和功能。同时，MOFs的三维和多孔结构，让其具有很大比表面以及可调节的多孔结构，因此相比传统的塑料固相表面，能够提供更多的位点以便于大量的生物分子结合，且三维结构也在一定程度上降低了生物分子之间反应的空间位阻影响，利于增加生物分子的反应活性。本专利技术的制备方法利用贻贝仿生表面化学，通过多巴胺
‑
聚乙烯亚胺非均匀形核将MOF粒子原位生长于固相表面形成薄膜，用于抗体的负载，进而用于抗原标志物的免疫检测反应。如此，可以有效地提升传统固相基材的比表面积以及与抗体等生物分子的结合位点。同时，MOF的三维和多孔结构，进一步降低了材料表面大分子之间反应的空间位阻，从而增加了抗体等生物分子的反应活性，充分暴露其表位，提升检测信号及灵敏度。而且，MOF负载抗体等生物分子之后，能够较长期保护抗体等生物分子免于外部环境温度变化造成的活性降低等影响。
附图说明
[0019]图1为实施例1中免疫检测载体的扫描电镜图；
[0020]图2为实施例1中免疫检测载体结合抗体后的扫描电镜图；
[0021]图3为实施例1和实施例3中免疫检测载体与传统ELISA载体用于检测PCT抗原的比较图；
[0022]图4为实施例2中免疫检测载体结合抗体后免疫检测性能随时间变化的曲线图；
[0023]图5为实施例3中不同处理情况下载体表面的接触角变化比较图；
[0024]图6为实施例4中免疫检测载体用于检测PCT抗原的免疫检测结果图。
具体实施方式
[0025]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0026]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0027]本专利技术一实施例的免疫检测载体的制备方法，其包括以下步骤S1～S3：
[0028]S1、提供固相基材；
[0029]S2、将固相基材使用含有多巴胺盐(PDA)和聚乙烯亚胺(PEI)的第一溶液进行浸泡；
[0030]S3、将经过第一溶液浸泡的固相基材使用第二溶液进行浸泡，得到免疫检测载体，第二溶液含有能形成金属有机框架材料的金属离子和有机配体。
[0031]金属有机框架材料(MOF)是一种含有金属离子和有机配体基团的混合材料，除了可调谐的孔径外，它还具有很大的比表面积和很高的孔隙度。封装在MOFs中的酶或蛋白质表现出有限的结构变化，导致即使在变性条件下也能维持其原本相应的生物活性和功能。同时，MOFs的三维和多孔结构，让其具有很大比表面以及可调节的多孔结构，因此相比传统的塑料固相表面，能够提供更多的位点以便本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫检测载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：提供固相基材；将所述固相基材使用含有多巴胺盐和聚乙烯亚胺的第一溶液进行浸泡；将经过所述第一溶液浸泡的固相基材使用第二溶液进行浸泡，得到所述免疫检测载体，所述第二溶液含有能形成金属有机框架材料的金属离子和有机配体。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在使用所述第二溶液进行浸泡之前，还包括以下步骤：将经过所述第一溶液浸泡的固相基材使用含有戊二醛的第三溶液进行浸泡。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第三溶液中，所述戊二醛的浓度为0.5wt％～1.5wt％。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一溶液中，所述多巴胺盐的浓度为0.1wt％～1wt％，所述聚乙烯亚胺的浓度为0.1wt％～1wt％，所述聚乙烯亚胺的分子量为2000～75000Da。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第二溶液中，所述金属离子的摩尔浓度为0.001M～0.1M，所述有机配体的摩尔浓度为0.5M～2M。6.根据权利要求1～...

【专利技术属性】
技术研发人员：喻光顺，周小棉，潘腾飞，张淞，
申请(专利权)人：广州市宝创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：