一种基于核孔膜的微孔板及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种基于核孔膜的微孔板及其制备方法与应用。该基于核孔膜的微孔板，包括微孔板基体和位于微孔板基体底部的核孔膜，微孔板基体的内壁设置有疏水层。本发明专利技术通过对微孔板基体的内壁进行疏水修饰，消除微孔板基体的内壁和液体的非特异性吸附；通过在微孔板基体底部增加核孔膜，在免疫学检测时，捕获抗体或抗原偶联在粒径略大于核孔膜孔径的微球上，酶标抗体或抗原通过检测物结合在微球上，然后，使用吸水纸或者负压使微孔板中的液体通过核孔膜，结合在微球上的酶则留在微孔板基体内；使得微孔板基体内残留的液体少，降低检测的背景干扰；可以在20～40min内完成ELISA和板式化学发光免疫试验，提高了检测效率。提高了检测效率。提高了检测效率。

A microplate based on nuclear pore membrane and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种基于核孔膜的微孔板及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物实验设备领域，尤其涉及一种基于核孔膜的微孔板及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]微孔板，又称酶标板，是生物学分析中非常重要的设备。目前酶联免疫吸附试验(ELISA)，板式化学发光免疫试验，核酸适配体相关的生物学检测方法，DNA和RNA检测中都可能使用微孔板。目前商业化的微孔板是由聚苯乙烯制备，为透明或者黑色的。微孔板和蛋白质，核酸等分子吸附后，再和相应的检测靶标结合，最后通过一系列的信号方法实现靶标分子的检测。微孔板中进行生物学分析时，其检测信号可以是比色、荧光、化学发光、时间分辨荧光、电化学信号等。为了提高检测的灵敏度，微孔板和蛋白质，核酸等分子具有非常高的亲和力。因此，在生物学检测过程中，需要5-8次的洗涤过程，以消除核酸、蛋白质等分子与微孔板的非特异性吸附。多次洗涤步骤使得整个ELISA和板式化学发光免疫试验操作复杂，至少需要3.5小时，耗时，耗人力。
[0003]核孔膜，又称核径迹蚀刻膜，是加速器引出的重离子或反应堆裂变碎片穿过PET薄膜，沿着轨迹中心位置会产生一个高度损伤的区域，这个圆柱形的区域被称之为潜径迹，直径约10nm。径迹区域附近具有很高的化学反应能力，与一定浓度的化学试剂接触，潜径迹能够被蚀刻而成微米量级微孔。核孔膜具有低成本，低吸附和高透过率的特点，在防伪技术、医药过滤、半导体工业等领域展现出重要的应用价值，在生物医学方面具有诱人的应用前景。但是，目前尚无将核孔膜应用于微孔板的相关研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种基于核孔膜的微孔板。
[0005]本专利技术的另一目的在于提供上述基于核孔膜的微孔板的制备方法。
[0006]本专利技术的再一目的在于提供上述基于核孔膜的微孔板的应用。
[0007]为实现上述目的，本专利技术通过下述技术方案实现：
[0008]一种基于核孔膜的微孔板，包括微孔板基体和位于微孔板基体底部的核孔膜，微孔板基体的内壁设置有疏水层。
[0009]所述的微孔板基体优选为没有底部的微孔板。
[0010]所述的微孔板基体的颜色优选为透明或黑色：用于分析透射光强度时，所述的微孔板基体的颜色为透明；用于分析荧光或者化学发光强度时，所述的微孔板基体的颜色为黑色。
[0011]所述的核孔膜的颜色优选为透明或黑色：用于分析透射光强度时，所述的核孔膜的颜色为透明；用于分析荧光或者化学发光强度时，所述的核孔膜的颜色为黑色。
[0012]所述的核孔膜的材料优选为聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚碳酸酯(PC)和聚丙
烯(PP)中的至少一种。
[0013]所述的核孔膜的孔径优选为0.1～20μm。
[0014]所述的微孔板基体与核孔膜优选通过胶粘或者热键合方法固定；更优选通过热压机固定。
[0015]所述的疏水层的材料为疏水修饰的材料，优选为疏水涂层涂料或基于纳米材料的疏水材料。
[0016]所述的疏水涂层涂料优选为聚烯烃、聚碳酸酯、聚酰胺、聚丙烯腈和聚酯中的至少一种。
[0017]所述的基于核孔膜的微孔板包括但不限于单孔微孔板、板条微孔板、96孔微孔板和384孔微孔板。
[0018]上述基于核孔膜的微孔板的制备方法，步骤如下：在微孔板基体的内部喷涂或浸泡疏水修饰的材料，放置，得到具有疏水层的微孔板基体；然后将核孔膜固定在微孔板基体的底部，得到基于核孔膜的微孔板。
[0019]所述的微孔板基体优选通过3D打印技术制备；更优选通过如下步骤制备：
[0020](1)用solidworks 2016软件设计微孔板基体；
[0021](2)将设计的微孔板基体转化成stl格式，并且用3D打印机配套的软件转化成光敏打印机运行的格式；
[0022](3)用3D打印机进行打印微孔板基体。
[0023]所述的疏水层的材料为疏水修饰的材料，优选为疏水涂层涂料或基于纳米材料的疏水材料。
[0024]所述的疏水涂层涂料优选为聚烯烃、聚碳酸酯、聚酰胺、聚丙烯腈和聚酯中的至少一种；更优选为聚四氟乙烯。
[0025]所述的基于纳米材料的疏水材料优选为佛山盛创达化工有限公司的NEC100。
[0026]所述的浸泡时间优选为30min。
[0027]所述的放置条件优选为室温放置20h以上。
[0028]所述的室温优选为10～30℃；更优选为24～26℃。
[0029]所述的微孔板基体与核孔膜优选通过胶粘或者热键合方法固定；更优选通过热压机固定。
[0030]上述基于核孔膜的微孔板在生物学检测中的应用。
[0031]所述的生物学检测包括但不限于免疫学检测。
[0032]一种免疫学检测方法，包括如下步骤：
[0033](1)将捕获抗体或抗原偶联在微球上，然后将酶标记的抗体或抗原、检测物、抗体或抗原修饰的微球加入上述基于核孔膜的微孔板中，反应，酶标记的抗体或抗原通过检测物结合在微球上；
[0034](2)将微孔板基体内的液体吸出；
[0035](3)加入底物液，测量液体的吸光度、化学发光强度或者荧光强度。
[0036]步骤(1)中所述的微球优选为乳胶微球；更优选为羧基化聚苯乙烯微球。
[0037]步骤(1)中所述的微球优选为粒径大于核孔膜孔径的微球。
[0038]步骤(1)中所述的反应条件优选为室温反应15min。
[0039]步骤(2)中微孔板基体内的液体吸出方式优选通过吸水纸或者负压；更优选为通过吸水纸。
[0040]步骤(3)中所述的底物是能与酶标记的抗体或抗原中酶发生反应的物质。
[0041]步骤(3)中所述的测量工具优选为酶标仪。
[0042]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0043]1、本专利技术公开了一种全新的基于核孔膜的微孔板，通过对微孔板基体的内壁进行疏水修饰，消除微孔板基体的内壁和液体的非特异性吸附；通过在微孔板基体底部增加核孔膜，在免疫学检测时，捕获抗体或抗原偶联在粒径略大于核孔膜孔径的微球上，酶标抗体或抗原通过检测物结合在微球上，然后，使用吸水纸或者负压使微孔板中的液体通过核孔膜，结合在微球上的酶则留在微孔板基体内；使得微孔板基体内残留的液体少，降低检测的背景干扰。
[0044]2、本专利技术提供的基于核孔膜的微孔板可以在20～40min内完成整个ELISA和板式化学发光免疫试验操作步骤，减少了检测用时，提高了检测效率。
附图说明
[0045]图1为本专利技术的基于核孔膜的微孔板的剖面图；其中，1-微孔板基体、2-核孔膜。
具体实施方式
[0046]下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。
[0047]实施例1制备基于核孔膜的微孔板及ELISA检测降钙素原(procalcitonin,PCT)
[004本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于核孔膜的微孔板，其特征在于：包括微孔板基体和位于微孔板基体底部的核孔膜，微孔板基体的内壁设置有疏水层。2.根据权利要求1所述的基于核孔膜的微孔板，其特征在于：所述的疏水层的材料为疏水涂层涂料或基于纳米材料的疏水材料。3.根据权利要求1所述的基于核孔膜的微孔板，其特征在于：所述的微孔板基体与核孔膜通过胶粘或者热键合方法固定；进一步为通过热压机固定。4.根据权利要求1所述的基于核孔膜的微孔板，其特征在于：所述的基于核孔膜的微孔板的颜色为透明或黑色：用于分析透射光强度时，所述的基于核孔膜的微孔板的颜色为透明；用于分析荧光或者化学发光强度时，所述的基于核孔膜的微孔板的颜色为黑色。5.根据权利要求1所述的基于核孔膜的微孔板，其特征在于：所述的核孔膜的材料为聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯和聚丙烯中的至少一种；所述的核孔膜的孔径为0.1～20μm。6.根据权利要求1～5中任一项所述的基于核孔膜的微孔板，其特征在于：所述的基于核孔膜的微孔板包括但不限于单孔微孔板、板条微孔板、96孔微孔板和384孔微孔板。7...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹芝南，付强强，吴扬哲，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：