引物组、探针组、检测产品及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及引物组、探针组、检测产品及其应用。本发明专利技术提供了引物组，包括：引物组1至引物组7中的一个或多个。本发明专利技术提供的试剂盒检测靶标覆盖了6种呼吸道病原体，其具有特异性好，灵敏度高，多联检、操作简便快速等优点，同时配合全封闭的PCR扩增与层析的全自动检测微流控芯片，适用于对呼吸道病原体的快速检测。道病原体的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
引物组、探针组、检测产品及其应用


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及引物组、探针组、检测产品及其应用。

技术介绍

[0002]呼吸道感染是世界范围内最常见的疾病之一，发病率在各国居民发病率总体结构中占主要地位，每年流行高峰期约有10％的居民患有呼吸道感染。呼吸道感染分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染多伴有鼻炎、咳嗽、咽炎、全身发热等症状，下呼吸道感染包括气管炎、支气管炎和肺炎。急性呼吸道感染(acuterespiratorytractinfection，ARTI)可发生于呼吸道的任何部位，是最常见的感染性疾病之一，尤其是下呼吸道感染，是所有感染性疾病的主要死因。引起呼吸道感染的病原体种类很多，包括细菌、病毒、支原体和衣原体等。相关研究显示肺炎支原体肺炎占社区获得性肺炎(community
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acquiredpneumonia，CAP)的10％～40％，在所有非典型病原感染所导致的CAP中所占的比例超过了50％；我国的一项调查研究显示，肺炎支原体肺炎在成人CAP中占比高达20.7％，已经超过了肺炎链球菌，成为成人CAP的首要病原；在儿童感染方面，MP肺炎患儿混合其他病原感染达51.2％，其中肺炎衣原体占25.9％，病毒占14.4％，细菌占10.9％。肺炎衣原体是CAP中另一种常见感染方式，占比6％～19％。由于地域差异、人群特征、病原体检测技术和监测时间不同，导致不同国家、不同地区ARTI和CAP的流行病学特征、常见致病原的组成结构及耐药特性存在明显差异。根据近年来流行病学调查发现由病毒和非典型病原体所引发的病毒性肺炎和非典型肺炎在婴幼儿、儿童、青壮年和老年人中的发病率逐渐上升，病毒和非典型病原体已经成为ARTI和CAP主要病原体之一。ARTI和CAP的病原体包括：甲型流感病毒(InfluenzaA，IFA)、乙型流感病毒(InfluenzaB，IFB)、新型冠状病毒(NovelCoronavirus，2019
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nCoV)、呼吸道合胞病毒(RespiratorySyncytialVirus，RSV)、肺炎衣原体(Chlamydophilapneumoniae，CP)和肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae，MP)等。在国内的临床诊断中，限于诊疗条件，很多呼吸道感染患者无法接受更准确的诊断，往往采用广谱抗生素治疗，临床上约有20％～25％的抗生素使用不合理。这样不仅难以达到最佳的治疗效果，还可能耽误病情，或诱导细菌耐药性的产生及更为复杂的二重感染等。呼吸道感染往往存在多种病原体混合感染的情况，临床医生需综合考虑何种病原或多种病原的共同作用是引起肺炎患者住院的主要原因。
[0003]由于ARTI和CAP疾病的病原谱复杂、发病率高，多联检的核酸检测产品极少，针对ARTI和CAP呼吸道疾病的早期诊断，仍有许多问题急需解决：(1)ARTI和CAP常见的呼吸道病原体种类多样，且多数病例为混合感染，故要求检测试剂盒可实现多种病原体的平行检测，要求特异性好，灵敏度高。(2)ARTI和CAP常见的呼吸道病原体包括DNA病毒，RNA病毒，支原体和衣原体等，故要求检测试剂盒具备同时检测DNA和RNA的能力，多指标联检对引物和探针的特异性及性能优化要求高。(3)多数ARTI和CAP为急性病、集中暴发流行，故要求检测试剂盒具备操作简便、快速和高通量检测的能力。因此，早期快速，准确，多指标联合的病原体检测可以有效的指导临床用药，还可以根据不同的疫情采取针对性预防措施，控制ARTI和
CAP的暴发与传播。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供了引物组、探针组、检测产品及其应用。本专利技术提供的试剂盒检测靶标覆盖了6种呼吸道病原体，其具有特异性好，灵敏度高，多联检、操作简便快速等优点，同时配合全封闭的PCR扩增与层析的全自动检测微流控芯片，适用于对呼吸道病原体的快速检测。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了引物组，包括：引物组1至引物组7中的一个或多个；
[0007]引物组1：用于扩增2019
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nCoV
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ORF1ab的引物组具有：
[0008](1)、如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；或
[0009](2)、与(1)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(1)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
[0010](3)、与(1)或(2)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(1)或(2)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
[0011](4)、与(1)、(2)或(3)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或
[0012]引物组2：用于扩增2019
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nCoV
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N的引物组具有：
[0013](5)、如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；或
[0014](6)、与(5)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(5)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
[0015](7)、与(5)或(6)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(5)或(6)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
[0016](8)、与(5)、(6)或(7)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或
[0017]引物组3：用于扩增IFA的引物组具有：
[0018](9)、如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；或
[0019](10)、与(9)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(9)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
[0020](11)、与(9)或(10)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(9)或(10)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
[0021](12)、与(9)、(10)或(11)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或
[0022]引物组4：用于扩增IFB的引物组具有：
[0023](13)、如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列；或
[0024](14)、与(13)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(13)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
[0025](15)、与(13)或(14)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(13)或(14)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；
或
[0026](16)、与(13)、(14)或(15)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.引物组，其特征在于，包括：引物组1至引物组7中的一个或多个；引物组1：用于扩增2019
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nCoV
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ORF1ab的引物组具有：(1)、如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；或(2)、与(1)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(1)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(3)、与(1)或(2)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(1)或(2)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(4)、与(1)、(2)或(3)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或引物组2：用于扩增2019
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nCoV
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N的引物组具有：(5)、如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；或(6)、与(5)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(5)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(7)、与(5)或(6)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(5)或(6)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(8)、与(5)、(6)或(7)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或引物组3：用于扩增IFA的引物组具有：(9)、如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；或(10)、与(9)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(9)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(11)、与(9)或(10)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(9)或(10)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(12)、与(9)、(10)或(11)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或引物组4：用于扩增IFB的引物组具有：(13)、如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列；或(14)、与(13)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(13)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(15)、与(13)或(14)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(13)或(14)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(16)、与(13)、(14)或(15)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或引物组5：用于扩增RSV的引物组具有：(17)、如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列；或(18)、与(17)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(17)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(19)、与(17)或(18)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(17)或(18)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(20)、与(17)、(18)或(19)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或
引物组6：用于扩增MP的引物组具有：(21)、如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列；或(22)、与(21)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(21)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(23)、与(21)或(22)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(21)或(22)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(24)、与(21)、(22)或(23)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或引物组7：用于扩增CP的引物组具有：(25)、如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列；或(26)、与(25)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(25)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(27)、与(25)或(26)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(25)或(26)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(28)、与(25)、(26)或(27)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组还包括标签序列和第一显色标记物；所述第一显色标记物包括：生物素；所述引物组1的所述标签序列具有：(29)、如SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列；或(30)、与(29)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(29)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(31)、与(29)或(30)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(29)或(30)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(32)、与(29)、(30)或(31)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或所述引物组2的所述标签序列具有：(33)、如SEQ ID NO:18所示的核苷酸序列；或(34)、与(33)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(33)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(35)、与(33)或(34)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(33)或(34)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(36)、与(33)、(34)或(35)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或所述引物组3的所述标签序列具有：(37)、如SEQ ID NO:19所示的核苷酸序列；或(38)、与(37)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(37)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(39)、与(37)或(38)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(37)或(38)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
(40)、与(37)、(38)或(39)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或所述引物组4的所述标签序列具有：(41)、如SEQ ID NO:20所示的核苷酸序列；或(42)、与(41)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(41)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(43)、与(41)或(42)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(41)或(42)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(44)、与(41)、(42)或(43)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列；和/或所述引物组5的所述标签序列具有：(45)、如SEQ ID NO:21所示的核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琼，杨祥胜，徐宁，潘腾飞，陈晓敏，
申请(专利权)人：广州市宝创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：