一种人乳头瘤病毒的分型方法技术

本发明专利技术公开了一种人乳头瘤病毒的分型方法，首先进行样品扩增，选用通用HPV扩增引物，上游引物可以是MY11和PGMY11混合引物组，GP5、GP5+、SPF1的混合引物组；下游引物可以是MY09、PGMY09的混合引物组，GP6、GP6+、SPF2的混合引物组；然后进行溶解曲线分析，在HPV的DNA或者上一步的PCR产物中加入，需要检测亚型的探针，可选用的浓度范围是(10-500nM)，在荧光定量PCR仪上需要相应的荧光检测通道，设置的溶解曲线程序进行分析。本发明专利技术可以用一种荧光通道检测不同亚型的HPV，我们的附图中提供了一个荧光检测通道检测3个HPV亚型的实例。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，利用寡核苷酸探针的溶解曲线和特定的荧光标记实现HPV亚型的分型检测。
技术介绍
宫颈癌是妇女高发的恶性肿瘤之一，几乎所有的宫颈癌标本中可检出HPV DNA, HPV阴性者几乎无罹子宫颈癌之忧，因此，HPV被确认为子宫颈癌发生的必要条件。人乳头状瘤病毒(HPV)型别有80多种，按其感染部位分为皮肤型和生殖道型HPV。大约有35种型别与生殖道感染有关，约20种与肿瘤相关。依据与癌发生关系,分为低危型HPV(如6、11、42,43和44型等可引起外生殖器湿疣、宫颈上皮内低度病变等)和高危型HPV(如HPV16、 18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型与子宫颈癌及宫颈上皮内高度病变的发生相关)。而HPV16和18型感染率最高，即HPV16占所有型别的50%，其病理类型主要为子宫颈癌鳞状上皮细胞癌；HPV18占14%，在子宫颈腺上皮细胞癌占主要地位；HPV45占8% ; HPV31占5% ;其他型别占23%。所以针对HPV分型的检测对于宫颈癌的预防十分有必要。 由于目前尚无有效的技术手段能够在体外培养HPV，所以目前为止没有有效的HPV血清学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人乳头瘤病毒的分型方法，其特征在于是通过以下的步骤实现的：(1)扩增样品：选用通用HPV扩增引物，上游引物是MY11、PGMY11或上述混合引物组，GP5、GP5+、SPF1或上述混合引物组；下游引物是MY09、PGMY09或上述混合引物组，GP6、GP6+、SPF2或上述混合引物组；(2)溶解曲线分析：在HPV的DNA或者上一步的PCR产物中加入需要检测亚型的探针，可选用的浓度范围是10?500nM，在荧光定量PCR仪上需要相应的荧光检测通道，设置的溶解曲线程序是温度为20?95℃，温度上升或下降梯度0.1?5℃，每个梯度保持时间0.5?60S。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：潘振华，孙朝辉，
申请(专利权)人：潘振华，
类型：发明
国别省市：