多重核酸体外诊断疱疹病毒的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了多重核酸体外诊断疱疹病毒的试剂盒及其应用。本发明专利技术所提供的多重核酸体外诊断试剂盒，所述试剂盒包含以下引物序列和探针序列：用于检测人巨细胞病毒的引物序列和探针序列和/或用于检测单纯疱疹病毒I型的引物序列和/或探针序列和/或用于检测单纯疱疹病毒II型的引物序列和探针序列。本发明专利技术所提供的多重核酸体外诊断试剂盒，具有高灵敏度、高特异性、通量高等特点，可更好地满足临床精确快速诊断的需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物领域，尤其涉及多重核酸体外诊断疱疹病毒的试剂盒及其应用。
技术介绍
人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)、单纯疱疹病毒I(HSV I)与II(HSV II)型均属于疱疹病毒家族，为临床常用的TORCH病原体检测的三个病原体。这三种病毒在人群中感染普遍，但在健康人中病毒处于潜伏感染，不会致病。在免疫缺陷或免疫抑制病人中，这三种病毒的活动感染可导致严重后果。人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)，也称人疱疹病毒5型，属于疱疹病毒科β亚科。HCMV感染在人群感染普遍，其抗体阳性率高达40％～100％。HCMV是一种终身感染病毒，一经感染，人体宿主终身携带。在人体的感染过程中，分为原发感染、激活感染和位于两者之间的潜伏感染。HCMV是一个弱致病因子，多以潜伏形式存在于人体多种细胞中，在免疫系统正常的人体中，潜伏感染并不致病。但多种诱因均可使潜伏的病毒被激活，从而引专利技术显的临床症状和严重危害。单纯疱疹病毒是由DNA病毒的单纯疱疹病毒所致。人类单纯疱疹病毒分为两型，即单纯疱疹病毒I型(HSV-I)和单纯疱疹病毒II型(HSV-II)。I型主要引起生殖器以外的皮肤、粘膜(口腔粘膜)和器官(脑)的感染。II型主要引起生殖器部位皮肤粘膜感染。病毒经呼吸道、口腔、生殖器粘膜以及破损皮肤进入体内，潜居于人体正常粘膜、血液、唾液及感觉神经节细胞内。当机体抵抗力下降时，如发热、胃肠功能紊乱、月经、妊娠、病灶感染和情绪改变时，体内潜伏的HSV被激活而发病。目前临床上检测多种病原体(人巨细胞病毒、单纯疱疹I型、II型病毒)的检测方法主要为细胞培养与血清学方法。细胞培养方法存在速度慢、成功率低、成本高、劳动强度大等缺点。免疫学方法为目前主流检测方法，但检测灵敏度与特异性还不能满足临床需求。基于核酸的基因扩增技术在速度、通量、灵敏度与特异性等方面有突出的优势。
技术实现思路
为了弥补以上领域的不足，本专利技术提供了一种多重核酸体外诊断疱疹病毒的试剂盒。本专利技术所提供的体外诊断疱疹病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含以下引物和探针：用于检测人巨细胞病毒的引物，其序列如下：HCMV-P1FP1：5’-GCAGTACACGCCCGACT-3’，HCMV-P1RP1：5’-CACCTCGCTGCCCGTAA-3’；用于检测人巨细胞病毒的探针，其序列如下：5’-荧光素-ACCGCGGCGACAATCAGCT–淬灭剂-3’；和/或用于检测单纯疱疹病毒I型的引物，其序列如下：HSVⅠ-P2FP2：5’-GCGCGACCTCACCACCAA-3’，HSVⅠ-P2RP2：5’-CGTCCACCTCCTGCCACTTG-3’；用于检测单纯疱疹病毒I型的探针，其序列如下：5’-荧光素-CCAAAGCGCCCGTCGGTCT–淬灭剂-3’；和/或用于检测单纯疱疹病毒II型的引物，其序列如下：HSVⅡ-P3FP3：5’-GCGCGACCTCACCACGAA-3’，HSVⅡ-P3RP3：5’-CGTCCACCTCCTGCCACTTG-3’；用于检测单纯疱疹病毒II型的探针，其序列如下：5’-荧光素-TCGCCGACGACCCGCAACTT–淬灭剂-3’。用于检测多种病原体(人巨细胞病毒、单纯疱疹I型、II型病毒)时，所述试剂盒包含以下引物和探针：用于检测人巨细胞病毒的引物，其序列如下：HCMV-P1FP1：5’-GCAGTACACGCCCGACT-3’，HCMV-P1RP1：5’-CACCTCGCTGCCCGTAA-3’；用于检测人巨细胞病毒的探针，其序列如下：5’-荧光素-ACCGCGGCGACAATCAGCT–淬灭剂-3’；和用于检测单纯疱疹病毒I型的引物，其序列如下：HSVⅠ-P2FP2：5’-GCGCGACCTCACCACCAA-3’，HSVⅠ-P2RP2：5’-CGTCCACCTCCTGCCACTTG-3’；用于检测单纯疱疹病毒I型的探针，其序列如下：5’-荧光素-CCAAAGCGCCCGTCGGTCT–淬灭剂-3’；和用于检测单纯疱疹病毒II型的引物，其序列如下：HSVⅡ-P3FP3：5’-GCGCGACCTCACCACGAA-3’，HSVⅡ-P3RP3：5’-CGTCCACCTCCTGCCACTTG-3’；用于检测单纯疱疹病毒II型的探针，其序列如下：5’-荧光素-TCGCCGACGACCCGCAACTT–淬灭剂-3’。用于检测病原体人巨细胞病毒时，所述试剂盒包含以下引物和探针：用于检测人巨细胞病毒的引物，其序列如下：HCMV-P1FP1：5’-GCAGTACACGCCCGACT-3’，HCMV-P1RP1：5’-CACCTCGCTGCCCGTAA-3’；用于检测人巨细胞病毒的探针，其序列如下：5’-荧光素-ACCGCGGCGACAATCAGCT–淬灭剂-3’。用于检测病原体单纯疱疹病毒I型时，所述试剂盒包含以下引物和探针：用于检测单纯疱疹病毒I型的引物，其序列如下：HSVⅠ-P2FP2：5’-GCGCGACCTCACCACCAA-3’，HSVⅠ-P2RP2：5’-CGTCCACCTCCTGCCACTTG-3’；用于检测单纯疱疹病毒I型的探针，其序列如下：5’-荧光素-CCAAAGCGCCCGTCGGTCT–淬灭剂-3’。用于检测病原体单纯疱疹病毒II型时，所述试剂盒包含以下引物和探针：用于检测单纯疱疹病毒II型的引物，其序列如下：HSVⅡ-P3FP3：5’-GCGCGACCTCACCACGAA-3’，HSVⅡ-P3RP3：5’-CGTCCACCTCCTGCCACTTG-3’；用于检测单纯疱疹病毒II型的探针，其序列如下：5’-荧光素-TCGCCGACGACCCGCAACTT–淬灭剂-3’。进一步，所述试剂盒还包含以下引物和探针：用于检测阳性内参的引物，其序列如下：TORCH-IC FP6：TGCGCTATCCGTCACCTTCT；TORCH-IC RP6：TATCCGCCTGTCCGCCATAA；用于检测阳性内参的探针，其序列如下：IPC：5’-荧光素-CTGGTGTGCGTAGTTCATATCCGTCGA–淬灭剂-3’。进一步，所述试剂盒中还包括标准曲线方程数据信息，所述标准曲线的横坐标为标准品的浓度对数，纵坐标为荧光信号强度。所述的体外诊断疱疹病毒的试剂盒在制备检测人巨细胞病毒和/或单纯疱疹病毒I型和/或单纯疱疹病毒II型试剂中的应用也属于本专利技术的保护范围。所述体外诊断疱疹病毒的试剂盒的制备方法，包括合成Seq ID No.1-Seq ID No.9所示序列中的一条或多条。一种体外诊断疱疹病毒的方法，采用以下引物和探针对待测样品进行检测：用于检测人巨细胞病毒的引物，其序列如下：HCMV-P1FP1：5’-GCAGTACACGCCCGACT-3’，HCMV-P1RP1：5’-CACCTCGCTGCCCGTAA-3’；用于检测人巨细胞病毒的探针，其序列如下：5’-荧光素-ACCGCGGCGACAATCAGCT–淬灭剂-3’；和/或用于检测单纯疱疹病毒I型的引物，其序列如下：HSVⅠ-P2FP2：5’-GCGCGACCTCACCACCAA-3’，HSVⅠ本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外诊断疱疹病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含以下引物和探针：用于检测人巨细胞病毒的引物，其序列如下：HCMV‑P1FP1：5’‑GCAGTACACGCCCGACT‑3’，HCMV‑P1RP1：5’‑CACCTCGCTGCCCGTAA‑3’；用于检测人巨细胞病毒的探针，其序列如下：5’‑荧光素‑ACCGCGGCGACAATCAGCT–淬灭剂‑3’；和/或用于检测单纯疱疹病毒I型的引物，其序列如下：HSVⅠ‑P2FP2：5’‑GCGCGACCTCACCACCAA‑3’，HSVⅠ‑P2RP2：5’‑CGTCCACCTCCTGCCACTTG‑3’；用于检测单纯疱疹病毒I型的探针，其序列如下：5’‑荧光素‑CCAAAGCGCCCGTCGGTCT–淬灭剂‑3’；和/或用于检测单纯疱疹病毒II型的引物，其序列如下：HSVⅡ‑P3FP3：5’‑GCGCGACCTCACCACGAA‑3’，HSVⅡ‑P3RP3：5’‑CGTCCACCTCCTGCCACTTG‑3’；用于检测单纯疱疹病毒II型的探针，其序列如下：5’‑荧光素‑TCGCCGACGACCCGCAACTT–淬灭剂‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种体外诊断疱疹病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含以下引物和探针：用于检测人巨细胞病毒的引物，其序列如下：HCMV-P1FP1：5’-GCAGTACACGCCCGACT-3’，HCMV-P1RP1：5’-CACCTCGCTGCCCGTAA-3’；用于检测人巨细胞病毒的探针，其序列如下：5’-荧光素-ACCGCGGCGACAATCAGCT–淬灭剂-3’；和/或用于检测单纯疱疹病毒I型的引物，其序列如下：HSVⅠ-P2FP2：5’-GCGCGACCTCACCACCAA-3’，HSVⅠ-P2RP2：5’-CGTCCACCTCCTGCCACTTG-3’；用于检测单纯疱疹病毒I型的探针，其序列如下：5’-荧光素-CCAAAGCGCCCGTCGGTCT–淬灭剂-3’；和/或用于检测单纯疱疹病毒II型的引物，其序列如下：HSVⅡ-P3FP3：5’-GCGCGACCTCACCACGAA-3’，HSVⅡ-P3RP3：5’-CGTCCACCTCCTGCCACTTG-3’；用于检测单纯疱疹病毒II型的探针，其序列如下：5’-荧光素-TCGCCGACGACCCGCAACTT–淬灭剂-3’。2.根据权利要求1所述的体外诊断疱疹病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含以下引物和探针：用于检测人巨细胞病毒的引物，其序列如下：HCMV-P1FP1：5’-GCAGTACACGCCCGACT-3’，HCMV-P1RP1：5’-CACCTCGCTGCCCGTAA-3’；用于检测人巨细胞病毒的探针，其序列如下：5’-荧光素-ACCGCGGCGACAATCAGCT–淬灭剂-3’；和用于检测单纯疱疹病毒I型的引物，其序列如下：HSV Ⅰ-P2FP2：5’-GCGCGACCTCACCACCAA-3’，HSV Ⅰ-P2RP2：5’-CGTCCACCTCCTGCCACTTG-3’；用于检测单纯疱疹病毒I型的探针，其序列如下：5’-荧光素-CCAAAGCGCCCGTCGGTCT–淬灭剂-3’；和用于检测单纯疱疹病毒II型的引物，其序列如下：HSV Ⅱ-P3FP3：5’-GCGCGACCTCACCACGAA-3’，HSV Ⅱ-P3RP3：5’-CGTCCACCTCCTGCCACTTG-3’；用于检测单纯疱疹病毒II型的探针，其序列如下：5’-荧光素-TCGCCGACGACCCGCAACTT–淬灭剂-3’。3.根据权利要求1所述的体外...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭晓利，张建东，
申请(专利权)人：瀚吉康生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11