核酸检测方法和试剂盒技术

提供了用于检测靶标核酸的方法和试剂盒，其中扩增的核酸与例如顺磁性珠的颗粒结合形成絮凝型复合物，所述絮凝型复合物可以通过视觉观察检测。可以被检测的核酸样本的体积低至几微升。该方法可以应用于实地或照护点诊断，用于快速确定靶标核酸的存在或不存在。还可以确定靶标核酸的甲基化状态。所述方法和试剂盒具有在植物和动物中检测疾病、环境检测以及食品和其它可食用产品污染检测的普遍适用性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及核酸检测。更具体地，本专利技术涉及使用相对小体积的核酸样本快速检测核酸，其中通过视觉观察检测核酸。
技术介绍
高度需求在现场或照护点(point-of-care，POC)以最低限度的设备进行的、快速且低成本的核酸生物测定。虽然为实现这一目标进行了很多尝试，目前在实践中没有实现。已知用于检测疾病DNA生物标记物的技术和方法，包括聚合酶链式反应(PCR)和连接酶链式反应(LCR)1。然而，这些方法需要在热循环仪上进行热循环以实现快速指数DNA扩增，且因此不适合用于实地(field)或现场应用。但是，最近已经出现多种用以克服这种限制的等温的DNA扩增方法2,3。例如，为实现POC应用，通过重组酶聚合酶扩增(RPA)4或依赖解旋酶扩增(HDA)5扩增的病原体DNA已被调整而用于在横向流条和便携式荧光针上进行检测6-9。然而，这种读取方法虽然方便，但仍然依赖于使用相对复杂的设备，以及可能对于全世界的操作者仍然存在资金障碍。此外，在实地进行采样，即使有的话，也极少被讨论。具体的，使用最少的人操作和现场设施始终产生固定量的样本DNA用于下游应用。这个重要问题对任何测定的性能具有显著本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测核酸的方法，所述方法包括使分离的核酸与颗粒结合的步骤，其中所述分离的核酸与所述颗粒能够形成可以通过视觉观察检测的复合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.23 AU 20139050521.一种检测核酸的方法，所述方法包括使分离的核酸与颗粒结合的步骤，其中所述分离的核酸与所述颗粒能够形成可以通过视觉观察检测的复合物。2.一种用于检测核酸的试剂盒，所述试剂盒包含能够与分离的核酸形成复合物的颗粒，所述复合物能够通过视觉观察被检测到。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其进一步包含以下的一种或多种：用于核酸序列扩增的酶；一种或多种用于核酸序列扩增的引物；磁体；一种或多种用于核酸提取的试剂；过滤器；和/或一种或多种反应容器。4.根据权利要求1所述的方法或者权利要求2或权利要求3所述的试剂盒，其中所述复合物是通过核酸与颗粒絮凝形成的。5.根据前述权利要求任一项所述的方法或试剂盒，其中与在没有或相对低的量或浓度的核酸中观察到的絮凝相比，通过没有或相对减少的絮凝指示核酸的存在或相对量。6.根据前述权利要求任一项所述的方法或试剂盒，其中所述颗粒是顺磁性颗粒。7.根据权利要求6所述的方法或试剂盒，其中所述顺磁性颗粒是SPRI颗粒。8.根据权利要求7所述的方法或试剂盒，其中在絮凝缓冲液中发生絮凝。9.根据权利要求8所述的方法或试剂盒，其中所述絮凝缓冲液是pH(i)低于7；(ii)约pH 3.6-5.5；或者(iii)约pH 4.4。10.根据权利要求8所述的方法或试剂盒，其中所述絮凝缓冲液的pH是絮凝后半定量滴定的。11.根据前述权利要求任一项所述的方法或试剂盒，其进一步包含着色剂，用以促进、帮助或提高核酸：颗粒复合物的视觉检测。12.根据前述权利要求任一项所述的方法或试剂盒，其中所述核酸是靶标核酸通过核酸序列扩增产生的扩增产物。13.根据权利要求12所述的方法或试剂盒，其中通过聚合酶链式反应(PCR)进行核酸序列扩增。14.根据权利要求12所述的方法或试剂盒，其中通过等温核酸序列扩增进行核酸序列扩增。15.根据权利要求14所述的方法或试剂盒，其中等温核酸序列扩增是重组酶聚合酶扩增(RPA)或滚环扩增(RCA)。16.根据权利要求12至15任一项所述的方法或试剂盒，其中所述扩增产物扩增自靶标核酸，所述靶标核酸通过以下连...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·特劳，E·威，J·R·博泰拉，
申请(专利权)人：昆士兰大学，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU