一种核酸封装试剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种核酸封装试剂及其应用。本发明专利技术提供的核酸封装试剂，包括3‑10质量份琼脂糖、1‑5质量份皂苷和2‑6质量份羟丙基纤维素。本发明专利技术还保护一种靶物质检测装置，是通过以上任一所述核酸封装试剂将用于检测靶物质的引物和探针包埋于反应装置内得到的。本发明专利技术还保护一种寨卡病毒检测装置，是通过以上任一所述核酸封装试剂将序列1所示引物ZIKV‑F、序列2所示引物ZIKV‑R和序列3所示探针ZIKV‑P包埋于反应装置内得到的。本发明专利技术对于应用核酸序列依赖扩增技术检测靶物质具有重大的应用价值。本发明专利技术对于寨卡病毒的检测以及相关疾病的防控具有重大的应用和推广价值。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸封装试剂及其应用
本专利技术涉及一种核酸封装试剂及其应用。
技术介绍
寨卡病毒(Zikavirus,ZIKV)，是一种由伊蚊叮咬传播的病毒。2015年，巴西发现首例寨卡病毒感染病例，随后疫情持续发酵，直至大规模寨卡病毒疫情爆发，迅速蔓延至30多个南美及非洲地区，至今已有150多万人感染寨卡病毒。2016年2月2日世界卫生组织召开紧急会议决定把寨卡病毒传播列为全球紧急公共卫生事件。中国卫生和计划生育委员会2016年2月3日公布了《寨卡病毒病诊疗方案》(2016年第1版)，6天后我国确诊了首例输入性寨卡病毒感染病例，截止目前我国已确诊多例输入性病例。2016年8月底寨卡病毒感染再次在新加坡流行，截止9月9日新加坡已有300例确诊病例。寨卡病毒属于黄病毒科黄病毒属，单链RNA病毒，与登革热病毒属同源同宗。其传播方式主要有：蚊媒传播、母婴传播、血液传播以及性传播。临床症状与登革热类似，包扩发热、皮疹、关节痛、肌肉痛、头痛、结膜炎等，也可感染神经系统导致格林-巴利综合征，重症及死亡病例少见。寨卡病毒感染危害最大的是孕妇及胎儿，目前被怀疑是胎儿及新生儿小头畸形的罪魁祸首。目前，寨卡病毒的实验室诊断包括病原学检测和血清学试验。病毒分离为诊断寨卡病毒感染的金标准，但该方法耗时费力，且成功率低下。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种核酸封装试剂及其应用。本专利技术首先提供了一种核酸封装试剂，包括3-10质量份琼脂糖、1-5质量份皂苷和2-6质量份羟丙基纤维素。所述核酸封装试剂具体由3-10质量份琼脂糖、1-5质量份皂苷和2-6质量份羟丙基纤维素组成。所述核酸封装试剂，具体可包括5质量份琼脂糖、3质量份皂苷和4质量份羟丙基纤维素。所述核酸封装试剂更具体可由5质量份琼脂糖、3质量份皂苷和4质量份羟丙基纤维素钠组成。人参皂苷的化学结构式见式(Ⅰ)。羟丙基纤维素的化学结构式见式(Ⅱ)。所述核酸封装试剂的推荐使用浓度为0.05-1g/100ml，优选为0.1g/100ml。所述封装试剂可以直接售卖，也可以配置成母液后售卖。所述母液的具体制备方法如下：取封装试剂，溶于水(优选无菌水)，得到浓度为0.5g/100ml的母液。母液建议4℃保存。本专利技术还保护以上任一所述的核酸封装试剂的应用，为将核酸包埋于固相表面。所述应用中，具体可将核酸包埋于反应装置内。所述核酸具体可为用于检测靶物质的引物探针组(由用于检测靶物质的一条上游引物、一条下游引物和一条探针组成)。所述靶物质可为微生物，更具体可为病毒。所述引物探针组具体可为基于核酸序列依赖扩增技术的引物探针组。进一步，所述核酸封装试剂可用于通过核酸序列依赖扩增技术检测靶物质。具体来说，是通过所述核酸封装试剂将基于核酸序列依赖扩增技术的引物探针组包埋于反应装置内，然后采用包埋有引物探针组的反应装置进行核酸序列依赖扩增，从而检测靶物质。应用本专利技术提供的核酸封装试剂将核酸封装于反应装置内后，使用时只需加入反应液使其与被封装的核酸接触，即可发生崩解，核酸可快速溶于反应液中，参与后续反应。本专利技术提供的核酸封装试剂，核酸包埋效果好，与固相的粘附效果好，能够抵抗剧烈颠簸而不脱落，接触溶液后可立即崩解，溶解效果好，不影响后续的扩增反应(对扩增特异性及灵敏度无影响)。本专利技术还保护一种靶物质检测装置，是通过以上任一所述核酸封装试剂将用于检测靶物质的引物和探针包埋于反应装置内得到的。具体来说，所述靶物质检测装置中，用于检测靶物质的引物和探针包埋于反应装置的盖内侧。所述靶物质为生物，具体可为微生物，更具体可为病毒，例如寨卡病毒。所述用于检测靶物质的引物和探针具体可为基于核酸序列依赖扩增技术的引物探针组。所述用于检测靶物质的引物和探针具体可为基于核酸序列依赖扩增技术的以序列表的序列4第1至177位核苷酸为靶序列的引物探针组。所述用于检测靶物质的引物和探针具体可为基于核酸序列依赖扩增技术的以序列表的序列4为靶序列的引物探针组。所述靶物质检测装置的制备方法具体如下：将所述核酸封装试剂、所述引物、所述探针和水(优选无菌水)混合，得到包埋液；取反应装置，在每个反应管的管盖内面滴加所述包埋液，然后冷冻干燥，然后将反应管的管盖盖到反应管的管体上。所述包埋液中，封装试剂的浓度具体可为0.1g/100ml，引物的浓度具体可为2μM，探针的浓度具体可为1μM。具体来说，每个反应管的管盖内面滴加2μl所述包埋液。本专利技术还保护一种寨卡病毒检测装置，是通过以上任一所述核酸封装试剂将引物ZIKV-F、引物ZIKV-R和探针ZIKV-P包埋于反应装置内得到的；所述引物ZIKV-F为如下(a1)或(a2)；(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物ZIKV-R为如下(a3)或(a4)；(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述探针ZIKV-P的核苷酸序列为如下(a5)或(a6)；(a5)如序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子。所述探针ZIKV-P，5'末端具有荧光基团FAM，3’末端具有淬灭基团BHQ2。具体来说，所述寨卡病毒检测装置中，用引物ZIKV-F、引物ZIKV-R和探针ZIKV-P包埋于反应装置的盖内侧。所述寨卡病毒检测装置的制备方法具体如下：将所述核酸封装试剂、所述引物、所述探针和水(优选无菌水)混合，得到包埋液；取反应装置，在每个反应管的管盖内面滴加所述包埋液，然后冷冻干燥，然后将反应管的管盖盖到反应管的管体上。所述包埋液中，封装试剂的浓度具体可为0.1g/100ml，引物ZIKV-F的浓度具体可为2μM，引物ZIKV-R的浓度具体可为2μM，探针ZIKV-P的浓度具体可为1μM。具体来说，每个反应管的管盖内面滴加2μl所述包埋液。以上任一所述反应装置具体可为PCR反应管，可为单独的PCR反应管，也可为联排的PCR反应管(例如八连排的PCR反应管)。以上任一所述反应装置也可为其它单独的或联排的具有特定属性的反应管。所述特定属性指的是薄壁、管盖高透光。本专利技术还保护一种检测靶物质的试剂盒，包括以上所述靶物质检测装置。本专利技术还保护一种用于检测寨卡病毒的试剂盒，包括以上所述寨卡病毒检测装置。以上任一所述试剂盒还包括扩增反应液BQ和酶混合液EQ。扩增反应液BQ：溶剂为pH7.8-8.5、50-200mM的Tris-HCl缓冲液；溶质及其浓度如下：1-2mMdNTP(即dATP、dTTP、dCTP和dGTP的浓度均为1-2mM)、2-4mMrNTP(即rATP、rTTP、rCTP和rGTP的浓度均为2-4mM)、40-60mMDTT、40-80mMMgCl2、150-450mMKCl、10％-20％(体积百分含量)DMSO、0.5-1.5M山梨糖醇。酶混合液EQ：溶剂为水；溶质及其浓度如下，AMV逆转录酶0.5-1U/μl、T7RNA聚合酶1.5-5U/μl、核糖核酸酶H0.05-0.5U/μl、焦磷酸酶0.4-0.6U/μl、R本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸封装试剂，包括3‑10质量份琼脂糖、1‑5质量份皂苷和2‑6质量份羟丙基纤维素。

【技术特征摘要】
1.一种核酸封装试剂，包括3-10质量份琼脂糖、1-5质量份皂苷和2-6质量份羟丙基纤维素。2.如权利要求1所述的核酸封装试剂，其特征在于：所述核酸封装试剂由3-10质量份琼脂糖、1-5质量份皂苷和2-6质量份羟丙基纤维素组成。3.如权利要求1所述的核酸封装试剂，其特征在于：所述核酸封装试剂由5质量份琼脂糖、3质量份皂苷和4质量份羟丙基纤维素钠组成。4.权利要求1至3中任一所述的核酸封装试剂的应用，为将核酸包埋于固相表面。5.一种靶物质检测装置，是通过权利要求1至3中任一所述核酸封装试剂将用于检测所述靶物质的引物和探针包埋于反应装置的盖的内侧得到的。6.一种用于检测靶物质的试剂盒，包括权利要求5所述靶物质检测装置。7.一种寨卡病毒检测装置，是通过权利要求1至3中任一所述核酸封装试剂将引物ZIKV-F、引物ZIKV-R和探针ZIKV-P包埋于反应装置的盖的内侧得到的；所述引物ZIKV-F为如下(a1)或(a2)；(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物ZIKV-R为如下(a3)或(a4)；(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相...

【专利技术属性】
技术研发人员：张岩，盖伟，邢婉丽，宋翠丹，程京，
申请(专利权)人：博奥生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11