核酸扩增体系及其冻干保护剂制造技术

本发明专利技术公开了一种核酸扩增体系及其冻干保护剂。核酸扩增体系，包括：缓冲液、酶混合液、核酸扩增反应液，和，低温冻干保护剂。所述缓冲液进一步包括以下组份中的一种或多种：dNTP、Mgcl2、Thris-Hcl、KCl。所述酶混合液进一步包括以下组份中的一种或多种：RNA逆转录酶、RAN抑制剂、DNA聚合酶。所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的制备方法，包括以下步骤：将所述组份按照使用的浓度比混匀，即得到冻干保护剂。本发明专利技术可以冻干的检测RNA/DNA的荧光定量核酸诊断试剂体系，能实现冷冻干燥，只需一步水化就可以实现检测目的，而且能达到现阶段核酸诊断试剂无法达到的常温运输和保存的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学
，特别是涉及一种应用于核酸扩增体系的冻干保护剂。
技术介绍
聚合酶链反应(PCR)技术基于其快速、简便、灵敏、特异等优点，自1989年开始就被应用于医学检测和临床检验，随后很快地成为医学和诊断学的主要检测手段之一。DNA核酸扩增，是一种分子生物学技术，用于放大扩增特定的DNA片段。利用DNA在体外高温时变性会变成单链，低温时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。PCR的特点是：特异性强、灵敏度高、简便快速、纯度要求低，广泛用于各种疾病和肿瘤等的检测。RNA核酸扩增，是将RNA的逆转录体系和DNA扩增体系相结合的技术。能够实现一步对RNA进行检测，不但操作方便，灵敏度也得到了很大的提升，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，已广泛用于涉及到核酸的科学研究以及临床疾病的诊断和治疗监测。核酸分子诊断成为了诊断试剂行业的发展方向，荧光定量核酸诊断试剂是目前市场上最先进的诊断试剂。常规检测的乙肝、丙肝、艾滋、也可用于医院、疾控等临床样本中对各种各样的细菌、病毒感染等疾病的检测。而且相对于传统的培养、镜检、免疫学方法等来说，核酸诊断具有其他方法无法替代的灵敏和及时等优点。核酸诊断被广泛应用于各种病原体的检测上，但是核酸扩增反应试剂在常温下保存不稳定，几周就失效了；在2～8℃条件下保存，保存期也只有三个月左右；-20℃条件下的保存期虽然可以达到一年之久，但是每次使用必须要反复冻融，这对试剂的活性也有很大的影响，并且各组分不能混合一起，用时需混合，操作麻烦等缺点，试剂盒的长期保存和长途运输将会受到很大的限制，容易因诊断试剂保存温度不当而使其敏感性下降甚至完全失效，最终导致疫病的检测不及时而造成疫病流行。目前，市场上核酸扩增反应试剂缺少能在4℃或室温长期保存的方法，这也限制了核酸诊断试剂产品的市场。。核酸技术作为一种新生的高新技术，代表临床实验诊断学发展的又一里程碑，十多年的临床实践表明，荧光定量核酸诊断技术已在医学基础检测和临床诊断中占据主导地位，因此开发适用于荧光定量核酸试剂常温保存的相关技术已迫在眉睫。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于：提供了一种应用于核酸扩增体系的冻干保护剂。本专利技术冻干保护剂为应用于荧光定量核酸诊断试剂的冻干技术提供了一种有效的、可以实现的冻干体系。诊断试剂通过冷冻干燥的技术，液体试剂变成冻干粉，以冻干粉的形式能更稳定的保存，达到现阶段核酸诊断试剂无法达到的常温运输和常温保存的目的，也减少了试剂反复冻融。检测时只需一步水化再加入样本即可以实现检测目的，操作简单。为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种核酸扩增体系，包括：缓冲液、酶混合液、核酸扩增反应液，和，低温冻干保护剂。所述缓冲液进一步包括以下组份中的一种或多种：dNTP、Mgcl2、Thris-Hcl、KCl。所述酶混合液进一步包括以下组份中的一种或多种：RNA逆转录酶、RAN抑制剂、DNA聚合酶。所述核酸扩增反应液进一步包括以下组份中的一种或多种：上游引物、下游引物、探针。所述冻干保护剂，包括：海藻糖。所述冻干保护剂中海藻糖使用的终浓度为1～10mmol/L。所述冻干保护剂中海藻糖使用的终浓度为1.2～5mmol/L。所述冻干保护剂中海藻糖使用的终浓度为1.5～2.5mmol/L。所述冻干保护剂进一步包括以下糖类/多元醇中的一种或多种：蔗糖、甘油醛、阿拉伯糖、来苏糖、戊糖、核糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、己糖、甘露糖、塔罗糖、庚糖、葡萄糖、果糖、葡糖酸、山梨醇、乳糖、甲基α吡喃糖苷、麦芽糖、异抗坏血酸、抗坏血酸、内酯、山梨糖、葡糖二酸、赤藓糖、苏糖、阿拉伯糖、阿洛糖、阿卓糖、蔗糖、古罗糖、艾杜糖、塔罗糖、赤藓酮糖、核酮糖、阿洛酮糖、塔格糖、右旋糖酐40。所述冻干保护剂进一步包括以下聚合物中的一种或多种：HES(羟乙基磺酸)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、PEG(聚乙二醇)、葡聚糖、白蛋白、聚维酮K24。所述冻干保护剂进一步包括以下溶剂中的一种或多种：乙烯乙二醇、甘油、DMSO(二甲基亚砜)、DMF(二甲基甲酰胺)。所述冻干保护剂进一步包括表面活性剂。所述表面活性剂为Tween80。所述冻干保护剂进一步包括氨基酸类化合物。所述冻干保护剂进一步包括以下盐类中的一种或多种：磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐。所述核酸扩增体系的冻干保护剂不包括甘露醇。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了一种应用于核酸扩增体系的冻干保护剂，其特征在于，包括：海藻糖。所述冻干保护剂中海藻糖使用的终浓度为1～10mmol/L。所述冻干保护剂中海藻糖使用的终浓度为1.2～5mmol/L。所述冻干保护剂中海藻糖使用的终浓度为1.5～2.5mmol/L。所述冻干保护剂，进一步包括以下糖类/多元醇中的一种或多种：蔗糖、甘油醛、阿拉伯糖、来苏糖、戊糖、核糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、己糖、甘露糖、塔罗糖、庚糖、葡萄糖、果糖、葡糖酸、山梨醇、乳糖、甲基α吡喃糖苷、麦芽糖、异抗坏血酸、抗坏血酸、内酯、山梨糖、葡糖二酸、赤藓糖、苏糖、阿拉伯糖、阿洛糖、阿卓糖、蔗糖、古罗糖、艾杜糖、塔罗糖、赤藓酮糖、核酮糖、阿洛酮糖、塔格糖、右旋糖酐40。所述冻干保护剂，进一步包括以下聚合物中的一种或多种：HES(羟乙基磺酸)、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、PEG(聚乙二醇)、葡聚糖、白蛋白、聚维酮K24。所述冻干保护剂，进一步包括以下溶剂中的一种或多种：乙烯乙二醇、甘油、DMSO(二甲基亚砜)、DMF(二甲基甲酰胺)。进一步包括表面活性剂。所述表面活性剂为Tween80。进一步包括氨基酸类化合物。进一步包括以下盐类中的一种或多种：磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐。所述核酸扩增体系的冻干保护剂不包括甘露醇。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了一种如前述任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述组份按照使用的浓度比混匀，即得到冻干保护剂。为解决上述技术问题，本专利技术又提供了一种如前述任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的制备方法，包括以下步骤：步骤1：将所述组份按照使用的浓度比混匀；步骤2：冷冻干燥，即得到冻干保护剂。...

【技术保护点】
一种核酸扩增体系，其特征在于，包括：缓冲液、酶混合液、核酸扩增反应液，和，低温冻干保护剂。

【技术特征摘要】
1.一种核酸扩增体系，其特征在于，包括：缓冲液、酶混合液、核酸扩
增反应液，和，低温冻干保护剂。
2.根据权利要求1所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述缓冲液进一
步包括以下组份中的一种或多种：脱氧核糖核苷三磷酸、氯化镁、Tris–盐酸
缓冲液、氯化钾。
3.根据权利要求1所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述酶混合液进
一步包括以下组份中的一种或多种：RNA逆转录酶、RAN抑制剂、DNA聚
合酶。
4.根据权利要求1所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述核酸扩增反
应液进一步包括以下组份中的一种或多种：上游引物、下游引物、探针。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述
冻干保护剂，包括：海藻糖。
6.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述
冻干保护剂中海藻糖使用的终浓度为1～10mmol/L。
7.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述
冻干保护剂中海藻糖使用的终浓度为1.2～5mmol/L。
8.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述
冻干保护剂中海藻糖使用的终浓度为1.5～2.5mmol/L。
9.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述
冻干保护剂进一步包括以下糖类/多元醇中的一种或多种：蔗糖、甘油醛、阿
拉伯糖、来苏糖、戊糖、核糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、己糖、甘露糖、塔
罗糖、庚糖、葡萄糖、果糖、葡糖酸、山梨醇、乳糖、甲基α吡喃糖苷、麦
芽糖、异抗坏血酸、抗坏血酸、内酯、山梨糖、葡糖二酸、赤藓糖、苏糖、
阿拉伯糖、阿洛糖、阿卓糖、蔗糖、古罗糖、艾杜糖、塔罗糖、赤藓酮糖、
核酮糖、阿洛酮糖、塔格糖、右旋糖酐40。
10.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所
述冻干保护剂进一步包括以下聚合物中的一种或多种：羟乙基磺酸、聚乙烯
吡咯烷酮、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白、聚维酮K24。
11.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所

\t述冻干保护剂进一步包括以下溶剂中的一种或多种：乙烯乙二醇、甘油、二
甲基亚砜、二甲基甲酰胺。
12.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所
述冻干保护剂进一步包括表面活性剂。
13.根据权利要求12所述冻干保护剂，其特征在于，所述表面活性剂为
Tween80。
14.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所
述冻干保护剂进一步包括氨基酸类化合物。
15.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所
述冻干保护剂进一步包括以下盐类中的一种或多种：磷酸盐、醋酸盐、柠檬
酸盐。
16.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所
述核酸扩增体系的冻干保护剂不包括甘露醇。
17.一种应用于核酸扩增体系的冻干保护剂，其特征在于，包括：海藻
糖。
18.根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中
海藻糖使用的终浓度为1～10mmol/L。
19.根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中
海藻糖使用的终浓度为1.2～5mmol/L。
20.根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中
海藻糖使用的终浓度为1.5～2.5mmol/L。
21.根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，进一步包括以下糖
类/多元醇中的一种或多种：蔗糖、甘油醛、阿拉伯糖、来苏糖、戊糖、核糖、
木糖、半乳糖、葡萄糖、己糖、甘露糖、塔罗糖、庚糖、葡萄糖、果糖、葡
糖酸、山梨醇、乳糖、甲基α吡喃糖苷、麦芽糖、异抗坏血酸、抗坏血酸、
内酯、山梨糖、葡糖二酸、赤藓糖、苏糖、阿拉伯糖、阿洛糖、阿卓糖、蔗
糖、古罗糖、艾杜糖、塔罗糖、赤藓酮糖、核酮糖、阿洛酮糖、塔格糖、右
旋糖酐40。
22.根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，进一步包括以下聚
合物中的一种或多...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴凯，李丹，程亮，张琳，王宝中，
申请(专利权)人：江苏正大天创生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32