【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种菜豆荚斑驳病毒ELISA-巢式RT-PCR检测试剂盒及其检测方法，属于植物检疫
，适用于进出境及农业生产上菜豆荚斑驳病毒的快速检测鉴定。
技术介绍
菜豆荚斑驳病毒（Bean pod mottle virus，BPMV）属于豇豆花叶病毒科（Comoviridae）、豇豆花叶病毒属（Comovirus）成员，是危害大豆的主要种传病毒之一，侵染大豆造成的产量损失严重，侵染时间越早，造成的损失越大，与大豆花叶病毒（Soybean Mosaic Virus，SMV）复合侵染时引起的大豆产量损失超过85%。此外，受BPMV侵染的大豆，容易受到拟茎点霉属（Phomopsis）真菌的危害，导致大豆种子品质进一步降低。目前，该病毒主要发生于美国，在加拿大、巴西、秘鲁等国家也有发生的报道，但在我国至今尚无分布的报道。大豆是我国重要的传统农作物，在我国农业经济中具有十分重要的战略地位。作为豆科植物，大豆在栽培过程中极易受到病毒的侵染，造成产量和品质不同程度的降低。考虑到BPMV的危害性，该病毒已被列入我国禁止进境植物检疫性病毒名录。为避免BPMV传入，保护我国...
【技术保护点】
菜豆荚斑驳病毒ELISA‑巢式RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：1）PBST缓冲液：1×；2）包被缓冲液：1×；3）BPMV抗体；4）酶标抗体缓冲液：1×；5）BPMV酶标抗体；6）pNPP；7）外侧正向引物：10μmol/L，引物序列为5’‑GGCCTGTGCTATGAATAGT‑3’；8）反向引物：10μmol/L，引物序列为5’‑CCCATCCACCTATTTAACAC‑3’；9）内侧正向引物：10μmol/L，引物序列为5’‑GCCAGTTCTGATATTTACACC‑3’；10）RT Buffer：5×；11）RNA酶抑制因子：40U/μL；12...
【技术特征摘要】
1.菜豆荚斑驳病毒ELISA-巢式RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：1）PBST缓冲液：1×；2）包被缓冲液：1×；3）BPMV抗体；4）酶标抗体缓冲液：1×；5）BPMV酶标抗体；6）pNPP；7）外侧正向引物：10μmol/L，引物序列为5’-GGCCTGTGCTATGAATAGT-3’；8）反向引物：10μmol/L，引物序列为5’-CCCATCCACCTATTTAACAC-3’；9）内侧正向引物：10μmol/L，引物序列为5’-GCCAGTTCTGATATTTACACC-3’；10）RT Buffer：5×；11）RNA酶抑制因子：40U/μL；12）反转录酶：200U/μL；13）dNTPs：10mmol/L；14）Taq PCR Mix：2×；15）菜豆荚斑驳病毒的阳性对照样品；16）不含菜豆荚斑驳病毒的阴性对照样品；17）RNase-free ddH2O。2.利用权利要求1所述的菜豆荚斑驳病毒ELISA-巢式RT-PCR检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：1）ELISA检测：将BPMV抗体用包被缓冲液稀释200倍后在酶标板中每孔加入100μL，37℃水浴2h；倒尽酶标板中的液体，用PBST缓冲液洗酶标板3次，每次3min；将BPMV酶标抗体用酶标抗体缓冲液稀释200倍后与样品提取液等体积混合得到混合液，然后在酶标板中每孔加入200μL混合液，4°C下包被过夜，同时设置阳性对照组、阴性对照组；倒尽酶标板中的液体，用PBST缓冲液洗酶标板3次，每次3min；在酶标板中每孔加入100μL新鲜配制的浓度为1mg/mL的pNPP溶液，避光显色15-30min，用酶联仪测定405nm下的OD值；2）反转录反应：倒尽酶标板中的液体，用PBST缓冲液和...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈建国，廖富荣，蔡伟，高芳銮，
申请(专利权)人：福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：福建;35
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