The invention provides a double PCR detection method for detecting beehive bee coccus and bee larvae Bacillus, which is used for detecting bee bee coccus and bee larvae Bacillus in bee and bee products. The method has high specificity for the detection of beehive coccus and bee larvae Bacillus, no cross-reaction between them and other bee pathogenic bacteria, and good repeatability; the sensitivity of detection of both pathogenic bacteria can reach about 1 pg/mu L; the whole operation does not require expensive instruments and reagents, and one operation can simultaneously detect two pathogens, all reacting in 2 hours. Completed internally. The invention provides a new technical means for rapid detection of Apis cerevisiae and Bacillus cerevisiae larvae in bees and bee products, and has important practical significance and practical application value for protecting the health and safety of domestic bee colonies and promoting the healthy development of international trade in bee products.
【技术实现步骤摘要】
一种检测蜂房蜜蜂球菌和蜜蜂幼虫芽孢杆菌的双重PCR检测方法
本专利技术涉及一种检测蜂房蜜蜂球菌和蜜蜂幼虫芽孢杆菌的双重PCR检测方法,属于生物
,适用于蜜蜂及蜂产品中蜂房蜜蜂球菌和蜜蜂幼虫芽孢杆菌检测。
技术介绍
蜜蜂美洲幼虫腐臭病(Americanfoulbrood,AFB)和欧洲幼虫腐臭病(Europeanfoulbrood,EFB)是两种能引起蜜蜂幼虫死亡的细菌性、急性、毁灭性传染病,能导致蜜蜂幼虫的大批死亡,最终导致整个蜂群的灭亡,危害巨大。农业部和质检总局联合制定的最新的《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》将二者列为二类传染病。世界动物卫生组织(OIE)也将其列入检疫名录,列为进出口蜜蜂及蜂产品检疫对象。美洲幼虫腐臭病是目前危害蜜蜂幼虫生长的最主要细菌病之一,轻者降低蜂群繁殖和采集力,重者导致蜂群的覆灭。该病传播迅速、为害严重,发生后就很难治愈,难以根除,而且经常复发,尤其是1日龄的蜜蜂幼虫对幼虫芽孢杆菌非常敏感,一旦感染很快就会死亡。欧洲幼虫腐臭病是一种蜜蜂幼虫的恶性传染病,传播快、危害大,可引起幼虫大批死亡。患病蜂群不能正常采蜜和繁殖,蜂群减弱甚至覆没。通过流行病学调查,目前没有发现哪一种蜜蜂对欧洲幼虫腐臭病有抵抗力,东方蜜蜂比西方蜜蜂更易感染,尤其中蜂发病更为严重。美洲幼虫腐臭病的病原体为蜜蜂幼虫芽孢杆菌(PaenibacillusLarvae,PL),是一种芽孢形式的革兰氏阳性细菌。产生的芽孢有7层结构包围,这种特殊构造使得幼虫芽孢杆菌的芽孢具有特别强的生命力,对热、化学物质等有极强的抵抗力,在高温干燥等恶劣环境下至少能存活35年 ...
【技术保护点】
1.一种检测蜂房蜜蜂球菌和蜜蜂幼虫芽孢杆菌的双重PCR引物,其特征在于:包括用于扩增蜂房蜜蜂球菌特异片段的上游引物MP‑F、下游引物MP‑R和扩增蜜蜂幼虫芽孢杆菌特异片段的上游引物PL‑F、下游引物PL‑R,各引物核苷酸序列如下:上游引物MP‑F:5’‑ AGAAGAGTGGCGGACGGGTGA ‑3’;下游引物MP‑R:5’‑ ACCGTCACGAGGAAAACAGTTACTC ‑3’;上游引物PL‑F:5’‑ GCCAAGGAAGAACGGCCAGGG ‑3’;下游引物PL‑R:5’‑ CCACCTCTGCGTGCTGGCAA ‑3’。
【技术特征摘要】
1.一种检测蜂房蜜蜂球菌和蜜蜂幼虫芽孢杆菌的双重PCR引物,其特征在于:包括用于扩增蜂房蜜蜂球菌特异片段的上游引物MP-F、下游引物MP-R和扩增蜜蜂幼虫芽孢杆菌特异片段的上游引物PL-F、下游引物PL-R,各引物核苷酸序列如下:上游引物MP-F:5’-AGAAGAGTGGCGGACGGGTGA-3’;下游引物MP-R:5’-ACCGTCACGAGGAAAACAGTTACTC-3’;上游引物PL-F:5’-GCCAAGGAAGAACGGCCAGGG-3’;下游引物PL-R:5’-CCACCTCTGCGTGCTGGCAA-3’。2.一种检测蜂房蜜蜂球菌和蜜蜂幼虫芽孢杆菌的双重PCR检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)双重PCR反应体系配置:2×PCRMasterMix12.5μL,10μmol/L权利要求1所述的上下游引物MP-F和MP-R各0.5μL,10μ...
【专利技术属性】
技术研发人员:黄嫦娇,张体银,邵碧英,陈彬,
申请(专利权)人:福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心,
类型:发明
国别省市:福建,35
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