一种蜜蜂以色列急性麻痹病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及一种蜜蜂以色列急性麻痹病毒实时荧光RT‑PCR检测试剂盒及其检测方法，专用于蜜蜂以色列急性麻痹病毒的检测。该试剂盒包括：（1）RT‑PCR反应液；（2）Taq DNA聚合酶；（3）反转录酶；（4）阳性标准品；（5）阴性对照；（6）无菌水。本发明专利技术具有以下优点：（1）良好的稳定性和特异性：对蜜蜂以色列急性麻痹病毒的检测具有高度特异性，与其它蜜蜂病毒无交叉反应，且重复性好；（2）灵敏度高：灵敏度能达到10拷贝/μL；（3）操作简便、快速：整个反应可在2小时内完成。本发明专利技术试剂盒可用于蜜蜂以色列急性麻痹病毒的检测及其与其他蜜蜂病毒病的鉴别诊断，对该病的早期预防和及时治疗具有重要意义。

A Real-time Fluorescent RT-PCR Kit for Detecting Apis mellifera Acute Paralysis Virus and Its Detection Method

The invention relates to a real-time fluorescent RT_PCR detection kit for bee acute paralysis virus and a detection method thereof, which is specially used for the detection of bee acute paralysis virus in Israel. The kit includes: (1) RT PCR reaction solution; (2) Taq DNA polymerase; (3) reverse transcriptase; (4) positive standard; (5) negative control; (6) sterile water. The invention has the following advantages: (1) good stability and specificity: the detection of bee acute paralysis virus has high specificity, no cross reaction with other bee viruses, and good repeatability; (2) high sensitivity: sensitivity can reach 10 copies/mu L; (3) simple and fast operation: the whole reaction can be completed in 2 hours. The kit can be used for the detection of bee Israel acute paralysis virus and the differential diagnosis with other bee virus diseases, and has important significance for the early prevention and timely treatment of the disease.

【技术实现步骤摘要】
一种蜜蜂以色列急性麻痹病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及一种蜜蜂以色列急性麻痹病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒及其检测方法，属于动物卫生
，适用于蜜蜂以色列急性麻痹病毒的检测及其与其他蜜蜂病毒病的鉴别诊断。
技术介绍
以色列急性麻痹病毒(Israeliacuteparalysisvirus，IAPV)是2004年以色列希伯来大学的IlanSela等人发现一种新的病毒，该病毒是正义单链RNA病毒，一个无被膜的二十面体蛋白外壳，归属仿小核糖核酸病毒目(picorna-likevirus)双顺反子病毒科（Dicistroviridae）成员。IAPV可侵染各个发育时期的蜜蜂个体(卵、幼虫、蛹、成蜂)和蜂群各级型蜜蜂（工蜂、雄蜂和蜂王），患病蜜蜂体色变暗，绒毛脱落，伴随翅震颤，逐渐麻痹死亡，会造成蜜蜂的大量损失，对蜜蜂养殖业危害大。IAPV分布广泛，欧洲、南美洲以及亚洲等多个国家都有相关报道。目前，有科学家研究分析，IAPV很可能是导致蜂群崩溃失调病(Colonycollapsedisorder，CCD)主要致病因素之一，会引起蜜蜂的大量消失，蜜蜂损失数量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蜜蜂以色列急性麻痹病毒实时荧光RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于：包括正向引物IAPV‑F、反向引物IAPV‑R及TaqMan探针IAPV‑P，各引物核苷酸序列如下：正向引物IAPV‑F：5’‑ACTAGTGGACGAAGCGAGTT‑3’；反向引物IAPV‑R：5’‑TGTACTGGGCAGTTACAGCA‑3’；TaqMan探针IAPV‑P：5’‑CGGAACGCCGCATGTGTTACCA‑3’，探针的 5’端和3’端分别采用荧光基团FAM和BHQ1进行修饰。

【技术特征摘要】
1.一种蜜蜂以色列急性麻痹病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：包括正向引物IAPV-F、反向引物IAPV-R及TaqMan探针IAPV-P，各引物核苷酸序列如下：正向引物IAPV-F：5’-ACTAGTGGACGAAGCGAGTT-3’；反向引物IAPV-R：5’-TGTACTGGGCAGTTACAGCA-3’；TaqMan探针IAPV-P：5’-CGGAACGCCGCATGTGTTACCA-3’，探针的5’端和3’端分别采用荧光基团FAM和BHQ1进行修饰。2.根据权利要求1所述的一种蜜蜂以色列急性麻痹病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括由下列试剂：（1）RT-PCR反应液：50个反应体系的RT-PCR反应液组成成分为：5×OneStepRNAPCRBuffer250μL，浓度为10μmol/L的正向引物IAPV-F和反向引物IAPV-R各25μL，浓度为5μmol/L的TaqMan探针IAPV-P50μL，浓度为10mmol/L的dNTP25μL，浓度为25mmol/L的MgCl2100μL，浓度为40U/μL的RNaseInhibitor25μL，共计500μL；-20℃保存；（2）TaqDNA聚合酶：25μL浓度为5U/μLTaqDNA聚合酶1支，-20℃保存；（3）反转录酶：25μL浓度为5U/μL反转录酶1支，-20℃保存；（4）阳性标准品：100μL浓...

【专利技术属性】
技术研发人员：张体银，李丹丹，郑腾，张志灯，王武军，邵碧英，于师宇，
申请(专利权)人：福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：福建,35