一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物及其检测方法技术

一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物及其检测方法，涉及一种检测病毒引物及其检测方法，检测辣椒脉斑驳病毒所用到的PCR引物具体为：上游引物：ChiVMV‑CP‑F：如SEQ ID NO.1 所示，即，5’‑ GCACCATACATTTCAGAAACAGC‑3’，下游引物：ChiVMV‑CP‑R：如SEQ ID NO.2 所示，即，5’‑ GAACCACACTGAAGAATATGRATG‑3’。本发明专利技术所提供的PCR引物对ChiVMV的检出具有通用性，不仅能检测出龙葵样品中的ChiVMV，还可以检测到番茄样品中的ChiVMV。在检测过程中利用RT‑PCR手段，具有灵敏性高、操作简便等特点。实验表明，利用本发明专利技术检测龙葵和番茄上的辣椒脉斑驳病毒（ChiVMV），有较高的特异性。

【技术实现步骤摘要】
一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物及其检测方法
本专利技术涉及一种检测病毒引物及其检测方法，特别是涉及一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物及其检测方法。
技术介绍
辣椒脉斑驳病毒（Chilliveinalmottlevirus,ChiVMV），是Potyvirus的确定种，长约900nm，基因组为单链正义RNA，5’-端具有一个共价结合基因组连接蛋白(viralproteingenome-linked,VPg)，3’-端为20-160nt个腺苷酸组成的Poly(A)尾巴。基因组编码一个350kDa的多聚蛋白(Polyprotein)，随后切割成解旋酶、复制酶和衣壳蛋白等8~10个蛋白参与病毒的复制、运动和包装。ChiVMV的传播主要通过虫媒的形式以非持久性进行传播。ChiVMV在亚洲危害严重，给越南、泰国、印度、巴基斯坦、韩国和中国的辣椒产业带来重创。在我国，ChiVMV在海南岛和台湾多地的辣椒和番茄上危害。ChiVMV侵染初期会诱导寄主植物表现为叶脉产生深色条纹、叶肉组织皱缩或叶面畸形等症状。后期则产生落花落果、果实畸形等症状。给我国辣椒和番茄的生产造成了重大的经济损失。病毒病害的快速检测为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物，其特征在于，所述一种检测辣椒脉斑驳病毒所用到的PCR引物具体为：上游引物：ChiVMV‑CP‑F：如SEQ ID NO.1 所示，即，5’‑ GCACCATACATTTCAGAAACAGC‑3’，下游引物：ChiVMV‑CP‑R：如SEQ ID NO.2 所示，即，5’‑ GAACCACACTGAAGAATATGRATG‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物，其特征在于，所述一种检测辣椒脉斑驳病毒所用到的PCR引物具体为：上游引物：ChiVMV-CP-F：如SEQIDNO.1所示，即，5’-GCACCATACATTTCAGAAACAGC-3’，下游引物：ChiVMV-CP-R：如SEQIDNO.2所示，即，5’-GAACCACACTGAAGAATATGRATG-3’。2.一种检测辣椒脉斑驳病毒方法，其特征在于，所述方法包括以下制备过程：检测辣椒脉斑驳病毒所用引物在判定辣椒脉斑驳病毒中的应用，用于检测确定龙葵和番茄样品是否受到辣椒脉斑驳病毒（ChiVMV）的侵染；包括如下步骤：（1）提取待检测龙葵和番茄样品的总RNA，备用；提取方法如下：采用TRIzol法对植物病叶的总RNA进行提取，实验步骤按照说明书进行：称量花叶重症样品，于液态氮气中研磨至完全粉碎，转移Eppendorf管中；立即加入TRIzol，室温放置以裂解细胞；离心15min；取上清液，加入等体积三氯甲烷混合旋涡振荡，室温下静置；离心15min；取上清液，加入体积异丙醇，混合均匀冷藏；离心15min；弃上清，用无水乙醇洗涤沉淀；离心15min；弃上清，室温干燥，加入RNase-freeH2O溶解，冰上备用，-80℃冻存；（2）依据TIANgelMidiPurificationKit（天根生化科技（北京）有限公司）cDNA第一条链合成试剂盒进行反转录；以该cDNA为模板进行PCR扩增；混合均匀，42℃温浴，反应结束后于95℃下温浴以终止反应，待温度降至室温后加入RNase-FreeddH2O稀释...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨彩霞，高芳銮，付晶晶，韩彤，廖一鸣，李梁，侯秋实，石长玉，
申请(专利权)人：沈阳大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21