结合EGFRVIII和CD3的双特异性抗体构建体制造技术

本发明专利技术涉及一种双特异性抗体构建体，其包含结合靶细胞表面上的人EGFRVIII的第一结合结构域和结合T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域。此外，本发明专利技术提供编码所述抗体构建体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体以及经所述多核苷酸或载体转化或转染的宿主细胞。另外，本发明专利技术提供了一种生产本发明专利技术的抗体构建体的方法、所述抗体构建体的医疗用途以及包含所述抗体构建体的试剂盒。

Constructs with bispecific antibody EGFRVIII and CD3

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合EGFRVIII和CD3的双特异性抗体构建体本专利技术涉及一种双特异性抗体构建体，其包含结合靶细胞表面上的人EGFRVIII的第一结合结构域和结合T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域。此外，本专利技术提供编码所述抗体构建体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体以及由所述多核苷酸或载体转化或转染的宿主细胞。另外，本专利技术提供了一种生产本专利技术的抗体构建体的方法、所述抗体构建体的医疗用途以及包含所述抗体构建体的试剂盒。EGFRvIII是由伴随EGFR基因扩增的基因重排引起的几种EGFR变体之一。EGFRvIII由EGFR的胞外结构域中267个氨基酸的框内缺失组成。EGFRvIII是人癌症中表皮生长因子(EGF)受体的最常见变体。在基因扩增的过程中，胞外结构域发生267个氨基酸的缺失，形成可以作为单克隆抗体的肿瘤特异性新表位新接合点。EGF受体的这种变体以独立于配体的方式通过组成型信号传导来促进肿瘤进展。还未发现EGFRvIII在任何正常组织上的表达。EGFRvIII表达的优异肿瘤选择性使得EGFRvIII成为用BiTE抗体构建体靶向的理想抗原。EGFRvIII对肿瘤进展的贡献表明癌细胞对EGFRvIII表达的依赖性，并且因此进一步支持其适合作为靶标。已经显示EGFRvIII经常在两种类型的恶性中枢神经系统肿瘤(即多形性胶质母细胞瘤和间变性星形细胞瘤)中表达。对于这两种疾病，都存在未被满足的重要医疗需求。这点可以由护理标准下的恶劣总生存率例证，其中多形性胶质母细胞瘤的2年期总生存率为13.6％，而间变性星形细胞瘤的5年期总生存率为25.9％。目前，多形性胶质母细胞瘤的护理标准由肿瘤的手术切除组成，其最常受制于肿瘤的弥漫生长模式以及需要保留大脑的功能性重要区域。手术后接着进行辅助照射和化疗。对于根据目前的护理标准治疗的多形性胶质母细胞瘤和间变性星形细胞瘤，复发是常态，并且几乎在所有患者中最终都是致命的结果。EGFRvIII在多形性胶质母细胞瘤和间变性星形细胞瘤中的表达组成性激活PI3激酶信号传导途径，并且与多形性胶质母细胞瘤和间变性星形细胞瘤中的恶化预后相关。还已经描述了EGFRvIII与CD133共表达并且限定多形性胶质母细胞瘤中的癌症干细胞群(Emlet等人，CancerRes，2014，74(4)：1238-49)。此外，已经证实，通过细胞间抗原转移的机制，EGFRvIII可以转移到抗原阴性肿瘤细胞的细胞表面。通过这种机制，EGFRvIII的表达异质性(其已在一些多形性胶质母细胞瘤中显示)可以作为治疗功效的障碍被克服，特别是在使用EGFRvIII特异性BiTE抗体构建体的情况下，从而提供针对由细胞间抗原转移造成的潜在低水平靶抗原的作用补偿的高效细胞毒性模式。EGFRvIII表达在其它几种肿瘤实体中也有描述(Wikstrand，CJ.等人，CancerResearch55(14)：3140-3148(1995)；GeH.等人，IntJCancer.98(3)：357-61(2002)；Moscatello，G.等人，CancerRes.55(23)：5536-9(1995)；GarciadePalazzo，IE.等人，CancerRes.53(14)：3217-20(1993)；Olapade-Olaopa，EO.等人，BrJCancer.82(1)：186-94(2000))。因此，鉴于EGFRvIII的精确的肿瘤选择性，用EGFRvIII特异性BiTE抗体构建体治疗也可能对其它选择的癌症类型或亚型有益。潜在地选择待治疗的癌症类型、亚型或患者可以通过测试EGFRvIII在肿瘤中的表达的各种方法来指导。由于仍然需要更多的可用于治疗与EGFRVIII过表达有关的实体瘤疾病(例如胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌、中枢神经系统癌)的选项，本文提供了通过双特异性抗体构建体来解决此问题的手段和方法，所述双特异性抗体构建体具有针对肿瘤靶细胞表面上的EGFRVIII的结合结构域和针对T细胞表面上的CD3的第二结合结构域。因此，在第一方面，本专利技术提供一种双特异性抗体构建体，其包含结合靶细胞表面上的人和猕猴EGFRVIII的第一结合结构域和结合T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域，其中所述第一结合结构域包含如SEQIDNO：157中所示的多肽和如SEQIDNO：158中所示的多肽。必须注意的是，除非上下文另外明确说明，否则如本文中所用，单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该/所述(the)”包括复数形式。因此，例如，提及“一种试剂”包括一种或多种此类不同的试剂，并且提及“该方法”包括提及本领域普通技术人员已知的可以被修改或替代本文所述的方法的等效步骤和方法。除非另外指明，否则用在一系列要素之前的术语“至少”应被理解为指的是该系列中的每个要素。本领域技术人员仅利用常规实验就将认识到或能够确定本文所描述的本专利技术的具体实施方案的许多等效物。这些等效物旨在涵盖于本专利技术中。无论在本文中何处使用，术语“和/或”包括“和”、“或”和“由所述术语连接的要素的全部或任何其它组合”的含义。如本文中所用，术语“约”或“近似”意指在给定值或范围的±20％以内，优选在±15％以内，更优选在±10％以内，并且最优选在±5％以内。在整篇说明书和随附权利要求书中，除非上下文另外要求，否则词语“包含(comprise)”和其变型如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”将被理解为暗示包括陈述的整数或步骤或整数或步骤的组，但不排除任何其它整数或步骤或整数或步骤的组。当在本文中使用时，术语“包含”可以用术语“含有”或“包括”代替，或者有时当在本文中使用时，可以用术语“具有”代替。当在本文中使用时，“由......组成”不包括未在所要求的要素中指定的任何要素、步骤或成分。当在本文中使用时，“基本上由......组成”不排除不实质上影响该要求的基本和新颖特征的材料或步骤。在本文中的每种情况下，术语“包含”、“基本上由......组成”和“由......组成”中的任一个可以用另外两个术语中的任一个来代替。术语“抗体构建体”是指其中结构和/或功能基于例如全长或完整免疫球蛋白分子的抗体的结构和/或功能的分子。因此，抗体构建体能够结合其特定靶标或抗原。此外，根据本专利技术的抗体构建体包含允许靶结合的抗体最低结构要求。该最低要求可以例如被限定为存在至少三个轻链CDR(即VL区的CDR1、CDR2和CDR3)和/或三个重链CDR(即VH区的CDR1、CDR2和CDR3)，优选存在所有6个CDR。本专利技术构建体所基于的抗体包括例如单克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、去免疫化抗体、人源化抗体和人抗体。全长或完整抗体涵盖于根据本专利技术的“抗体构建体”的定义内，其还包括通过生物技术或蛋白质工程方法或处理产生的骆驼抗体和其它免疫球蛋白抗体。这些全长抗体可以是例如单克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、去免疫化抗体、人源化抗体和人抗体。同样在“抗体构建体”的定义内的是全长抗体的片段，如VH、VHH、VL、(s)dAb、Fv、Fd、Fab、Fab′、F(ab′)2或“rIgG”(“半抗体”)。根据本专利技术的抗体构建体还可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双特异性抗体构建体，其包含结合靶细胞表面上的人和猕猴EGFRVIII的第一结合结构域和结合T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域，其中所述第一结合结构域包含如SEQ ID NO：157中所示的多肽和如SEQ ID NO：158中所示的多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.31 US 62/199,945;2016.02.03 US 62/290,8611.一种双特异性抗体构建体，其包含结合靶细胞表面上的人和猕猴EGFRVIII的第一结合结构域和结合T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域，其中所述第一结合结构域包含如SEQIDNO：157中所示的多肽和如SEQIDNO：158中所示的多肽。2.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述抗体构建体是选自由以下组成的组的形式：(scFv)2、scFv-单结构域mAb、双抗体和任何这些形式的寡聚体。3.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体构建体，其中所述第二结合结构域与人CD3ε结合并且与普通狨、绒顶柽柳猴或松鼠猴CD3ε结合。4.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体构建体，所述抗体构建体包含：(a)多肽，其从N端开始按以下顺序包含：·具有SEQIDNO：159的氨基酸序列的多肽；·具有选自由SEQIDNO：1-9组成的组的氨基酸序列的肽接头；和·具有选自由SEQIDNO：19、SEQIDNO：28、SEQIDNO：37、SEQIDNO：46、SEQIDNO：55、SEQIDNO：64、SEQIDNO：73、SEQIDNO：82、SEQIDNO：91、SEQIDNO：100和SEQIDNO：103组成的组的氨基酸序列的多肽；以及·任选的His标签，如SEQIDNO10中所示的His标签；(b)多肽，其从N端开始按以下顺序包含：·具有SEQIDNO：159的氨基酸序列的多肽；·具有选自由SEQIDNO：1-9组成的组的氨基酸序列的肽接头；·具有选自由SEQIDNO：19、SEQIDNO：28、SEQIDNO：37、SEQIDNO：46、SEQIDNO：55、SEQIDNO：64、SEQIDNO：73、SEQIDNO：82、SEQIDNO：91、SEQIDNO：100和SEQIDNO：103组成的组的氨基酸序列的多肽；·具有选自由SEQIDNO：1-9组成的组的氨基酸序列的任选肽接头；·具有选自由SEQIDNO：104-134组成的组的氨基酸序列的多肽；和·任选的His标签，如SEQIDNO10中所示的His标签；(c)多肽，其从N端开始按以下顺序包含：·具有氨基酸序列QRFVTGHFGGLX1PANG(SEQIDNO：135)的多肽，其中X1是Y或H；和·具有SEQIDNO：159的氨基酸序列的多肽；·具有选自由SEQIDNO：1-9组成的组的氨基酸序列的肽接头；·具有选自由SEQIDNO：19、SEQIDNO：28、SEQIDNO：37、SEQIDNO：46、SEQIDNO：55、SEQIDNO：64、SEQIDNO：73、SEQIDNO：82、SEQIDNO：91、SEQIDNO：100和SEQIDNO：103组成的组的氨基酸序列的多肽；·具有氨基酸序列QRFVTGHFGGLHPANG(SEQIDNO：137)或QRFCTGHFGGLHPCNG(SEQIDNO：139)的多肽；以及·任选的His标签，如SEQIDNO10中所示的His标签；(d)多肽，其从N端开始按以下顺序包含：·具有选自由SEQIDNO：17、SEQIDNO：26、SEQIDNO：35、SEQIDNO：44、SEQIDNO：53、SEQIDNO：62、SEQIDNO：71、SEQIDNO：80、SEQIDNO：89、SEQIDNO：98和SEQIDNO：101组成的组的氨基酸序列的多肽；·具有SEQIDNO：8中所示的所述氨基酸序列的肽接头；·具有SEQIDNO：158的氨基酸的多肽；·具有SEQIDNO：140中所示的所述氨基酸序列的多肽；以及·多肽，其从N端开始按以下顺序包含：·具有SEQIDNO：157的氨基酸序列的多肽；·具有SEQIDNO：8中所示的所述氨基酸序列的肽接头；·具有选自由SEQIDNO：18、SEQIDNO：27、SEQIDNO：36、SEQIDNO：45、SEQIDNO：54、SEQIDNO：63、SEQIDNO：72、SEQIDNO：81、SEQIDNO：90、SEQIDNO：99和SEQIDNO：102组成的组的氨基酸序列和位于C端的丝氨酸残基的多肽；·具有SEQIDNO：141中所示的所述氨基酸序列的多肽；(e)多肽，其从N端开始按以下顺序包含：·具有选自由SEQIDNO：17、SEQIDNO：26、SEQIDNO：35、SEQIDNO：44、SEQIDNO：53、SEQIDNO：62、SEQIDNO：71、SEQIDNO：80、SEQIDNO：89、SEQIDNO：98和SEQIDNO：101组成的组的氨基酸序列的多肽；·具有SEQIDNO：8中所示的所述氨基酸序列的肽接头；·具有SEQIDNO：158的氨基酸序列的多肽；·具有SEQIDNO：142中所示的所述氨基酸序列的多肽；以及·多肽，其从N端开始按以下顺序包含：·具有SEQIDNO：157的氨基酸序列的多肽；·具有SEQIDNO：8中所示的所述氨基酸序列的肽接头；·具有选自由SEQIDNO：18、SEQIDNO：27、SEQIDNO：36、SEQIDNO：...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·劳姆，P·库弗，D·劳，M·明兹，I·赫尔曼，P·霍夫曼，
申请(专利权)人：安进研发慕尼黑股份有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE