【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及肿瘤学领域，特别涉及双特异性t细胞接合器(tce)分子以及用所述分子治疗癌症患者。
技术介绍
1、通过独立于t细胞受体特异性的双特异性分子重定向针对肿瘤细胞的t细胞活性是免疫肿瘤学中逐渐发展的方法(frankel sr,baeuerle pa.targeting t cells totumor cells using bispecific antibodies[使用双特异性抗体将t细胞靶向肿瘤细胞].cur opin chem biol.[化学生物学新见]2013；17:385–92)。这种新的基于蛋白质的药物通常可以同时结合两种不同类型的抗原。它们以几种结构形式为人所知，目前已经探索了癌症免疫疗法和药物递送的应用(fan,gaowei；wang,zujian；hao,mingju；li,jinming(2015)."bispecific antibodies and their applications[双特异性抗体及其应用]".journal of hematology&oncology[血液学与肿瘤学杂志].8:130)。
2、可用于免疫肿瘤学的双特异性分子可以是抗原结合多肽如抗体，例如igg样抗体，即全长双特异性抗体，或不是全长抗体构建体的非igg样双特异性抗体。全长双特异性抗体典型地保留具有两个fab臂和一个fc区的传统单克隆抗体(mab)结构，不同的是两个fab位点结合不同抗原。非全长双特异性抗体可以缺乏整个fc区。这些包括化学连接的fab、仅由fab区组成、以及各种类型的二价和三价
3、bite分子是由两个柔性连接的抗体衍生的结合结构域制备的重组蛋白质构建体。bite的一个结合结构域对靶细胞上选择的肿瘤相关表面抗原是特异性的；第二结合结构域对cd3(t细胞上的t细胞受体复合物的亚基)具有特异性。通过其特定设计，bite分子独特地适合于将t细胞与靶细胞瞬时连接，并且同时强有力地激活t细胞对靶细胞的固有细胞溶解潜力。
4、需要双特异性分子，特别是t细胞接合器(“tce”)分子，其结合靶抗原和cd3，并且表现出增加的靶细胞裂解并具有期望的制造特性，例如增加的聚集温度和更陡的hic洗脱峰斜率。本专利技术提供了具有结合靶抗原(例如肿瘤抗原)的scfab和结合cd3的scfv的单链tce分子。一些tce分子进一步具有通过接头与scfv连接的scfc以延长分子半衰期。本专利技术的tce分子表现出改进的靶细胞裂解和改进的与制造相关的特性。
5、本专利技术还提供了结合ccr8和cd3的ccr8 tce分子。c-c趋化因子受体8型(ccr8)是β趋化因子受体家族的成员，并且是具有35个氨基酸胞外n末端的七跨膜g-蛋白偶联受体。ccr8的配体是ccl1，并且ccl1诱导的ccr8信号传导通过g偶联蛋白发生。与循环或正常组织treg和常规t效应子(teff)细胞相比，ccr8在癌症驻留的treg表面上以更高的流行率和更高的水平表达。实体瘤中的treg细胞浸润与不良的临床结果相关，并且treg通过抑制teff细胞的细胞毒性来阻抑抗癌免疫应答。
6、本专利技术的ccr8 tce分子被认为诱导肿瘤驻留ccr8+treg的重定向t细胞裂解，同时保留几乎没有或没有ccr8表达的正常组织treg。与靶向不特异性耗竭癌症驻留treg的其他标志物的其他treg耗竭性治疗候选物相比，本专利技术的ccr8 tce分子被认为具有改进的安全性谱。
7、本专利技术的ccr8 tce分子是单链分子并且具有(i)结合ccr8的scfv和结合cd3的scfv，其中这两个scfv通过接头连接；或(ii)结合ccr8的scfab和结合cd3的scfv，其中scfab和scfv通过接头连接。一些tce分子进一步具有通过接头与结合cd3的scfv连接的scfc以延长分子的半衰期。本专利技术的ccr8 tce分子表现出pm范围的细胞毒性并且结合食蟹猴和人ccr8。值得关注是，ccr8 tce分子被发现与ccr8上的独特表位结合，并且不会阻断配体与ccr8的结合。与这种独特表位的结合被认为有助于tce分子的高亲和力和生物活性。与这种独特表位的结合也可能促成可接受的药代动力学谱。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种t细胞接合器(tce)分子，其可以被称为含有scfab的tce分子，包含(i)结合肿瘤抗原的scfab，其中该scfab包含第一重链可变区(scfab vh)、ch1结构域、第一轻链可变区(scfab vl)和cκ或cλ结构域，以及(ii)结合cd3的scfv，其包含第二vl和第二vh，其中该tce分子是单链。在一些实施例中，scfab包含通过接头与scfv的n末端部分连接的c末端部分。在一些实施例中，tce分子进一步包含scfc。在一些实施例中，scfc包含通过接头与scfv的c末端部分连接的n末端部分。在特定实施例中，scfv结合人cd3。在一些实施例中，肿瘤抗原是ccr8。
2、在一些实施例中，本专利技术的tce分子的scfab从n末端到c末端具有按以下顺序的取向：vh、ch1、vl以及cκ或cλ。在其他实施例中，scfab从n末端到c末端具有按以下顺序的取向：vl、cκ或cλ、vh和ch1。在一些实施例中，scfab包含连接ch1和vl的接头，其中接头是(g4s)6、(g4s)7、(g4s)8、(g4q)6、(g4q)7或(g4q)8。在一些实施例中，scfab包含连接cκ或cλ和vh的接头，其中接头是(g4s)6、(g4s)7、(g4s)8、(g4q)6、(g4q)7或(g4q)8。在一些实施例中，scfab在重链恒定结构域和轻链恒定结构域之间含有天然半胱氨酸钳。在一些实施例中，tce分子包含在scfab中的vh结构域中的残基44和vl结构域中的残基100(kabat编号)之间的经工程改造的半胱氨酸钳。在一些实施例中，scfab含有在重链恒定结构域和轻链恒定结构域之间的天然半胱氨酸钳以及在vh结构域中的残基44和vl结构域中的残基100之间的经工程改造的半胱氨酸钳。在一些实施例中，tce分子ch1、cκ和/或cλ结构域是igg、igm、iga、igd或ige。在特定实施例中，结构域是igg。在更特定实施例中，结构域是igg1。在一些实施例中，结构域是人的。在特定实施例中，结构域是人igg1。
3、本专利技术提供了从n末端到c末端具有以下取本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种T细胞接合器(TCE)分子，其包含(i)结合肿瘤抗原的scFab，其中该scFab包含第一重链可变区(scFab VH)、CH1结构域、第一轻链可变区(scFab VL)和Cκ或Cλ结构域，以及(ii)结合CD3的scFv，该scFv包含第二VL和第二VH，并且其中该TCE分子是单链。
2.如权利要求1所述的TCE分子，其中该scFab包含通过接头与该scFv的N末端部分连接的C末端部分。
3.如权利要求1或2所述的TCE分子，其中该TCE分子进一步包含scFc。
4.如权利要求3所述的TCE分子，其中该scFc包含通过接头与该scFv的C末端部分连接的N末端部分。
5.如权利要求1-4中任一项所述的TCE分子，其中该scFv结合人CD3。
6.如权利要求1-5中任一项所述的TCE分子，其中该scFab从N末端到C末端具有按以下顺序的取向：VH、CH1、VL以及Cκ或Cλ。
7.如权利要求1-5中任一项所述的TCE分子，其中该scFab从N末端到C末端具有按以下顺序的取向：VL、Cκ或Cλ、VH和CH
8.如权利要求1-6中任一项所述的TCE分子，其中该scFab包含连接该CH1和scFab VL的接头，其中该接头是(G4S)6、(G4S)7、(G4S)8、(G4Q)6、(G4Q)7或(G4Q)8。
9.如权利要求1-5和7中任一项所述的TCE分子，其中该TCE分子包含连接该scFab Cκ或Cλ与该scFab VH的接头，其中该接头是(G4S)6、(G4S)7、(G4S)8、(G4Q)6、(G4Q)7或(G4Q)8。
10.如权利要求1-9中任一项所述的TCE分子，其中CH1、Cκ和/或Cλ结构域是IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。
11.如权利要求10所述的TCE分子，其中这些结构域是IgG。
12.如权利要求10或11所述的TCE分子，其中这些结构域是IgG1。
13.如权利要求1-12中任一项所述的TCE分子，其中该scFab在CH1和Cκ或Cλ之间包含半胱氨酸钳。
14.如权利要求1-13中任一项所述的TCE分子，其中该TCE分子从N末端到C末端的取向是：VH-CH1-接头-VL-Ck或Cλ-接头-VH-接头-VL-接头-Fc1(CH2-CH3)-接头-Fc2(CH2-CH3)。
15.如权利要求1-13中任一项所述的TCE分子，其中该TCE分子从N末端到C末端的取向是：VL-CH1-接头-VH-Ck或Cλ-接头-VH-接头-VL-接头-Fc1(CH2-CH3)-接头-Fc2(CH2-CH3)。
16.如权利要求1-15中任一项所述的TCE分子，其中该肿瘤抗原是CCR8。
17.如权利要求1-16中任一项所述的TCE分子，其中该结合CD3的scFv是I2E。
18.如权利要求1-16中任一项所述的TCE分子，其中该结合CD3的scFv是I2C。
19.一种TCE分子，其包含(i)结合CCR8的第一scFv，其中该第一scFv包含第一VH区(CCR8 scFv VH)和第一VL区(CCR8 scFv VL)，和(ii)结合CD3的第二scFv，其中该第二scFv包含第二VH区和第二VL区，并且其中该TCE分子是单链。
20.如权利要求1-19中任一项所述的TCE分子，其中该第一VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，并且该第一VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且其中：
21.如权利要求20所述的TCE分子，其中HCDR1包含由SEQ ID NO:1给出的氨基酸序列，HCDR2包含由SEQ ID NO:2给出的氨基酸序列，HCDR3包含由SEQ ID NO:3给出的氨基酸序列，LCDR1包含由SEQ ID NO:4给出的氨基酸序列，LCDR2包含由SEQ ID NO:5给出的氨基酸序列，并且LCDR3包含由SEQ ID NO:6给出的氨基酸序列。
22.如权利要求20所述的TCE分子，其中HCDR1包含由SEQ ID NO:17给出的氨基酸序列，HCDR2包含由SEQ ID NO:18给出的氨基酸序列，HCDR3包含由SEQ ID NO:19给出的氨基酸序列，LCDR1包含由SEQ ID NO:20给出的氨基酸序列，LCDR2包含由SEQ ID NO:21给出的氨基酸序列，并且LCDR3包含由SEQ ID NO:22给出的氨基酸序列。
23.如权利要求20所述的TCE分子，其中HCDR1包含由SEQ ID NO:33给出的...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种t细胞接合器(tce)分子，其包含(i)结合肿瘤抗原的scfab，其中该scfab包含第一重链可变区(scfab vh)、ch1结构域、第一轻链可变区(scfab vl)和cκ或cλ结构域，以及(ii)结合cd3的scfv，该scfv包含第二vl和第二vh，并且其中该tce分子是单链。
2.如权利要求1所述的tce分子，其中该scfab包含通过接头与该scfv的n末端部分连接的c末端部分。
3.如权利要求1或2所述的tce分子，其中该tce分子进一步包含scfc。
4.如权利要求3所述的tce分子，其中该scfc包含通过接头与该scfv的c末端部分连接的n末端部分。
5.如权利要求1-4中任一项所述的tce分子，其中该scfv结合人cd3。
6.如权利要求1-5中任一项所述的tce分子，其中该scfab从n末端到c末端具有按以下顺序的取向：vh、ch1、vl以及cκ或cλ。
7.如权利要求1-5中任一项所述的tce分子，其中该scfab从n末端到c末端具有按以下顺序的取向：vl、cκ或cλ、vh和ch1。
8.如权利要求1-6中任一项所述的tce分子，其中该scfab包含连接该ch1和scfab vl的接头，其中该接头是(g4s)6、(g4s)7、(g4s)8、(g4q)6、(g4q)7或(g4q)8。
9.如权利要求1-5和7中任一项所述的tce分子，其中该tce分子包含连接该scfab cκ或cλ与该scfab vh的接头，其中该接头是(g4s)6、(g4s)7、(g4s)8、(g4q)6、(g4q)7或(g4q)8。
10.如权利要求1-9中任一项所述的tce分子，其中ch1、cκ和/或cλ结构域是igg、igm、iga、igd或ige。
11.如权利要求10所述的tce分子，其中这些结构域是igg。
12.如权利要求10或11所述的tce分子，其中这些结构域是igg1。
13.如权利要求1-12中任一项所述的tce分子，其中该scfab在ch1和cκ或cλ之间包含半胱氨酸钳。
14.如权利要求1-13中任一项所述的tce分子，其中该tce分子从n末端到c末端的取向是：vh-ch1-接头-vl-ck或cλ-接头-vh-接头-vl-接头-fc1(ch2-ch3)-接头-fc2(ch2-ch3)。
15.如权利要求1-13中任一项所述的tce分子，其中该tce分子从n末端到c末端的取向是：vl-ch1-接头-vh-ck或cλ-接头-vh-接头-vl-接头-fc1(ch2-ch3)-接头-fc2(ch2-ch3)。
16.如权利要求1-15中任一项所述的tce分子，其中该肿瘤抗原是ccr8。
17.如权利要求1-16中任一项所述的tce分子，其中该结合cd3的scfv是i2e。
18.如权利要求1-16中任一项所述的tce分子，其中该结合cd3的scfv是i2c。
19.一种tce分子，其包含(i)结合ccr8的第一scfv，其中该第一scfv包含第一vh区(ccr8 scfv vh)和第一vl区(ccr8 scfv vl)，和(ii)结合cd3的第二scfv，其中该第二scfv包含第二vh区和第二vl区，并且其中该tce分子是单链。
20.如权利要求1-19中任一项所述的tce分子，其中该第一vh包含hcdr1、hcdr2、hcdr3，并且该第一vl包含lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且其中：
21.如权利要求20所述的tce分子，其中hcdr1包含由seq id no:1给出的氨基酸序列，hcdr2包含由seq id no:2给出的氨基酸序列，hcdr3包含由seq id no:3给出的氨基酸序列，lcdr1包含由seq id no:4给出的氨基酸序列，lcdr2包含由seq id no:5给出的氨基酸序列，并且lcdr3包含由seq id no:6给出的氨基酸序列。
22.如权利要求20所述的tce分子，其中hcdr1包含由seq id no:17给出的氨基酸序列，hcdr2包含由seq id no:18给出的氨基酸序列，hcdr3包含由seq id no:19给出的氨基酸序列，lcdr1包含由seq id no:20给出的氨基酸序列，lcdr2包含由seq id no:21给出的氨基酸序列，并且lcdr3包含由seq id no:22给出的氨基酸序列。
23.如权利要求20所述的tce分子，其中hcdr1包含由seq id no:33给出的氨基酸序列，hcdr2包含由seq id no:34给出的氨基酸序列，hcdr3包含由seq id no:35给出的氨基酸序列，lcdr1包含由seq id no:36给出的氨基酸序列，lcdr2包含由seq id no:37给出的氨基酸序列，并且lcdr3包含由seq id no:38给出的氨基酸序列。
24.如权利要求20所述的tce分子，其中hcdr1包含由seq id no:49给出的氨基酸序列，hcdr2包含由seq id no:50给出的氨基酸序列，hcdr3包含由seq id no:51给出的氨基酸序列，lcdr1包含由seq id no:52给出的氨基酸序列，lcdr2包含由seq id no:53给出的氨基酸序列，并且lcdr3包含由seq id no:54给出的氨基酸序列。
25.如权利要求20所述的tce分子，其中hcdr1包含由seq id no:65给出的氨基酸序列，hcdr2包含由seq id no:66给出的氨基酸序列，hcdr3包含由seq id no:67给出的氨基酸序列，lcdr1包含由seq id no:68给出的氨基酸序列，lcdr2包含由seq id no:69给出的氨基酸序列，并且lcdr3包含由seq id no:70给出的氨基酸序列。
26.如权利要求20所述的tce分子，其中hcdr1包含由seq id no:81给出的氨基酸序列，hcdr2包含由seq id no:82给出的氨基酸序列，hcdr3包含由seq id no:83给出的氨基酸序列，lcdr1包含由seq id no:84给出的氨基酸序列，lcdr2包含由seq id no:85给出的氨基酸序列，并且lcdr3包含由seq id no:86给出的氨基酸序列。
27.如权利要求20所述的tce分子，其中hcdr1包含由seq id no:97给出的氨基酸序列，hcdr2包含由seq id no:98给出的氨基酸序列，hcdr3包含由seq id no:99给出的氨基酸序列，lcdr1包含由seq id no:100给出的氨基酸序列，lcdr2包含由seq id no:101给出的氨基酸序列，并且lcdr3包含由seq id no:102给出的氨基酸序列。
28.如权利要求20所述的tce分子，其中hcdr1包含由seq id no:113给出的氨基酸序列，hcdr2包含由seq id no:114给出的氨基酸序列，hcdr3包含由seq id no:115给出的氨基酸序列，lcdr1包含由seq id no:116给出的氨基酸序列，lcdr2包含由seq id no:117给出的氨基酸序列，并且lcdr3包含由seq id no:118给出的氨基酸序列。
29.如权利要求19-28中任一项所述的tce分子，其中该第一vh包含由seq id no:7、seqid no:23、seq id no:39、seq id no:55、seq id no:71、seq id no:87、seq id no:103、或seq id no:119给出的氨基酸序列，并且其中该第一vl包含由seq id no:8、seq id no:24、seq id no:40、seq id no:56、seq id no:72、seq id no:88、seq id no:104、或seq idno:120给出的氨基酸序列。
30.如权利要求19-29中任一项所述的tce分子，其中该第一scfv包含由seq id no:9、25、41、57、73、89、105或121给出的氨基酸序列。
31.如权利要求19-30中任一项所述的tce分子，其包含由seq id no:10、seq id no:26、seq id no:42、seq id no:58、seq id no:74、seq id no:90、seq id no:106或seq idno:122给出的氨基酸序列。
32.如权利要求19-31中任一项所述的tce分子，其进一步包含scfc，其中该tce分子包含由seq id no:11、seq id no:27、seq id no:59、seq id no:75、seq id no:91、seq idno:107或seq id no:123给出的氨基酸序列。
33.如权利要求1-18和20-28中任一项所述的tce分子，其中该第一vh和ch1包含由seqid no:12、seq id no:28、seq id no:44、seq id no:60、seq id no:76、seq id no:92、seqid no:108或seq id no:124给出的氨基酸序列。
34.如权利要求1-18、20-28和33中任一项所述的tce分子，其包含cκ，其中该第一vl和cκ包含由seq id no:13、seq id no:29、seq id no:45、seq id no:61、seq id no:77、seqid no:93、seq id no:109或seq id no:125给出的氨基酸序列。
35.如权利要求1-18、20-28、33和34中任一项所述的tce分子，其包含由seq id no:14、seq id no:30、seq id no:46、seq id no:62、seq id no:78、seq id no:94、seq id no:110或seq id no:126给出的氨基酸序列。
36.如权利要求1-18、20-28和33-35中任一项所述的tce分子，其包含由seq id no:15、seq id no:31、seq id no:47、seq id no:63、seq id no:79、seq id no:95、seq id no:111或seq id no:127给出的氨基酸序列。
37.如权利要求3-18、20-28、33-36中任一项所述的tce分子，其中该tce分子包含由seqid no:16、seq id no:32、seq id no:48、seq id no:64、seq id no:80、seq id no:96、seqid no:112或seq id no:128给出的氨基酸序列。
38.一种治疗患者的癌症的方法，该方法包括向该患者施用有效量的如权利要求1-37中任一项所述的tce分子。
39.如权利要求38所述的方法，其中该癌症是实体瘤。
40.如权利要求38或39所述的方法，其中该癌症是非小细胞肺癌、胃癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、三阴性乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、或转移性去势抗性前列腺癌。
41.如权利要求38-40中任一项所述的方法，其中该方法进一步包括向该患者施用pd-1拮抗剂抗体或pd-l1拮抗剂抗体。
42.如权利要求41所述的方法，其中该pd-1拮抗剂抗体或pd-l1拮抗剂抗体在施用该tce分子之前、同时和/或之后施用。
43.如权利要求41或42所述的方法，其中该pd-1拮抗剂抗体是派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗或抗体20c1.009。
44.如权利要求41或42所述的方法，其中该pd-l1拮抗剂抗体是阿特珠单抗、阿维鲁单抗或德瓦鲁单抗。
45.如权利要求1-37中任一项所述的tce分子，其用于在疗法中使用。
46.如权利要求1-37中任一项所述的tce分子，其用于在治疗癌症中使用。
47.如权利要求46所述的tce分子，其用于在治疗癌症中使用，其中该癌症是实体瘤。
48.如权利要求46或47所述的tce分子，其用于在治疗癌症中使用，其中该癌症是非小细胞肺癌、胃癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、三阴性乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、或转移性去势抗性前列腺癌。
49.如权利要求46-48中任一项所述的tce分子，其用于在治疗癌症中使用，其中该癌症是非小细胞肺癌、胃癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、或三阴性乳腺癌。
50.如权利要求46-49中任一项所述的tce分子，其用于在治疗癌症中使用，其中该使用进一步包括向该患者施用pd-1拮抗剂抗体或pd-l1拮抗剂抗体。
51.如权利要求50所述的tce分子，其用于在治疗癌症中使用，其中该pd-1拮抗剂抗体或pd-l1拮抗剂抗体在施用该tce分子之前、同时和/或之后施用。
52.如权利要求50或51所述的tce分子，其用于在治疗癌症中使用，其中该pd-1拮抗剂抗体是派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗或抗体20c1.009。
53.如权利要求50或51所述的tce分子，其用于在治疗癌症中使用，其中该pd-l1拮抗剂抗体是阿特珠单抗、阿维鲁单抗或德瓦鲁单抗。
54.如权利要求1-37中任一项所述的tce分子用于制造用于治疗癌症的药物的用途。
55.如权利要求54所述的用途，其中该癌症是实体瘤。
56.如权利要求54或55所述的用途，其中该癌症是非小细胞肺癌、胃癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、三阴性乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、或转移性去势抗性前列腺癌。
57.如权利要求54-56中任一项所述的用途，其中该癌症是非小细胞肺癌、胃癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、或三阴性乳腺癌。
58.一种药物组合物，其包含如权利要求1-37中任一项所述的tce分子和一种或多种药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。
59.一种tce分子，其包含scfv，该scfv包含各自分别包含由seq id no:217、218、219、220、221和220给出的氨基酸序列的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3。
60.如权利要求59所述的tce分子，其包含分别包含由seq id no:223和seq id no:224给出的氨基酸序列的vh和vl。
61.如权利要求59或权利要求60所述的tce分子，其中该tce分子包...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·布罗斯，C·达尔霍夫，T·劳姆，J·S·庞德扎勒克，L·温克尔，M·穆兹，N·W·皮尔斯，A·凯尔泽斯卡，W·陈，D·L·贝茨，C·布鲁梅尔，J·卡尔约瑟夫·霍纳，
申请(专利权)人：安进研发慕尼黑股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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