针对CLDN18.2和CD3的抗体构建体制造技术

本发明专利技术涉及抗体构建体，该抗体构建体包含结合紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2)的结构域和结合CD3的另一个结构域。此外，本发明专利技术提供了编码该抗体构建体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、以及用所述多核苷酸或载体转化或转染的宿主细胞。此外，本发明专利技术提供了用于产生本发明专利技术的抗体构建体的方法、所述抗体构建体的医学用途、以及包含所述抗体构建体的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对CLDN18.2和CD3的抗体构建体本专利技术涉及抗体构建体，该抗体构建体包含结合紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2)的结构域和结合CD3的另一个结构域。此外，本专利技术提供了编码该抗体构建体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、以及用所述多核苷酸或载体转化或转染的宿主细胞。此外，本专利技术提供了用于产生本专利技术的抗体构建体的方法、所述抗体构建体的医学用途、以及包含所述抗体构建体的试剂盒。
技术介绍
紧密连接蛋白(Claudin)是上皮紧密连接的关键结构和功能组分，其作用是调节细胞-细胞通透性、维持离子稳态、并且支持细胞粘附和极性。紧密连接蛋白是22-27kDa的四分子交联体(tetraspan)跨膜蛋白，其在细胞膜内或跨细胞膜进行多聚化以形成保护屏障。已经报道的24种紧密连接蛋白由于它们的组织定位特异性和由于它们与其他蛋白质的相互作用而不同。紧密连接蛋白18(CLDN18)最初被鉴定为转录因子T/EBP/NKX2.1的靶基因。符合其与其他紧密连接蛋白家族成员的同源性，CLDN18被证实定位于小鼠和人的细胞紧密连接处。已显示CLDN18编码由可变剪接产生的两种同种型：在正常肺中特异性表达的CLDN18.1、和在胃粘膜的分化细胞中表达的CLDN18.2。CLDN18.2是具有两个细胞外环的261个氨基酸的蛋白质，并且与CLDN18.1具有92％的序列同一性。与第二个细胞外环不同，CLDN18.2的第一个细胞外环与CLDN18.1具有八个氨基酸差异。CLDN18.2与其他家族成员的同源性更为有限，与CLDN1、CLDN6和CLDN7具有29％-34％的总体同一性。CLDN18.2在几种肿瘤类型(包括胃癌、胰腺癌、食管癌、粘液性卵巢癌和非小细胞肺癌)中表达。CLDN18.2在胃癌中的表达包括浸润性前沿和转移部位，但是据报道CLDN18的绝对水平在这些环境中降低了。CLDN18.2在多种肿瘤类型中的表达(其中正常组织表达主要限于胃中的分化细胞)已经导致将CLDN18.2视为胃癌和其他适应症的治疗靶标。胃癌和胃食管癌仍然是医疗需求未得到满足的适应症，全球每年报道至少140万新病例和110万例死亡(Lordick和Janjigian,NatRevCancer[癌症自然评论]2016)。典型的一线治疗包括手术和组合化学疗法(包括铂和氟嘧啶化合物)。虽然这种方案可以潜在地提高生活质量并将中值存活期延长8-10个月，但是5年存活率仍然很低。靶向疗法提供了替代性治疗策略。抗Her2单克隆抗体曲妥珠单抗(trastuzumab)被批准用于与化学疗法组合的Her2阳性胃癌和胃食管癌的一线治疗(Bang等人,TheLancet[柳叶刀]2010)。抗VEGFR2抗体雷莫芦单抗(ramucirumab)被批准用于治疗在化学疗法之后已经进展的胃癌和胃食管癌(Fuchs等人,TheLancet[柳叶刀]2014)。虽然与单独化学疗法相比，这些靶向药剂进一步增加了存活期，但是它们的功效受到靶标表达的异质性和受到抗性机制的限制。最近，免疫检查点疗法已经在选择环境中表现出活性：派姆单抗(pembrolizumab)在美国被批准用于治疗微卫星不稳定性高(MSI-H)肿瘤，包括胃癌(Le等人,Science[科学]2017)，并且用于治疗在两线或更多线的化学疗法之后已进展的不可切除的晚期或复发性胃癌(Fuchs等人,JClinOncol[临床肿瘤学杂志]2017)。纳武单抗(nivolumab)在日本被批准用于治疗在化学疗法之后已进展的不可切除的晚期或复发性胃癌(Kang等人,TheLancet[柳叶刀],2017)。在这些研究中，在未选择人群中仅1％-2％的患者、和MSI-H(微卫星不稳定性高)人群(占总体胃和胃食管病例的9％)的60％表现出完全缓解。因此，仍然需要具有为更大的患者群体提供持久反应的潜力的新疗法。相比胃癌或胃食管癌，已证明胰腺癌对可用疗法的反应甚至更低。全球每年报道了有来自胰腺癌的至少338,000例病例和331,000例死亡，其中中值存活期为6个月(Ilic和Ilic,WorldJGastroenterol[世界胃肠病学杂志]2016)。仅有20％-30％的患者是手术切除的候选人。直到最近当组合化学疗法方案FOLFIRINOX(5-氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂、伊立替康)、以及吉西他滨与白蛋白结合型紫杉醇(nab-paclitaxel)组合显示，与单独的吉西他滨治疗相比，总体存活期增加约2-5个月(Uccello等人,CurrOncol[现代肿瘤学]2018)时，吉西他滨(gemcitabine)一直被考虑为一线疗法。其他化学疗法组合典型地被用于二线疗法。已经在晚期胰腺癌中评估了几种靶向疗法和免疫治疗剂，但成效有限。胰腺肿瘤的特征在于结缔组织形成和免疫抑制性免疫浸润，这导致缺乏反应。需要具有克服这种免疫抑制环境和延长存活期的潜力的新疗法。包含与T细胞上的CD3结合的一个结构域和与在靶细胞上表达的蛋白质结合的一个结构域的双特异性抗体构建体直接将T细胞连接到靶细胞，以诱导T细胞重定向裂解。这种作用机制不同于化学疗法、靶向疗法和其他免疫疗法，因为它可以与任何CD3阳性T细胞一起工作，而不依赖共刺激激活信号(Klinger等人,ImmunolReviews[免疫学评论]2016)。CLDN18.2在胃癌、胃食管癌和胰腺癌的细胞表面上的表达提供了用CLDN18.2xCD3抗体构建体靶向这些肿瘤类型的基础。此外，CLDN18.2xCD3抗体构建体具有靶向表达CLDN18.2的另外的肿瘤类型(包括粘液性卵巢癌、结直肠癌和非小细胞肺癌)的潜力。具体实施方式因此，在一个方面，本专利技术提供了一种抗体构建体，该抗体构建体包含与靶细胞表面上的CLDN18.2结合的第一结构域和与T细胞表面上的CD3结合的第二结构域。还设想：(1)本专利技术的抗体构建体的第一结构域与CLDN18.2的第一细胞外环(环1)结合；(2)本专利技术的抗体构建体的第一结构域与如下抗体或抗体构建体一样结合相同的CLDN18.2表位，该抗体或抗体构建体包含如下结构域，该结构域与靶细胞表面上的CLDN18.2结合并且包含：a)VH区以及VL区，该VH区包含如SEQIDNO:121中所描述的CDR-H1、如SEQIDNO:122中所描述的CDR-H2和如SEQIDNO:123中所描述的CDR-H3，该VL区包含如SEQIDNO:124中所描述的CDR-L1、如SEQIDNO:125中所描述的CDR-L2和如SEQIDNO:126中所描述的CDR-L3；b)VH区和/或VL区，该VH区包含如SEQIDNO:133中所描述的CDR-H1、如SEQIDNO:134中所描述的CDR-H2和如SEQIDNO:135中所描述的CDR-H3，该VL区包含如SEQIDNO:136中所描述的CDR-L1、如SEQIDNO:137中所描述的CDR-L2和如SEQIDNO:138中所描述的CDR-L3；c)如SEQIDNO:127中所描述的VH区，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体构建体，其包含/n·与靶细胞表面上的CLDN18.2结合的第一结构域，以及/n·与T细胞表面上的人CD3结合的第二结构域，其中/n该第一结构域与如下抗体或抗体构建体一样结合相同的CLDN18.2表位，该抗体或抗体构建体包含如下结构域，该结构域与靶细胞表面上的CLDN18.2结合并且包含：/na)VH区以及VL区，该VH区包含如SEQ ID NO:121中所描述的CDR-H1、如SEQ ID NO:122中所描述的CDR-H2和如SEQ ID NO:123中所描述的CDR-H3，该VL区包含如SEQ ID NO:124中所描述的CDR-L1、如SEQ ID NO:125中所描述的CDR-L2和如SEQ ID NO:126中所描述的CDR-L3；/nb)VH区和/或VL区，该VH区包含如SEQ ID NO:133中所描述的CDR-H1、如SEQ ID NO:134中所描述的CDR-H2和如SEQ ID NO:135中所描述的CDR-H3，该VL区包含如SEQ ID NO:136中所描述的CDR-L1、如SEQ ID NO:137中所描述的CDR-L2和如SEQ ID NO:138中所描述的CDR-L3；/nc)如SEQ ID NO:127中所描述的VH区，以及如SEQ ID NO:128中所描述的VL区；或/nd)如SEQ ID NO:139中所描述的VH区，以及如SEQ ID NO:140中所描述的VL区。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180803 US 62/714,3661.一种抗体构建体，其包含
·与靶细胞表面上的CLDN18.2结合的第一结构域，以及
·与T细胞表面上的人CD3结合的第二结构域，其中
该第一结构域与如下抗体或抗体构建体一样结合相同的CLDN18.2表位，该抗体或抗体构建体包含如下结构域，该结构域与靶细胞表面上的CLDN18.2结合并且包含：
a)VH区以及VL区，该VH区包含如SEQIDNO:121中所描述的CDR-H1、如SEQIDNO:122中所描述的CDR-H2和如SEQIDNO:123中所描述的CDR-H3，该VL区包含如SEQIDNO:124中所描述的CDR-L1、如SEQIDNO:125中所描述的CDR-L2和如SEQIDNO:126中所描述的CDR-L3；
b)VH区和/或VL区，该VH区包含如SEQIDNO:133中所描述的CDR-H1、如SEQIDNO:134中所描述的CDR-H2和如SEQIDNO:135中所描述的CDR-H3，该VL区包含如SEQIDNO:136中所描述的CDR-L1、如SEQIDNO:137中所描述的CDR-L2和如SEQIDNO:138中所描述的CDR-L3；
c)如SEQIDNO:127中所描述的VH区，以及如SEQIDNO:128中所描述的VL区；或
d)如SEQIDNO:139中所描述的VH区，以及如SEQIDNO:140中所描述的VL区。


2.根据权利要求1所述的抗体构建体，其中该第二结构域结合人CD3ε和普通狨或松鼠猴CD3ε。


3.根据权利要求1或2所述的抗体构建体，其中
a)该抗体构建体是单链抗体构建体，
b)该第一结构域处于scFv的形式，
c)该第二结构域处于scFv的形式，
d)该第一结构域和该第二结构域经由接头连接，和/或
e)该抗体构建体包含提供延长的血清半衰期的结构域。


4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中该第一结构域不结合或不显著结合CLDN18.1、CLDN1、CLDN2、CLDN3、CLDN4、CLDN6和/或CLDN9。


5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中该第一结构域包含含有选自下组的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH区和含有选自下组的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL区，该组由以下组成：
a)如SEQIDNO:121中所描述的CDR-H1、如SEQIDNO:122中所描述的CDR-H2和如SEQIDNO:123中所描述的CDR-H3，如SEQIDNO:124中所描述的CDR-L1、如SEQIDNO:125中所描述的CDR-L2和如SEQIDNO:126中所描述的CDR-L3；以及
b)如SEQIDNO:133中所描述的CDR-H1、如SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·达尔霍夫，C·布鲁梅尔，J·布罗斯，T·劳姆，E·纳伍德，T·阿维德森，I·陈，S·罗丝，J·拜里斯，
申请(专利权)人：安进研发慕尼黑股份有限公司，安进公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE