κ骨髓瘤抗原嵌合性抗原受体和其用途制造技术

本发明专利技术提供用于治疗KMA表达恶性病的组合物和方法，其包括嵌合性抗原受体(CAR)和含有CAR的T细胞(CAR T细胞)。本发明专利技术还提供包含共同表达包括细胞因子和抗体在内的其它抗肿瘤剂的CAR T细胞的方法和组合物。

Kappa myeloma antigen chimeric antigen receptor and its use

The present invention provides compositions and methods for treating KMA expression in malignant diseases, including chimeric antigen receptor (CAR) and CAR containing T cells (CAR T cells). The invention also provides methods and compositions containing co expression including cytokines and antibodies, other antineoplastic agents CAR T cells.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】κ骨髓瘤抗原嵌合性抗原受体和其用途美国非临时申请的交叉引用本申请要求2015年4月23日提交的美国临时申请系列号62/151,968和2015年5月7日提交的美国临时申请系列号62/158,407的优先权，其中每一个针对全部目的以全文引用的方式并入本文中。关于序列表的陈述以文本格式代替纸本拷贝提供与本申请相关的序列表，并且在此以引用的方式并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是HMLX_002_02WO_SeqList_ST25.txt。文本文件是约63KB，创建于2016年4月22日，并且经EFS-Web用电子方式提交。
技术介绍
多发性骨髓瘤(MM)是一种骨髓浆细胞的恶性病，尽管其疗法最近有进展，但仍不可治愈。其临床病程的特征在于最初对疗法有反应，随后在最终对全部治疗形式都产生耐受性之后，反复复发。其还与高发病率和残疾有关，这都是由疾病本身和来自可用治疗的毒性引起。多发性骨髓瘤的特征在于恶性浆细胞，其分泌κ或λ轻链限制单克隆病变蛋白。κ限制发生于60％骨髓瘤患者中并且κ骨髓瘤抗原(KMA)的表达高度限于多发性骨髓瘤和B细胞恶性病。κMab是KMA特异性单克隆抗体，其在I期和II期临本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种嵌合性抗原受体(CAR)，其包含一个或多个胞内信号传导结构域和胞外抗原结合结构域，其中所述胞外抗原结合结构域特异性识别κ骨髓瘤抗原(KMA)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.23 US 62/151,968;2015.05.07 US 62/158,4071.一种嵌合性抗原受体(CAR)，其包含一个或多个胞内信号传导结构域和胞外抗原结合结构域，其中所述胞外抗原结合结构域特异性识别κ骨髓瘤抗原(KMA)。2.根据权利要求1所述的CAR，其中所述一个或多个胞内信号传导结构域包含一个或多个共刺激胞内域。3.根据权利要求2所述的CAR，其中所述一个或多个共刺激胞内域是CD28结构域、CD3ζ结构域、4-1BB结构域或OX-40结构域或其组合中的一个或多个。4.根据权利要求3所述的CAR，其中所述共刺激胞内域是CD3ζ结构域和CD28结构域。5.根据权利要求3所述的CAR，其中所述共刺激胞内域是CD3ζ结构域和OX-40结构域。6.根据权利要求4所述的CAR，其进一步包含OX-40结构域。7.根据权利要求3所述的CAR，其中所述共刺激胞内域是CD3ζ结构域和4-1BB结构域。8.根据权利要求4所述的CAR，其进一步包含4-1BB结构域。9.根据权利要求7所述的CAR，其进一步包含OX-40结构域。10.根据权利要求1所述的CAR，其中所述胞外结合结构域包含特异性识别KMA的单链可变片段(scFv)。11.根据权利要求10所述的CAR，其中所述scFv包含来源于所述κMab单克隆抗体的互补决定区(CDR)，其中所述κMAbCDR包含SEQIDNO：3-8。12.根据权利要求10所述的CAR，其中所述scFv包含来自κMab的VL链和VH链，其中所述VL链包含SEQIDNO：2并且VH链包含SEQIDNO：1。13.根据权利要求11所述的CAR，其中来自κMab的所述VL链和VH链经甘氨酸-丝氨酸连接子附接。14.根据权利要求13所述的CAR，其中所述甘氨酸-丝氨酸连接子是15-20个氨基酸的连接子。15.根据权利要求14所述的CAR，其中所述15个氨基酸的连接子包含(Gly4Ser)3。16.根据权利要求10所述的CAR，其中所述scFv经间隔子附接到所述一个或多个胞内信号传导结构域。17.根据权利要求16所述的CAR，其中所述间隔子是免疫球蛋白恒定区或CD8α链。18.根据权利要求17所述的CAR，其中所述免疫球蛋白恒定区包含IgG铰链结构域、IgGCH2结构域和IgGCH3结构域中的一个或多个。19.根据权利要求18所述的CAR，其中所述免疫球蛋白恒定区包含免疫球蛋白铰链结构域。20.根据权利要求19所述的CAR，其中所述免疫球蛋白恒定区另外包含IgGCH3结构域。21.根据权利要求19或20所述的CAR，其中所述免疫球蛋白恒定区另外包含IgGCH2结构域。22.根据权利要求17到21中任一项所述的CAR，其中所述间隔子经甘氨酸-丝氨酸连接子附接到scFV。23.根据权利要求22所述的CAR，其中所述甘氨酸-丝氨酸连接子是15-20个氨基酸的连接子。24.根据权利要求23所述的CAR，其中所述15个氨基酸的连接子包含(Gly4Ser)3。25.一种经遗传修饰的T细胞，其经工程改造以表达根据权利要求1到24中任一项所述的CAR。26.根据权利要求25所述的经遗传修饰的T细胞，其进一步经工程改造以表达一种或多种额外生物分子。27.根据权利要求26所述的经遗传修饰的T细胞，其中所述一种或多种额外生物分子包含IL-12、GAL3C或SANT7中的一个或多个。28.根据权利要求26所述的经遗传修饰的T细胞，其中所述一种或多种额外生物分子是IL-12并且所述IL-12由包含经柔性连接子接合的一个IL-12p35子单元和一个IL-12p40子单元的单链多肽表达。29.根据权利要求28所述的经遗传修饰的T细胞，其中所述柔性连接子是(G4S)3连接子。30.根据权利要求29所述的经遗传修饰的T细胞，其中包含经柔性连接子接合的一个IL-12p35子单元和一个IL-12p40子单元的所述单链多肽形成生物活性p70IL-12杂二聚体。31.根据权利要求26所述的经遗传修饰的T细胞，其经工程改造以表达IL-12和可选标记物。32.根据权利要求26所述的经遗传修饰的T细胞，其经工程改造以表达SANT-7。33.根据权利要求26所述的经遗传修饰的T细胞，其经工程改造以表达SANT-7和可选标记物。34.根据权利要求31所述的经遗传修饰的T细胞，其进一步经工程改造以表达SANT7。35.根据权利要求26所述的经遗传修饰的T细胞，其经工程改造以表达GAL3C。36.根据权利要求26所述的经遗传修饰的T细胞，其经工程改造以表达GAL3C和可选标记物。37.根据权利要求31所述的经遗传修饰的T细胞，其进一步经工程改造以表达GAL3C。38.根据权利要求31所述的经遗传修饰的T细胞，其进一步经工程改造以表达GAL3C和SANT7。39.根据权利要求33所述的经遗传修饰的T细胞，其进一步经工程改造以表达GAL3C。40.一种用于制造经遗传修饰的T细胞的方法，其包含向T细胞中引入编码包含一个或多个胞内信号传导结构域和胞外抗原结合结构域的CAR的表达载体，其中所述胞外抗原结合结构域特异性识别κ骨髓瘤抗原(KMA)。41.根据权利要求40所述的方法，其中所述表达载体是转座载体表达系统。42.根据权利要求40所述的方法，其中所述表达载体是PiggyBac转座子表达载体。43.根据权利要求40所述的方法，其中所述引入包含电穿孔。44.根据权利要求40所述的方法，其中所述一个或多个胞内信号传导结构域包含一个或多个共刺激胞内域。45.根据权利要求44所述的方法，其中所述一个或多个共刺激胞内域是CD28结构域、CD3ζ结构域、4-1BB结构域或OX-40结构域或其组合中的一个或多个。46.根据权利要求45所述的方法，其中所述共刺激胞内域是CD3ζ结构域和CD28结构域。47.根据权利要求45所述的方法，其中所述共刺激胞内域是CD3ζ结构域和OX-40结构域。48.根据权利要求46所述的方法，其中所述CAR另外包含OX-40结构域。49.根据权利要求45所述的方法，其中所述共刺激胞内域是CD3ζ结构域和4-1BB结构域。50.根据权利要求46所述的方法，其中所述CAR另外包含4-1BB结构域。51.根据权利要求50所述的方法，其中所述CAR另外包含OX-40结构域。52.根据权利要求40所述的方法，其中所述胞外结合结构域包含特异性识别KMA的scFv。53.根据权利要求52所述的方法，其中所述scFv包含来源于所述κMab单克隆抗体的互补决定区(CDR)，其中所述CDR包含SEQIDNO：3-8。54.根据权利要求53所述的方法，其中所述scFv包含所述κMab单克隆抗体的VL链和VH链，其中所述VL链包含SEQIDNO：2并且所述VH链包含SEQIDNO：1。55.根据权利要求54所述的方法，其中所述VLCDR和VHCDR经甘氨酸-丝氨酸连接子附接。56.根据权利要求55所述的方法，其中所述甘氨酸-丝氨酸连接子是15-20个氨基酸的连接子。57.根据权利要求56所述的方法，其中所述15个氨基酸的连接子包含(Gly4Ser)3。58.根据权利要求52所述的方法，其中所述scFv经间隔子附接到所述一个或多个胞内信号传导结构域。59.根据权利要求58所述的方法，其中所述间隔子是免疫球蛋白恒定区或CD8α链。60.根据权利要求59所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区包含IgG铰链结构域、IgGCH2结构域和IgGCH3结构域中的一个或多个。61.根据权利要求59所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区包含免疫球蛋白铰链结构域。62.根据权利要求61所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区另外包含IgGCH3结构域。63.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定区另外包含IgGCH2结构域。64.根据权利要求59到63中任一项所述的CAR，其中所述间隔子经甘氨酸-丝氨酸连接子附接到scFV。65.根据权利要求22所述的CAR，其中所述甘氨酸-丝氨酸连接子是15-20个氨基酸的连接子。66.根据权利要求23所述的CAR，其中所述15个氨基酸的连接子包含(Gly4Ser)3。67.根据权利要求40所述的方法，其进一步包含引入能够表达一种或多种额外生物分子的一种或多种额外表达载体。68.根据权利要求67所述的方法，其中所述一种或多种额外生物分子包含IL-12、GAL3C或SANT7中的一个或多个。69.根据权利要求68所述的方法，其中所述一种或多种额外生物分子是IL-12并且所述IL-12由包含经柔性连接子接合的IL-12p35子单元和IL-12p40子单元的单链构筑体表达。70.根据权利要求69所述的方法，其中所述柔性连接子是(G4S)3连接子。71.根据权利要求70所述的方法，其中包含经柔性连接子接合的IL-12p35...

【专利技术属性】
技术研发人员：肯尼斯·米克尔斯维特，罗莎娜·邓恩，大卫·戈特利布，格兰特·洛根，
申请(专利权)人：哈马洛吉克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚,AU