本发明专利技术公开了一种基因标记物，该基因标记物是MS4A6A。MS4A6A可用于判断受试者是否具有患多发性骨髓瘤的风险或者判断受试者是否患有多发性骨髓瘤。另外，MS4A6A还可以用于制备治疗多发性骨髓瘤的药物。本发明专利技术为临床在分子水平上诊断多发性骨髓瘤提供了新的诊断方法，同时为多发性骨髓瘤的基因治疗提供了新的药物靶点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤诊断、治疗、预测预后领域，更具体地，本专利技术涉及以检测MS4A6A异常为手段的肿瘤诊断、预测预后方法；及激活MS4A6A基因或蛋白质的肿瘤治疗剂。
技术介绍
多发性骨髓瘤(multiple myeloma)是血液系统的一种较常见的恶性肿瘤，它是由于机体的浆细胞异常克隆性增生的疾病，起源于B淋巴细胞，患者的骨髓内有浆细胞(或称为骨髓瘤细胞)的异常性的克隆增殖。由于异常浆细胞浸润骨骼，骨髓和全身多个器官组织，引起病理性的骨骼破坏，患者的血清中出现异常的单克隆免疫球蛋白，从而抑制了机体的正常的多克隆免疫球蛋白，患者的尿内出现M蛋白，患者最后表现出导致贫血、肾功能损害及病理性骨折等。在我国，MM的年发病率为1/10万，而在西方国家年发病率为4/10万，其平均生存期为3年，占造血系统肿瘤死亡率的20％左右。现代细胞遗传学和分子生物学的研究发现多发性骨髓瘤患者的体内的信号传导通路发生了异常，当机体细胞的遗传基因发生改变，以及细胞因子的异常分泌，同时患者骨髓微环境发生改变及和细胞之间的相互作用发生了异常，都参与了该病的发生及其发展，但我们对多发性骨髓瘤的确切发病机制仍未完全明了。近年来，虽然有沙利度胺以及蛋白酶抑制剂的临床应用，以及异基因的骨髓移植技术，但MM的治疗并没有得到明显的改进，患者的预后亦没有明显的改善。Wolffe认为从遗传学和表达遗传学(epigenetics)的研究中发现，由于有些癌基因，包括原癌基因、抑癌基因的分子发生了变化，它对肿瘤的发生起着重要的作用。他认为:表达遗传学的定义就是:由于非基因序列的改变，导致了基因表达水平的变化。这种变化不影响DNA序列的变化，但最后却导致了基因的异常，随着遗传学、分子生物学以及基因学的发展，发现一些与肿瘤增殖与凋亡相关的基因对于我们了解多发性骨髓瘤的发病机制，分子特点以及诊断和治疗发挥了极大的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种通过检测MS4A6A基因或蛋白表达差异来诊断多发性骨髓瘤的方法。本专利技术的目的之二在于提供一种通过检测MS4A6A基因或蛋白表达差异来预测多发性骨髓瘤预后的方法。本专利技术的目的之三在于提供一种通过激活MS4A6A基因或MS4A6A蛋白来治疗多发性骨髓瘤的方法。本专利技术的目的之四在于提供一种用于筛选治疗多发性骨髓瘤的药物的方法。本专利技术的目的之五在于提供一种用于治疗多发性骨髓瘤的药物。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了检测MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的产品在制备多发性骨髓瘤诊断工具中的用途。本专利技术还提供了检测MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的产品在制备预测多发性骨髓瘤预后工具中的用途。进一步，所述检测MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的产品包括检测MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的表达水平的产品。所述产品包括能够结合MS4A6A基因的核酸或者能够结合MS4A6A蛋白的物质(例如抗体)。所述核酸能够检测MS4A6A基因的表达水平；所述物质能够检测MS4A6A蛋白的表达水平。本专利技术的检测MS4A6A基因的产品可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。包含在上述产品中的核酸可以通过化学合成来获得，或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因，然后使用设计用于扩增期望核酸的引物扩增它来获得。进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(Amplification Refractory Mutation System，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR
法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。上面所述的核酸包括扩增MS4A6A基因的引物，产品中包括的引物可以通过通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。在本专利技术的具体实施方案中，所述核酸为QPCR实验中使用的扩增引物，所述引物的序列如SEQ ID NO.1(正向序列)和SEQ ID NO.2(反向序列)所示。上面所述的核酸还可包括探针，所述探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的检测MS4A6A蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的检测MS4A6A蛋白的产品包括特异性结合MS4A6A蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本专利技术的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本专利技术的检测MS4A6A蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的MS4A6A蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对MS4A6A
蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧光标记蛋白质或肽：用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽，添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料，然后混合溶液，再于室温放置10分钟。另外，标记可使用商品化的标记试剂盒，诸如生物素标记试剂盒，如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(Dojindo Laboratories)；过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化物酶标记试剂盒-NH2、过氧化物酶标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories)；藻胆蛋白标记试剂盒诸如藻胆蛋白标记试剂盒-NH2、藻胆蛋白标记试剂盒-SH、B-藻本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的产品在制备诊断多发性骨髓瘤或预测多发性骨髓瘤预后的工具中的应用。
【技术特征摘要】
1.检测MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的产品在制备诊断多发性骨髓瘤或预测多发性骨髓瘤预后的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的产品包括检测MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的表达水平的产品。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述产品包括能够结合MS4A6A基因的核酸或者能够结合MS4A6A蛋白的物质；所述核酸能够检测MS4A6A基因的表达水平；所述物质能够检测MS4A6A蛋白的表达水平。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述核酸是实时定量PCR中使用的特异扩增MS4A6A基因的引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。5.一种诊断多发性骨髓瘤或预测多发性骨髓瘤预后的工具，其特征在于，所述工具包括能够检测M...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，肖枫，任静，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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