识别PRAME抗原短肽的T细胞受体制造技术

本发明专利技术提供了一种能够特异性结合衍生自PRAME抗原的短肽PYLGQMINL的T细胞受体(TCR)，所述抗原短肽PYLGQMINL可与HLA A2402形成复合物并一起被呈递到细胞表面。本发明专利技术还提供了编码所述TCR的核酸分子以及包含所述核酸分子的载体。另外，本发明专利技术还提供了转导本发明专利技术TCR的细胞。

【技术实现步骤摘要】
识别PRAME抗原短肽的T细胞受体
本专利技术涉及能够识别源自PRAME抗原短肽的TCR，本专利技术还涉及转导上述TCR来获得的PRAME特异性的T细胞，及他们在预防和治疗PRAME相关疾病中的用途。
技术介绍
PRAME为黑色素瘤特异性抗原(preferentiallyexpressedantigenofmelanoma，PRAME)，在88％初发和95％转移黑色素瘤中都有表达(IkedaH,etal.Immunity,1997,6(2):199-208),正常皮肤组织和良性黑素细胞则不表达。PRAME在细胞内生成后被降解成小分子多肽，并与MHC(主组织相容性复合体)分子结合形成复合物，被呈递到细胞表面。PYLGQMINL是衍生自PRAME抗原的短肽，是PRAME相关疾病治疗的一种靶标。除了黑色素瘤，PRAME还在多种肿瘤表达，包括肺鳞状细胞癌、乳腺癌、肾细胞癌、头颈部肿瘤、霍杰金氏淋巴瘤、肉瘤及成神经管细胞瘤等(van'tVeerLJ,etal.Nature,2002,415(6871):530-536；BoonK,etal.Oncogene,2003,22(48):7687-7694)另外，其在白血病中PRAME亦有显著表达，急性淋巴细胞白血病17％～42％，急性粒细胞白血病30％～64％(SteinbachD,etal.CancerGenetCytogene,2002,138(1):89-91)。对于上述疾病的治疗，可以采用化疗和放射性治疗等方法，但都会对自身的正常细胞造成损害。T细胞过继免疫治疗是将对靶细胞抗原具有特异性的反应性T细胞转入病人体内，使其针对靶细胞发挥作用。T细胞受体(TCR)是T细胞表面的一种膜蛋白，其能够识别相应的靶细胞表面的抗原短肽。在免疫系统中，通过抗原短肽特异性的TCR与短肽-主组织相容性复合体(pMHC复合物)的结合引发T细胞与抗原呈递细胞(APC)直接的物理接触，然后T细胞及APC两者的其他细胞膜表面分子就发生相互作用，引起一系列后续的细胞信号传递和其他生理反应，从而使得不同抗原特异性的T细胞对其靶细胞发挥免疫效应。因此，本领域技术人员致力于分离出对PRAME抗原短肽具有特异性的TCR，以及将该TCR转导T细胞来获得对PRAME抗原短肽具有特异性的T细胞，从而使他们在细胞免疫治疗中发挥作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种识别PRAME抗原短肽的T细胞受体。本专利技术的第一方面，提供了一种T细胞受体(TCR)，所述TCR能够与PYLGQMINL-HLAA2402复合物结合。在另一优选例中，所述TCR包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域的CDR3的氨基酸序列为VVRGNNARLM(SEQIDNO:12)；和/或所述TCRβ链可变域的CDR3的氨基酸序列为ASSGSAAGANVLT(SEQIDNO:15)。在另一优选例中，所述TCRα链可变域的3个互补决定区(CDR)为：αCDR1-NSASQS(SEQIDNO:10)αCDR2-VYSSGN(SEQIDNO:11)αCDR3-VVRGNNARLM(SEQIDNO:12)；和/或所述TCRβ链可变域的3个互补决定区为：βCDR1-SEHNR(SEQIDNO:13)βCDR2-FQNEAQ(SEQIDNO:14)βCDR3-ASSGSAAGANVLT(SEQIDNO:15)。在另一优选例中，所述TCR包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域为与SEQIDNO:1具有至少90％序列相同性的氨基酸序列；和/或所述TCRβ链可变域为与SEQIDNO：5具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。在另一优选例中，所述TCR包含α链可变域氨基酸序列SEQIDNO:1。在另一优选例中，所述TCR包含β链可变域氨基酸序列SEQIDNO:5。在另一优选例中，所述TCR为αβ异质二聚体，其包含TCRα链恒定区TRAC*01和TCRβ链恒定区TRBC1*01或TRBC2*01。在另一优选例中，所述TCR的α链氨基酸序列为SEQIDNO：3和/或所述TCR的β链氨基酸序列为SEQIDNO:7。在另一优选例中，所述TCR是可溶的。在另一优选例中，所述TCR为单链。在另一优选例中，所述TCR是由α链可变域与β链可变域通过肽连接序列连接而成。在另一优选例中，所述TCR在α链可变区氨基酸第11、13、19、21、53、76、89、91、或第94位，和/或α链J基因短肽氨基酸倒数第3位、倒数第5位或倒数第7位中具有一个或多个突变；和/或所述TCR在β链可变区氨基酸第11、13、19、21、53、76、89、91、或第94位，和/或β链J基因短肽氨基酸倒数第2位、倒数第4位或倒数第6位中具有一个或多个突变，其中氨基酸位置编号按IMGT(国际免疫遗传学信息系统)中列出的位置编号。在另一优选例中，所述TCR的α链可变域氨基酸序列包含SEQIDNO:32和/或所述TCR的β链可变域氨基酸序列包含SEQIDNO:34。在另一优选例中，所述TCR的氨基酸序列为SEQIDNO:30。在另一优选例中，所述TCR包括(a)除跨膜结构域以外的全部或部分TCRα链；以及(b)除跨膜结构域以外的全部或部分TCRβ链；并且(a)和(b)各自包含功能性可变结构域,或包含功能性可变结构域和所述TCR链恒定结构域的至少一部分。在另一优选例中，半胱氨酸残基在所述TCR的α和β链恒定域之间形成人工二硫键。在另一优选例中，在所述TCR中形成人工二硫键的半胱氨酸残基取代了选自下列的一组或多组位点：TRAC*01外显子1的Thr48和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的Ser57；TRAC*01外显子1的Thr45和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的Ser77；TRAC*01外显子1的Tyr10和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的Ser17；TRAC*01外显子1的Thr45和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的Asp59；TRAC*01外显子1的Ser15和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的Glu15；TRAC*01外显子1的Arg53和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的Ser54；TRAC*01外显子1的Pro89和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的Ala19；和TRAC*01外显子1的Tyr10和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的Glu20。在另一优选例中，所述TCR的α链氨基酸序列为SEQIDNO:26和/或所述TCR的β链氨基酸序列为SEQIDNO:28。在另一优选例中，所述TCR的α链可变区与β链恒定区之间含有人工链间二硫键。在另一优选例中，其特征在于，在所述TCR中形成人工链间二硫键的半胱氨酸残基取代了选自下列的一组或多组位点：TRAV的第46位氨基酸和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的第60位氨基酸；TRAV的第47位氨基酸和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的61位氨基酸；TRAV的第46位氨基酸和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的第61位氨基酸；或TRAV的第47位氨基酸和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的第60位氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，所述TCR能够与PYLGQMINL‑HLAA2402复合物结合；优选地，所述的TCR包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，其特征在于，所述TCRα链可变域的CDR3的氨基酸序列为VVRGNNARLM(SEQ ID NO:12)；和/或所述TCRβ链可变域的CDR3的氨基酸序列为ASSGSAAGANVLT(SEQ ID NO:15)；更优选地，所述TCRα链可变域的3个互补决定区(CDR)为：αCDR1‑NSASQS (SEQ ID NO:10)αCDR2‑VYSSGN (SEQ ID NO:11)αCDR3‑VVRGNNARLM (SEQ ID NO:12)；和/或所述TCRβ链可变域的3个互补决定区为：βCDR1‑SEHNR (SEQ ID NO:13)βCDR2‑FQNEAQ (SEQ ID NO:14)βCDR3‑ASSGSAAGANVLT (SEQ ID NO:15)。

【技术特征摘要】
2016.03.29 CN 20161018891821.一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，所述TCR能够与PYLGQMINL-HLAA2402复合物结合；优选地，所述的TCR包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，其特征在于，所述TCRα链可变域的CDR3的氨基酸序列为VVRGNNARLM(SEQIDNO:12)；和/或所述TCRβ链可变域的CDR3的氨基酸序列为ASSGSAAGANVLT(SEQIDNO:15)；更优选地，所述TCRα链可变域的3个互补决定区(CDR)为：αCDR1-NSASQS(SEQIDNO:10)αCDR2-VYSSGN(SEQIDNO:11)αCDR3-VVRGNNARLM(SEQIDNO:12)；和/或所述TCRβ链可变域的3个互补决定区为：βCDR1-SEHNR(SEQIDNO:13)βCDR2-FQNEAQ(SEQIDNO:14)βCDR3-ASSGSAAGANVLT(SEQIDNO:15)。2.如权利要求1所述的TCR，其特征在于，其包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域为与SEQIDNO:1具有至少90％序列相同性的氨基酸序列；和/或所述TCRβ链可变域为与SEQIDNO：5具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。3.如权利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR的α链和/或β链的C-或N-末端结合有偶联物；优选地，与所述T细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：李懿，林燕梅，相瑞瑞，
申请(专利权)人：广州市香雪制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44