肽嵌合抗原受体T细胞开关和其用途制造技术

本文公开了嵌合抗原受体效应细胞(CAR‑EC)和CAR‑EC开关。可开关CAR‑EC一般是T细胞。一个或多个嵌合抗原受体可以识别CAR‑EC开关上的肽抗原。CAR‑EC和开关可以用于治疗有需要的受试者的病状。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】交叉引用本申请要求2013年10月15日提交的美国临时申请序列号61/891,347、2013年10月25日提交的美国临时申请序列号61/895,704、2014年6月6日提交的美国临时申请序列号62/009,054、2014年7月29日提交的美国临时申请序列号62/030,526、以及2014年7月29日提交的美国临时申请序列号62/030,514的权益，其全部以全文引用的方式并入。
技术介绍
免疫疗法成为化学疗法的有吸引力的替代物，包括使用遗传修饰的T细胞的过继转移“重教”免疫系统以识别并消除恶性肿瘤细胞的免疫疗法。遗传修饰的T细胞表达嵌合抗原受体，其一般由来源于对标靶恶性细胞上的肿瘤相关抗原产生受体特异性的单克隆抗体的信号传导内域、CD3-ζ跨膜域以及细胞外单链可变片段(scFv)组成。在经由嵌合抗原受体结合肿瘤相关抗原后，表达嵌合抗原受体的T细胞(CART细胞)设置对恶性细胞具细胞毒性的免疫反应。这类疗法可以避开化学疗法抗性并且已经显示对复发性/难治性疾病具活性，使得一些慢性淋巴细胞白血病(CLL)和急性成淋巴细胞白血病(ALL)患者持续缓解。然而，这些疗法需要进一步研究和优化，因为其引起不合需要的作用，诸如毒性淋巴细胞减少、血液学标靶的慢性低丙种球蛋白血症、实体肿瘤标靶的致命性脱靶细胞溶解、在使用表达抗CD19抗体的CART细胞的情况下持久的B细胞发育不全并且在一些情况下死亡。控制CART细胞的活性的开关的引入将允许在消除赘生性细胞之后切断CART细胞活性和相关的免疫反应并且将允许B细胞再增殖。新近临床前研究已经展示CART细胞系统可以经由基于抗体的开关控制，其中这种抗体结合标靶细胞(例如，癌细胞)，这阻断CART细胞结合标靶细胞并且“关闭”CAR-T活性。虽然这些系统在概念上允许使用CART细胞可开关地靶向肿瘤，但其可能受困于一系列限制。使用半胱氨酸或赖氨酸对抗体的非特异性标记产生包括可能是非功能性的，具有不可预测的药物动力学和/或免疫原性，并且可能难以优化的变体的异质产物。
技术实现思路
本文公开了嵌合抗原受体效应细胞开关，其包含：结合效应细胞上的嵌合抗原受体的肽抗原；以及结合标靶细胞上的细胞表面分子的靶向部分。肽抗原可以基于或来源于天然存在的肽。肽抗原可以基于或来源于非人类肽。肽抗原可以基于或来源于真核肽。肽抗原可以基于或来源于肽，其中这种肽由酵母表达。肽抗原可以基于或来源于酵母转录因子GCN4。肽抗原可以包含非天然存在的肽。肽抗原可以包含合成肽标签。肽抗原可以基于或来源于选自SEQIDNO:2-7的序列。肽抗原可以包含与选自SEQIDNO:2-7的肽序列至少约50％同源的序列。靶向部分可以包含靶向肽。靶向部分可以包含靶向抗体或抗体片段。靶向抗体或抗体片段可以选自由以下组成的群组：免疫球蛋白、无Fc的免疫球蛋白、和Fab，以及其片段。靶向部分可以选自由以下组成的群组：抗EGFR抗体、抗Her2抗体、抗EGFRvIII抗体、抗CD33抗体、抗CLL-1抗体、抗CEA抗体、抗CD19抗体、抗CD22抗体、抗BCMA抗体和抗CS1抗体，以及其片段。靶向抗体或抗体片段可以包含轻链和重链对，其中轻链和重链由基于或来源于选自由以下组成的群组的核酸序列对的核酸序列编码：SEQIDNO:8和9；SEQIDNO:8和10；SEQIDNO:11和12；SEQIDNO.13和14；SEQIDNO:15和16；SEQIDNO:17和18；以及SEQIDNO:19和20。靶向抗体或抗体片段可以包含轻链和重链对，其中轻链和重链由基于或来源于选自由以下组成的群组的氨基酸序列对的氨基酸序列编码：SEQIDNO:21和22；SEQIDNO:23和24；SEQIDNO.25和26；SEQIDNO:27和28；以及SEQIDNO:27和29。嵌合抗原受体效应细胞开关可以包含轻链和重链对，其中轻链和重链由基于或来源于选自由以下组成的群组的氨基酸序列对的氨基酸序列编码：SEQIDNO:30和29；SEQIDNO:36和29；SEQIDNO:31和28；SEQIDNO:27和32；SEQIDNO:27和33；SEQIDNO:27和34；以及SEQIDNO:27和35。肽抗原可以融合至靶向抗体或抗体片段的末端。肽抗原可以融合至选自由以下组成的群组的靶向抗体或抗体片段的区域：轻链的N端、轻链的C端、重链的N端、Fab重链的C端以及恒定区重链的C端。肽抗原可以嫁接至靶向部分中。靶向部分可以包含靶向抗体或抗体片段。肽抗原可以嫁接至选自CH1域、CH2域、CH3域、CL域、VH域、VL域以及铰链区的靶向抗体或抗体片段的区域中。肽抗原可以嫁接于选自CH1域、CH2域、CH3域、CL域、VH域、VL域、重链、轻链以及铰链区的靶向抗体或抗体片段的两个区域之间，其中这两个区域是相邻的。肽抗原可以嫁接至靶向抗体或抗体片段的环中。肽抗原可以嫁接至靶向抗体或抗体片段的恒定域的环中。肽抗原可以嫁接于靶向抗体或抗体片段的铰链区与重链恒定域之间。肽抗原可以置换靶向抗体或抗体片段的一个或多个氨基酸。肽抗原可以嫁接至靶向抗体或抗体片段中而不置换氨基酸。嵌合抗原受体效应细胞可以进一步包含连接肽抗原和靶向部分的连接子。连接子可以是连接肽抗原和靶向部分的肽，其中靶向部分包含靶向多肽。连接子可以包含约1个至约20个氨基酸。连接子可以包含基于或来源于选自SEQIDNO:38-42的序列的序列。肽抗原可以包含酵母转录因子GCN4或其同源物并且靶向部分选自由以下组成的群组：抗Her2抗体、抗BCMA抗体、抗CD19抗体、抗CEA抗体以及其片段。标靶细胞可以是癌细胞。细胞表面分子可以是肿瘤相关抗原。细胞表面分子可以选自由以下组成的群组：分化簇蛋白、受体、整合膜蛋白以及糖蛋白。嵌合抗原受体效应细胞开关的均质度可以为至少约90％。本文进一步公开了医药组合物，其包含：包含以下的嵌合抗原受体效应细胞开关：结合效应细胞上的嵌合抗原受体的肽抗原，和结合标靶上的细胞表面分子的靶向部分；以及医药学上可接受的盐、赋形剂和/或媒剂。本文公开了试剂盒，其包含：包含以下的嵌合抗原受体效应细胞开关：结合效应细胞上的嵌合抗原受体的肽抗原，和结合标靶细胞上的细胞表面分子的靶向部分；以及包含结合至嵌合抗原受体效应细胞开关的肽抗原的嵌合抗原受体的嵌合抗原受体效应本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种嵌合抗原受体效应细胞开关，其包含：a.结合效应细胞上的嵌合抗原受体的肽抗原；以及b.结合标靶细胞上的细胞表面分子的靶向部分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.15 US 61/891,347;2013.10.25 US 61/895,704;1.一种嵌合抗原受体效应细胞开关，其包含：
a.结合效应细胞上的嵌合抗原受体的肽抗原；以及
b.结合标靶细胞上的细胞表面分子的靶向部分。
2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗原
是基于或来源于天然存在的肽。
3.如权利要求2所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗原
是基于或来源于非人类肽。
4.如权利要求2所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗原
是基于或来源于真核肽。
5.如权利要求2所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗原
是基于或来源于肽，其中所述肽由酵母表达。
6.如权利要求2所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗原
是基于或来源于酵母转录因子GCN4。
7.如权利要求1所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗原
包含非天然存在的肽。
8.如权利要求7所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗原
包含合成肽标签。
9.如权利要求1所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗原
是基于或来源于选自SEQIDNO:2-7的序列。
10.如权利要求1所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗
原包含与选自SEQIDNO:2-7的肽序列至少约50％同源的序列。
11.如权利要求1所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述靶向
部分包含靶向肽。
12.如权利要求1所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述靶向
部分包含靶向抗体或抗体片段。
13.如权利要求12所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述靶向
抗体或抗体片段选自由以下组成的群组：免疫球蛋白、无Fc的免疫球蛋白、
和Fab，以及其片段。
14.如权利要求12所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述靶向
部分选自由以下组成的群组：抗EGFR抗体、抗Her2抗体、抗EGFRvIII
抗体、抗CD33抗体、抗CLL-1抗体、抗CEA抗体、抗CD19抗体、抗
CD22抗体、抗BCMA抗体和抗CS1抗体，以及其片段。
15.如权利要求12所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述靶向
抗体或抗体片段包含轻链和重链对，其中所述轻链和重链由基于或来源于
选自由以下组成的群组的核酸序列对的核酸序列编码：SEQIDNO:8和9；
SEQIDNO:8和10；SEQIDNO:11和12；SEQIDNO.13和14；SEQID
NO:15和16；SEQIDNO:17和18；以及SEQIDNO:19和20。
16.如权利要求12所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述靶向
抗体或抗体片段包含轻链和重链对，其中所述轻链和重链由基于或来源于
选自由以下组成的群组的氨基酸序列对的氨基酸序列编码：SEQIDNO:21
和22；SEQIDNO:23和24；SEQIDNO.25和26；SEQIDNO:27和28；
以及SEQIDNO:27和29。
17.如权利要求12所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述嵌合
抗原受体效应细胞开关包含轻链和重链对，其中所述轻链和重链由基于或
来源于选自由以下组成的群组的氨基酸序列对的氨基酸序列编码：SEQID
NO:30和29；SEQIDNO:36和29；SEQIDNO:31和28；SEQIDNO:27
和32；SEQIDNO:27和33；SEQIDNO:27和34；以及SEQIDNO:27
和35。
18.如权利要求12所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗
原融合至所述靶向抗体或抗体片段的末端。
19.如权利要求12所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗
原融合至选自由以下组成的群组的所述靶向抗体或抗体片段的区域：轻链
的N端、轻链的C端、重链的N端、Fab重链的C端以及恒定区重链的C
端。
20.如权利要求1所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗
原嫁接至所述靶向部分中。
21.如权利要求20所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述靶向
部分包含靶向抗体或抗体片段。
22.如权利要求21所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗
原嫁接至选自CH1域、CH2域、CH3域、CL域、VH域、VL域以及铰链区
的所述靶向抗体或抗体片段的区域中。
23.如权利要求21所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗
原嫁接于选自CH1域、CH2域、CH3域、CL域、VH域、VL域、重链、轻
链以及铰链区的所述靶向抗体或抗体片段的两个区域之间，其中所述两个
区域是相邻的。
24.如权利要求21所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗
原嫁接至所述靶向抗体或抗体片段的环中。
25.如权利要求24所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗
原嫁接至所述靶向抗体或抗体片段的恒定域的环中。
26.如权利要求21所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其中所述肽抗
原嫁接于所述靶向抗体或抗体片段的铰链区与重链恒定域之间。
27.如权利要求22至26中任一项所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，
其中所述肽抗原置换所述靶向抗体或抗体片段的一个或多个氨基酸。
28.如权利要求22至26中任一项所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，
其中所述肽抗原嫁接至所述靶向抗体或抗体片段中而不置换氨基酸。
29.如权利要求1所述的嵌合抗原受体效应细胞开关，其进一步包含<...

【专利技术属性】
技术研发人员：特拉维斯·杨，金灿赫，彼得·G·舒尔茨，
申请(专利权)人：加州生物医学研究所，
类型：发明
国别省市：美国;US